Name: Um modelo de dano peritoneal induzido por gluconato de clorexidina em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-04-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 4 min 25 s
Description: Aprenda a estabelecer um modelo de diálise peritoneal em camundongos usando gluconato de clorexidina para estudar fibrose peritoneal. Este protocolo simples e visível facilita pesquisas sobre alterações fisiopatológicas durante a terapia.

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Agradecemos sinceramente a Shin-Han Tseng pela discussão crítica e execução parcial do estudo. Este estudo foi apoiado por EDAHP110003 e NCKUEDA110002 da Fundação de Pesquisa do Hospital E-DA e da Universidade Nacional Cheng Kung, Taiwan.

Todos os experimentos com camundongos foram aprovados pelo Laboratory Animal Center do E-DA Hospital/ I-Shou University e manuseados de acordo com o "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals" (NRC, EUA 2011). Camundongos C57BL/6 machos, com 7-8 semanas de idade, foram utilizados para o presente estudo.
1. Preparação química
<ol><li>Preparar o irritante químico diluindo gluconato de clorexidina a 0,1% (CG, ver Tabela de Materiais) em etanol a 15%.</li>
</ol>2. Tratamento dos animais
<ol><li>Atribua três ratos como grupo de controle. Realizar injeção intraperitoneal (i.p.) de 1 mL/kg de solução fisiológica (SF) a 0,9% em dias alternados por 3 semanas, totalizando nove vezes.</li>
	<li>Atribua três camundongos ao grupo de fibrose peritoneal. Induzir fibrose peritoneal usando gluconato de clorexidina (GC) administrando injeções i.p. de 0,1% de GC em etanol a 15% (passo 1.1) na dose de 12,5 μL/g de peso corporal. Realize isso a cada dois dias por 3 semanas, por um total de nove vezes.</li>
</ol>3. Testes de função peritoneal (teste de equilíbrio peritoneal modificado)
<ol><li>Preparar uma solução de diálise contendo 4,25% de glicose. Extrair 0,5 ml de amostra de dialisato com uma seringa e, em seguida, verificar a concentração de glicose na amostra de dialisato. NOTA: A concentração de glicose é determinada de acordo com o método hexoquinase/G6PD. As amostras de dialisato foram acessadas para o ensaio de Glu 2 do tipo L e investigadas com um analisador bioquímico (ver Tabela de Materiais). Esta é a concentração inicial de glicose do dialisato.</li>
	<li>Anestesiar os ratinhos por injeção intramuscular de Zoletil e Xilazina (preparados numa proporção de 1:2 por volume, ver Tabela de Materiais) na dose de 20 μL/20 gw. Além disso, use pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento sob anestesia.</li>
	<li>Realizar instilação i.p. da solução de diálise (2 mL/20 g de peso corporal).</li>
	<li>Após 30 min, avaliar e verificar a profundidade da anestesia com ausência do reflexo de pinça dos dedos. Em seguida, realizar uma incisão vertical na linha média do abdome (abaixo do processo xifoide), em seguida, abrir o abdome dos camundongos e coletar o líquido intraperitoneal com uma seringa (definido como "volume 1"). Em seguida, meça o peso de um algodão limpo e seco e coloque o algodão na cavidade abdominal dos camundongos para absorver o líquido intraperitoneal residual. Por fim, meça novamente o peso do algodão. OBS: O ganho de peso do algodão é igual ao peso do líquido residual intraperitoneal. Em seguida, converta para o volume obtido (gravidade específica: 1 g/cm3; definido como "volume 2"). O volume final do dialisato é o volume 1 mais o volume 2.</li>
	<li>Use 0,5 mL de amostra de dialisato (dialisato final) para medir a concentração de glicose. Esta é a concentração final de glicose do dialisato.</li>
	<li>Calcule a ultrafiltração líquida usando a fórmula15: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq01.jpg" style="margin: auto;"></li>
	<li>Calcular a permeabilidade peritoneal utilizando a seguinte fórmula15: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/63903/63903eq02.jpg" style="margin: auto;"></li>
</ol>4. Preparo tecidual do músculo da parede abdominal e fígado e análise histológica
<ol><li>Sacrificar os camundongos por punção cardíaca (flebotomia)3,16.</li>
	<li>Corte da parede abdominal (1 cm x 1 cm) e hepatectomia total. Fixe a parede abdominal e os tecidos hepáticos dos ratos durante a noite em formalina tamponada neutra a 10%.</li>
	<li>Preparar cortes de parafina de 3 μm de espessura do músculo da parede abdominal e do fígado e realizar análise histológica seguindo relato publicado anteriormente17.</li>
	<li>Avaliar o peritônio parietal da parede abdominal e o peritônio visceral das superfícies hepáticas dos camundongos utilizando morfometria18.</li>
	<li>Realizar análises estatísticas usando estatística e software gráfico (consulte Tabela de Materiais). Expresse todos os dados como média ± DP e analise a significância estatística usando um teste t19. Defina valores com P &lt; 0,05 como resultados significativos.</li>
</ol>

<ol><li>Han, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+outcome+of+CAPD%3A+twenty-five+years%27+experience+in+a+single+Korean+center%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Improving outcome of CAPD: twenty-five years' experience in a single Korean center.</a> Peritoneal Dialysis International. 27 (4), 432-440 (2007).</li>
<li>Kawaguchi, Y., Hasegawa, T., Nakayama, M., Kubo, H., Shigematu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+affecting+the+longevity+of+the+continuous+peritoneal+dialysis+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International+Supplements%22%5BJournal%5D)">Issues affecting the longevity of the continuous peritoneal dialysis therapy.</a> Kidney International Supplements. 62, 105-107 (1997).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+D+can+ameliorate+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+and+functional+deterioration+through+the+inhibition+of+epithelial-to-mesenchymal+transition+of+mesothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Vitamin D can ameliorate chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis and functional deterioration through the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition of mesothelial cells.</a> BioMed Research International. 2015, 595030(2015).</li>
<li>Nakamoto, H., Kawaguchi, Y., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+technique+survival+on+peritoneal+dialysis+better+in+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Is technique survival on peritoneal dialysis better in Japan.</a> Peritoneal Dialysis International. 26 (2), 136-143 (2006).</li>
<li>Schaefer, F., Klaus, G., Muller-Wiefel, D. E., Mehls, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+practice+of+peritoneal+dialysis+in+children%3A+results+of+a+longitudinal+survey.+Mid+European+Pediatric+Peritoneal+Dialysis+Study+Group+%28MEPPS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Current practice of peritoneal dialysis in children: results of a longitudinal survey. Mid European Pediatric Peritoneal Dialysis Study Group (MEPPS).</a> Peritoneal Dialysis International. 19, Suppl 2 445-449 (1999).</li>
<li>Woodrow, G., Turney, J. H., Brownjohn, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technique+failure+in+peritoneal+dialysis+and+its+impact+on+patient+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Technique failure in peritoneal dialysis and its impact on patient survival.</a> Peritoneal Dialysis International. 17 (4), 360-364 (1997).</li>
<li>Schmidt, D. W., Flessner, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+basic+and+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of encapsulating peritoneal sclerosis: basic and translational research.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 10-15 (2008).</li>
<li>Augustine, T., Brown, P. W., Davies, S. D., Summers, A. M., Wilkie, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulating+peritoneal+sclerosis%3A+clinical+significance+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Clinical+Practice%22%5BJournal%5D)">Encapsulating peritoneal sclerosis: clinical significance and implications.</a> Nephron Clinical Practice. 111 (2), 149-154 (2009).</li>
<li>Di Paolo, N., Nicolai, G. A., Garosi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+peritoneum%3A+from+histological+studies+to+mesothelial+transplant+through+animal+experimentation%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">The peritoneum: from histological studies to mesothelial transplant through animal experimentation.</a> Peritoneal Dialysis International. 28, Suppl 5 5-9 (2008).</li>
<li>Fusshoeller, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histomorphological+and+functional+changes+of+the+peritoneal+membrane+during+long-term+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Histomorphological and functional changes of the peritoneal membrane during long-term peritoneal dialysis.</a> Pediatric Nephrology. 23 (1), 19-25 (2008).</li>
<li>Goffin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+membrane+structural+and+functional+changes+during+peritoneal+dialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Dialysis%22%5BJournal%5D)">Peritoneal membrane structural and functional changes during peritoneal dialysis.</a> Seminars in Dialysis. 21 (3), 258-265 (2008).</li>
<li>Ito, T., Yorioka, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+damage+by+peritoneal+dialysis+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+and+Experimental+Nephrology%22%5BJournal%5D)">Peritoneal damage by peritoneal dialysis solutions.</a> Clinical and Experimental Nephrology. 12 (4), 243-249 (2008).</li>
<li>Io, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SAHA+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">SAHA suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Peritoneal Dialysis International. 35 (3), 246-258 (2015).</li>
<li>Yoh, K., Ojima, M., Takahashi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Th2-biased+GATA-3+transgenic+mice+developed+severe+experimental+peritoneal+fibrosis+compared+with+Th1-biased+T-bet+and+Th17-biased+RORgammat+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Animals%22%5BJournal%5D)">Th2-biased GATA-3 transgenic mice developed severe experimental peritoneal fibrosis compared with Th1-biased T-bet and Th17-biased RORgammat transgenic mice.</a> Experimental Animals. 64 (4), 353-362 (2015).</li>
<li>Karl, Z. J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peritoneal+Equilibration+Test%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Peritoneal Equilibration Test.</a> Peritoneal Dialysis International. 7 (3), 138-148 (1987).</li>
<li>Lee, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+implication+of+vitamin+D+nanomedicine+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">The clinical implication of vitamin D nanomedicine for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 14, 9665-9675 (2019).</li>
<li>Goldner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+the+masson+trichrome+technique+for+routine+laboratory+purposes%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Modification of the masson trichrome technique for routine laboratory purposes.</a> The American Journal of Pathology. 14 (2), 237-243 (1938).</li>
<li>Cheng, F. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+application+of+magnetite+nanoparticle-mediated+vitamin+D3+delivery+for+peritoneal+dialysis-related+peritoneal+damage%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Novel application of magnetite nanoparticle-mediated vitamin D3 delivery for peritoneal dialysis-related peritoneal damage.</a> International Journal of Nanomedicine. 16, 2137-2146 (2021).</li>
<li>Ross, A., Willson, V. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoss%2C+A+%22Basic+and+Advanced+Statistical+Tests%3A+Writing+Results+Sections+and+Creating+Tables+and+Figures%22">Basic and Advanced Statistical Tests: Writing Results Sections and Creating Tables and Figures</a>. , SensePublishers. 13-16 (2017).</li>
<li>Suga, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventive+effect+of+pirfenidone+against+experimental+sclerosing+peritonitis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Preventive effect of pirfenidone against experimental sclerosing peritonitis in rats.</a> Experimental and Toxicologic Pathology. 47 (4), 287-291 (1995).</li>
<li>Ishii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+sclerosing+encapsulating+peritonitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An experimental sclerosing encapsulating peritonitis model in mice.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 16 (6), 1262-1266 (2001).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotides+against+collagen-binding+stress+protein+HSP47+suppress+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotides against collagen-binding stress protein HSP47 suppress peritoneal fibrosis in rats.</a> Kidney International. 64 (3), 887-896 (2003).</li>
<li>Mishima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+expression+of+heat+shock+protein+47+in+rat+model+of+peritoneal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Peritoneal+Dialysis+International%22%5BJournal%5D)">Enhanced expression of heat shock protein 47 in rat model of peritoneal fibrosis.</a> Peritoneal Dialysis International. 23 (1), 14-22 (2003).</li>
<li>Kushiyama, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+liposome-encapsulated+clodronate+on+chlorhexidine+gluconate-induced+peritoneal+fibrosis+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrology+Dialysis+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Effects of liposome-encapsulated clodronate on chlorhexidine gluconate-induced peritoneal fibrosis in rats.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 26 (10), 3143-3154 (2011).</li>
<li>Nishino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+lymphocyte+infiltration+in+the+progression+of+mouse+peritoneal+fibrosis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Failure%22%5BJournal%5D)">Involvement of lymphocyte infiltration in the progression of mouse peritoneal fibrosis model.</a> Renal Failure. 34 (6), 760-766 (2012).</li>
<li>Lua, I., Li, Y., Pappoe, L. S., Asahina, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofibroblastic+conversion+and+regeneration+of+mesothelial+cells+in+peritoneal+and+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Myofibroblastic conversion and regeneration of mesothelial cells in peritoneal and liver fibrosis.</a> The American Journal of Pathology. 185 (12), 3258-3273 (2015).</li>
<li>Kitamura, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+suppresses+peritoneal+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Chemico-Biological+Interactions%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate suppresses peritoneal fibrosis in mice.</a> Chemico-Biological Interactions. 195 (1), 95-104 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Neste estudo, um modelo de DP em camundongos é apresentado por injeção i.p. de GC, e os resultados mostraram fibrose peritoneal e deterioração funcional neste modelo, o que mimetizou a condição do paciente em DP.
Há várias etapas críticas no protocolo. Primeiro, para a realização de uma injeção i.p. de GC ou NS, a pele da parede abdominal do camundongo deve ser captada com fórceps para evitar lesão intraperitoneal induzida por punção. Em segundo lugar, durante a coleta do peritônio da parede a...

A diálise peritoneal (DP) é um tipo de terapia renal substitutiva. No entanto, a DP tem problemas que não podem ser resolvidos. Por exemplo, o tratamento prolongado da DP pode causar dano peritoneal, eventualmente levando à falha da ultrafiltração e à suspensão do tratamento 1,2,3,4,5,6. A fibrose peritoneal é uma das complicações maisgraves7,8. A fibrose peritoneal é caracterizada pela deposição e acúmulo de matriz extracelular no interstício, neoangiogênese e vasculopatia do peritônio9,10.
As principais causas dessas alterações peritoneais são as peritonites recorrentes e a não biocompatibilidade do dialisato, que são hiperosmóticas, glicose elevada, pH baixo e acúmulo de produtos da degradação da glicose11,12. Portanto, modelos experimentais animais adequados podem ajudar os pesquisadores a estudar melhor as alterações fisiológicas e patológicas do peritônio durante a terapia da DP. Portanto, o estabelecimento de um modelo animal de DP é importante para melhorar a tecnologia de DP e a eficácia dialítica e prolongar a sobrevida dos pacientes. Este estudo teve como objetivo gerar um modelo de DP em camundongos por injeção intraperitoneal (i.p.) de gluconato de clorexidina (CG), conforme descrito anteriormente13,14. Este modelo de camundongo PD é simples, fácil de usar e viável em comparação com outros modelos animais PD.

<table><tbody><tr><td>0,9% de solução salina normal</td><td>Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City,</td> <td>Taiwan-10</td><td></td></tr><tr><td>% de formalina tamponada neutra</td><td>Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan</td><td>00002A</td><td></td></tr><tr><td>Analisador bioquímico automático</td><td>Hitachi Ltd., Tóquio, Japão</td><td>Labospect Série 008</td><td>para determinação da concentração de glicose</td></tr><tr><td>Solução de digluconato de clorexidina, 20% em H2O</td><td>Sigma-Aldrich, MO, EUA</td><td>C9394</td><td>diluído a 0,1% com 15% de etanol para injeção</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Avantor Performance Materials, LLC, PA, EUA</td><td>BAKR8006-05</td><td>diluído a 15% com solução salina normal para concentração de trabalho</td></tr><tr><td>Glicose (Dianeal)</td><td>Baxter International, Inc., IL, EUA</td><td>FNB9896</td><td>Solução de diálise comercial (4,25%)</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0</td><td>GraphPad Software, Inc., CA, EUA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-tipo Glu 2 ensaio</td><td>FUJIFILM Wako, Japão</td><td>461-32403</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine 20</td><td>Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City,</td> <td>Taiwan-Zoletil</td><td></td></tr> <tr><td>50</td><td>Virbac Laboratories, Carros, França</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

um modelo de dano peritoneal induzido por gluconato de clorexidina em camundongos

A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage

A fibrose peritoneal é uma importante complicação da diálise peritoneal (DP). Para investigar e resolver esse problema, um modelo animal apropriado de DP é necessário. O presente protocolo estabelece um modelo de fibrose peritoneal induzida por gluconato de clorexidina (GC) que mimetiza a condição de um paciente com DP. A fibrose peritoneal foi induzida pela injeção intraperitoneal de 0,1% de GC em etanol a 15% por 3 semanas (administrada em dias alternados), totalizando nove vezes em camundongos C57BL/6 machos. Os testes funcionais peritoneais foram então realizados no 22º dia. Após o sacrifício dos camundongos, o peritônio parietal da parede abdominal e o peritônio visceral do fígado foram retirados. Eles eram mais espessos e fibróticos quando analisados microscopicamente após a coloração tricrômico de Masson. A taxa de ultrafiltração diminuiu, e o transporte de massa de glicose indicou um aumento da permeabilidade peritoneal induzido por CG. O modelo de DP assim estabelecido pode ter aplicações no aprimoramento da tecnologia de DP, eficácia dialítica e prolongamento da sobrevida dos pacientes.

Na Figura 1A,B, o peritônio parietal da parede abdominal era marcadamente mais espesso e fibrótico pela coloração tricrômico de Masson17, indicando que no grupo exposto ao GC a fibrose peritoneal é mais grave do que no grupo controle com solução salina (NS). Na Figura 2A,B, o peritônio visceral das superfícies hepáticas também era marcadamente mais espesso e fibrótico, comprovando que no grupo GC-exposto a fibrose periton...

O presente protocolo estabelece um modelo de diálise peritoneal (DP) em camundongos de fibrose peritoneal induzida por gluconato de clorexidina (GC). O modelo atual é simples e fácil de usar em comparação com outros modelos animais de DP.

Um modelo de dano peritoneal induzido por gluconato de clorexidina em camundongos

Peritoneal fibrosis is an important complication of peritoneal dialysis (PD). To investigate and address this problem, an appropriate animal model of PD ...

O estabelecimento de modelo animal para diálise peritoneal, DP, é muito importante. Esperamos que possa melhorar a tecnologia e a eficácia da terapia da DP e, eventualmente, melhorar a sobrevida do paciente. Este modelo de camundongo para diálise peritoneal é simples, fácil de usar e visível em comparação com outros modelos animais de diálise peritoneal.Um modelo animal adequado de diálise peritoneal pode ajudar os pesquisadores a estudar a alteração peritoneal, fisiológica e patológica durante a terapia da DP. A demonstração do procedimento será Fang-Ling Liao, assistente de pesquisa do meu laboratório. Para começar, prepare o irritante químico diluindo gluconato de clorexidina a 0,1% em etanol a 15%.Em seguida, designe três camundongos como grupo controle e injete um mililitro por quilograma de soro fisiológico 0,9% intraperitonealmente a cada dois dias por três semanas para um total de nove vezes. Em seguida, designar três camundongos para o grupo de fibrose peritoneal e induzir a fibrose peritoneal administrando uma injeção intraperitoneal de solução de gluconato de clorexidina a 0,1% preparada anteriormente na dose de 12,5 microlitros por quilograma de peso corporal. Para testes de função peritoneal, preparar uma solução de diálise contendo glicose a 4,25%.Em seguida, use uma seringa para extrair 0,5 mililitros de amostra de dialisato. Preparar uma injeção de zoletil e xilazina e anestesiar os ratos administrando uma injeção intramuscular. Realizar a instalação intraperitoneal da solução de diálise na dose de dois mililitros por 20 gramas de peso corporal.Faça uma pequena incisão na linha média do abdome e colete o líquido intraperitoneal maior com uma seringa. Após 30 minutos, realizar uma incisão vertical na linha média do abdome abaixo do processo xifoide e abrir o abdome do camundongo para coletar o líquido intraperitoneal residual com uma seringa. Em seguida, meça o peso de um cotonete limpo e seco.Coloque o algodão na cavidade abdominal do rato para absorver o líquido intraperitoneal residual e, em seguida, retire-o. Meça o peso do algodão novamente. A coloração tricrômico de Masson mostrou que o peritônio parietal da parede abdominal no grupo exposto ao gluconato de clorexidina era marcadamente mais espesso e fibrótico do que o grupo controle.O peritônio visceral das superfícies hepáticas também foi significativamente mais espesso e fibrótico no grupo exposto ao gluconato de clorexidina do que no grupo da solução salina controle, indicando que a fibrose peritoneal é mais grave no grupo exposto ao gluconato de clorexidina. O grupo exposto ao gluconato de clorexidina mostrou diminuição da taxa de ultrafiltração e aumento do transporte de massa de glicose, indicando que a permeabilidade peritoneal aumenta nos camundongos expostos ao gluconato de clorexidina Ao realizar um procedimento de injeção intraperitoneal, use a pinça e escolha a pele abdominal do camundongo para evitar danos ao órgão intraperitoneal induzidos por punção.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fonte: de Vries, C. R., et.al. Um modelo de inoculação retardada da infecção crônica da ferida por Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra a inoculação tardia de Pseudomonas aeruginosa luminescente em um camundongo com duas feridas dorsais de espessura total cobertas por um curativo transparente. Isso facilita a formação de biofilmes e o estabelecimento de infecções crônicas. O monitoramento regular da bioluminescência permite quantificar a carga bacteriana e acompanhar...

Desenvolvimento de um modelo de camundongo para infecção crônica de feridas cutâneas por Pseudomonas aeruginosa 

Aqui descrevemos um modelo murino diabético romance utilizando camundongos sem pelos para monitoramento em tempo real, não-invasivo, de infecções de ferida biofilme bioluminescentes Pseudomonas aeruginosa. Esse método pode ser adaptado para avaliar a infecção de outras espécies bacterianas e microrganismos geneticamente modificados, incluindo várias espécies biofilmes e testar a eficácia das estratégias de antibiofilm.

Venha para o lado da luz: In Vivo monitoramento de infecções por Pseudomonas aeruginosa biofilme em feridas crônicas em um modelo murino Hairless diabética

Este artigo mostra o método de colocação cirúrgica nos ratos de um cateter intraperitoneal, ligado a uma porta de acesso que está posicionada na parte traseira do animal. Além disso, ele explica o procedimento para uma Nefrectomia 5/6 assemelhar-se o estado urêmica de pacientes com DP.

Técnicas cirúrgicas para a colocação do cateter e nefrectomia 5/6 em modelos murino de diálise Peritoneal

As feridas crônicas são desenvolvidas a partir de feridas agudas em um modelo de mouse diabético induzindo altos níveis de estresse oxidativo após uma ferida cutânea de espessura total. A ferida é tratada com inibidores para catalase e glutationa peroxidase, resultando em comprometimento da cicatrização e desenvolvimento de biofilme por bactérias presentes no microbioma cutâneo.

Protocolo para criar feridas crônicas em camundongos diabéticos

Aqui, nós apresentamos um protocolo para induzir localmente o periodontite apical nos ratos. Nós mostramos como perfurar um furo no dente do rato e expor sua polpa, a fim causar a inflamação local. Métodos de análise para investigar a natureza desta inflamação, tais como Micro-CT e histologia, também são demonstrados.

Induzindo a periodontite apical em camundongos

O presente protocolo descreve um método cirúrgico padronizado para o modelo AAA induzido por elastase através da aplicação direta de elastase à adventitia da aorta abdominal infrarenal em camundongos.

Modelo de Aneurisma De aootico Abdominal do Rato Induzido pela Aplicação Perivascular do Elastase

Este artigo descreve modificações de um procedimento para implantação de cateter de diálise peritoneal em modelo murino para evitar grandes problemas técnicos observados com as técnicas convencionais.

Uma abordagem de implante retrógrado para a colocação de cateter de diálise peritoneal em camundongos

Este estudo apresenta duas técnicas experimentais cruciais: a construção de um modelo de ferida murina para avaliar o fechamento da ferida e a preparação de suspensões unicelulares de pele murina para preservar a viabilidade celular.

Modelos de Ferida em Camundongos e Preparação de Suspensões de Células Únicas

Este manuscrito apresenta um protocolo para estabelecer um modelo de aneurisma de aorta abdominal de camundongo usando cloreto de cálcio e elastase, combinando as vantagens dos métodos de modelagem anteriores. Este modelo pode ser utilizado para investigar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes aos aneurismas da aorta abdominal.

Um modelo de aneurisma de aorta abdominal de camundongo por infiltração periadventícia de cloreto de cálcio e elastase

A administração intraperitoneal de medicamentos é uma abordagem não invasiva segura e eficaz para induzir lesão pancreática. Este estudo comparou cinco protocolos distintos de injeção intraperitoneal em camundongos para induzir graus variados de lesão pancreática e estabeleceu um modelo de lesão pancreática grave para investigar as alterações patológicas e estratégias de tratamento para pancreatite aguda grave (SAP).

Preparando um modelo de camundongos de pancreatite aguda grave por meio de uma combinação de injeção intraperitoneal de ceruleína e lipopolissacarídeo

Aprenda a estabelecer um modelo de diálise peritoneal em camundongos usando gluconato de clorexidina para estudar fibrose peritoneal. Este protocolo simples e visível facilita pesquisas sobre alterações fisiopatológicas durante a terapia.

Um modelo de dano peritoneal induzido por gluconato de clorexidina em camundongos

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