Name: Modelo de Doação em Animais de Grande Porte após Morte Circulatória e Perfusão Regional Normotérmica para Avaliação Cardíaca (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-10T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: Aprenda um modelo de doação após morte circulatória com perfusão regional normotérmica em suínos para avaliação cardíaca. Este método reproduz clinicamente o transplante cardíaco humano.

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Gostaríamos de agradecer a Melanie Borie, Caroline Landry, Henry Aceros e Ahmed Menaouar por sua preciosa ajuda e apoio.

O comitê institucional de cuidados e uso de animais do Centre de Recherche du Centre Hospitalier de l'Université de Montréal (CRCHUM) aprovou todos os protocolos experimentais, e os animais foram tratados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório. Para este protocolo, foram utilizados suínos machos ou fêmeas da raça Large White, com 3-4 meses de idade, pesando entre 50 e 60 kg. O tamanho dos animais pode variar de acordo com os objetivos experimentais dos pesquisadores.
1. Preparo animal e indução anestésica
<ol><li>Pré-medicar o animal com injeção intramuscular de atropina (0,04 mg/kg), midazolam (0,3 mg/kg) e cetamina (20 mg/kg). Administrar isoflurano em concentração expirada final de 1%-3% em 3 L/min O2, utilizando máscara facial para indução e manutenção da anestesia.</li>
	<li>Confirme a anestesia adequada testando um tônus mandibular relaxado e ausência de dor usando a resposta de pinça dos dedos. Certifique-se de que o animal seja colocado em decúbito dorsal e mantido em normotermia com manta térmica.</li>
	<li>Após a confirmação da adequação anestésica, realizar intubação orotraqueal com tubo endotraqueal de 6,5-8 mm, conforme descrito em 10.</li>
	<li>Coloque o monitor de saturação de oxigênio na orelha ou lábio inferior do animal para monitoramento contínuo. Ajustar a ventilação para uma pressão expiratória final positiva (PEEP) de 5 cm H 2 O, uma pressão inspiratória de pico (PIP) de 15 cm H 2 O, uma fração inspirada de oxigênio (FIO 2) de 0,5 e uma frequência respiratória (FR) de 15 respirações/min atingindo um volume corrente (VC) de 6-8 mL/kg e pressão parcial normal de O 2 e CO 2. Ajustar a FR para manter um nível expirado de CO2 final de 35-45 mmHg.</li>
	<li>Obter um acesso intravenoso periférico através da veia auricular usando um cateter de 20 G. Iniciar uma infusão de manutenção de solução salina normal (NaCl a 0,9%) e administrar 2 g de sulfato de magnésio (MgSO4) em bolus intravenoso para prevenir arritmias.</li>
	<li>Prepare os locais cirúrgicos raspando e esfregando adequadamente o tórax e as virilhas. Desinfetar virilha e pescoço usando clorexidina e drape adequadamente, proporcionando acesso venoso e arterial.</li>
	<li>Coloque a almofada de eletrodo cautério nas costas do animal. Colocar o animal em posição de Trendelenburg para facilitar o acesso venoso central.</li>
	<li>Localize a veia jugular direita usando um ultrassom. Uma vez localizada, usando uma agulha, entre na pele em um ângulo de 45° até que o sangue seja visto e a agulha seja vista na veia no ultrassom.</li>
	<li>Coloque o fio-guia na agulha e, em seguida, insira um introdutor percutâneo de bainha venosa central de 7 Fr sobre o fio-guia.</li>
	<li>Remova o fio-guia mantendo o introdutor da bainha no lugar e, em seguida, insira um cateter de Swans-Ganz para garantir as medidas de débito cardíaco e o cateterismo cardíaco direito. NOTA: A veia jugular esquerda pode ser usada em vez da direita. Se o acesso não for possível, inserir o introdutor diretamente na veia jugular interna (esquerda ou direita) após esternotomia mediana. Nesse caso, certifique-se de dissecar a veia.</li>
	<li>Usando a mesma técnica, insira um cateter venoso central (por exemplo, duplo lúmen) na veia jugular esquerda.</li>
	<li>Inserir outro introdutor percutâneo da bainha venosa central de 7 Fr na veia femoral direita usando a técnica de Seldinger conforme descrito nos passos 1.7. a 1.10., para a introdução de um cateter de condutância no ventrículo direito (VD). Isso pode ser feito por via percutânea com ecoguia, ou após esternotomia mediana.</li>
	<li>Permitir um período de estabilidade por 10 minutos após a intubação e manipulação e, em seguida, medir os parâmetros hemodinâmicos e de função cardíaca basais, incluindo pressões pulmonar e sistêmica, débito cardíaco, alças pressão-volume do VD e do VE e ecocardiografia transtorácica.</li>
</ol>2. Estabelecimento de acesso cirúrgico
<ol><li>Com o uso de cautério, realizar incisão mediana da região cervical média até a xifoide. Em seguida, divida a gordura subcutânea, camada por camada, ao longo da linha média, utilizando o eletrocautério para alcançar o periesterno.</li>
	<li>Corte ao redor da fúrcula esternal e use um dedo para retrair e varrer os tecidos moles sob o esterno. Abra o esterno com uma serra óssea e certifique-se de que o esterno está completamente dividido, tendo cuidado com a veia abaixo da parte superior do osso esternal. Cauterizar o esterno e/ou aplicar cera de osso para garantir hemostasia adequada.</li>
	<li>Com o eletrocautério, dissecar e remover o timo, levantando-o do pericárdio. Cauterizar os vasos que suprem o timo da aorta e da veia cava superior (VCS) para evitar sangramento.</li>
	<li>Corte cuidadosamente o pericárdio aberto com o cautério. Insira os dedos sob o pericárdio durante o corte para evitar lesões no coração.</li>
	<li>Administrar 300 unidades/kg de heparina IV para anticoagulação sistêmica. Se o teste estiver disponível, garanta o tempo de coagulação ativado (TCA) ˃ 300 s.</li>
</ol>3. Retirada de terapias mantenedoras da vida e declaração de óbito
<ol><li>Administrar um bolus de 3 mg/kg de propofol IV e, em seguida, interromper a ventilação mecânica e desconectar o tubo endotraqueal. OBS: Esta etapa corresponde à "Retirada do Suporte de Vida" para o lançamento da Perfusão Regional Normomêmica. Para condições de eutanásia, consulte a secção 8.</li>
	<li>Monitorar a pressão arterial e a saturação periférica doO2 . Iniciar tempo de isquemia quente funcional quando a pressão sistólica &lt; 50 mmHg.</li>
	<li>Estabelecer parada circulatória quando houver assistolia (ou fibrilação ventricular) e ausência de pulsatilidade arterial. Iniciar uma fase mínima de observação de 5 minutos após a parada circulatória ser estabelecida (período de afastamento) e, posteriormente, declarar a morte do animal.</li>
</ol>4. Colocação da perfusão regional normotérmica toracoabdominal
<ol><li>Com o uso do cautério, dissecar cuidadosamente o espaço aortopulmonar. Retrair inferiormente a via de saída do VD, a artéria pulmonar à esquerda e a aorta à direita para evitar lesões diretas a esta última. Leve uma ajuda de assistentes, se necessário, durante esta etapa.</li>
	<li>Dissecar e ligar os vasos supra-aórticos para evitar e excluir a perfusão cerebral. Alternativamente, aplique uma grande braçadeira cruzada sobre os vasos.</li>
	<li>Inserir dois cateteres 18G nas carótidas bilateralmente distalmente à oclusão para avaliar o fluxo sanguíneo potencial para o cérebro. Coletar e medir o sangue durante todo o experimento e reinfundir através do circuito NRP.</li>
	<li>Com metzenbaum e pinça de ângulo reto, dissecar delicadamente entre a VCS e a artéria inominada e entre a VCI e o pericárdio. Circundar a VCS e a VCI usando uma fita umbilical ou uma sutura simples de 0-seda e prenda-as com um torniquete.</li>
	<li>Com sutura 3-0, colocar duas suturas concêntricas em bolsa na adventícia da aorta ascendente distal; Evite suturas de espessura total. Coloque uma sutura em bolsa no átrio direito (AD). Fixe todas as suturas com torniquete.</li>
	<li>Montar e orientar o sistema NRP de acordo com as necessidades dos pesquisadores e experimentais. Para este protocolo, utilizar um circuito de ECMO com bomba centrífuga, preparado com 2 L de solução cristaloide contendo 500 mg de Solumedrol, 200 mL de bicarbonato de sódio (NaOH) a 8,4%, 300 unidades/kg de heparina e 2 g de MgSO4. OBS: A configuração utilizada aqui é semelhante à utilizada pelos perfusionistas da instituição na divisão de cirurgia cardíaca.</li>
	<li>Com uma cânula arterial de 17 a 21 F, canular a aorta e, em seguida, apertar o torniquete segurando a sutura em bolsa para fixar a cânula no lugar. NOTA: Alternativamente, insira uma cânula de oxigenador de membrana extracorpórea (ECMO) usando a técnica de Seldinger para minimizar a perda de sangue. Outro método consiste no uso de uma cânula arterial de bypass padrão. A cânula aórtica é então conectada à linha arterial do circuito NRP usando um conector 3/8-3/8; garantir o desarejamento completo para evitar embolia gasosa.</li>
	<li>Crie uma incisão de 5 mm no centro da corda da bolsa no AD e, em seguida, dilate-a usando um instrumento de ângulo pequeno como um ângulo reto ou estalo. Cubra a incisão com um dedo para evitar sangramento excessivo.</li>
	<li>Use uma cânula venosa de duplo estágio para canular o AR e, em seguida, aperte as suturas em bolsa usando um torniquete para fixar a cânula no lugar.</li>
	<li>Conecte as cânulas à linha venosa do circuito NRP usando um conector 1/2-3/8 e garanta o esvaziamento completo para evitar um bloqueio de ar no sistema.</li>
	<li>Certifique-se de que um mínimo de 15 minutos tenha se passado entre a declaração de óbito e o início da NRP para abranger pelo tempo necessário na prática clínica a preparação, o drapeamento e o acesso ao coração.</li>
	<li>Iniciar a PNR 15 minutos após o início do tempo de isquemia quente funcional. Manter a normotermia durante todo o procedimento. Ajustar os fluxos progressivamente até atingir um índice de perfusão de 2,5 L/min/m2. Reiniciar a ventilação mecânica com FIO2 de 50% e TV de 6 mL/kg. NOTA: Modifique essas configurações de acordo com o desenho experimental.</li>
	<li>Infundir continuamente 10 μg/kg/min de dopamina e 4 unidades/min de vasopressina IV. Use epinefrina e noradrenalina durante a perfusão inicial e, em seguida, titule-as conforme necessário para ajudar na regulação da pressão, mantendo a pressão arterial acima de 50 mmHg.</li>
</ol>5. Manutenção da reperfusão e alvos para o desmame
<ol><li>Reperfundir o coração por 30 minutos antes de tentar desmamar para NRP. Se o desmame não for bem-sucedido, realizar mais 15 min de reperfusão para apoiar com NRP antes de tentar desmamar novamente por um tempo máximo total de reperfusão de 180 min.</li>
	<li>Proceder à avaliação cardíaca após o desmame bem-sucedido. Se o desmame não for alcançado após esse período, interrompa o experimento e relate o problema. NOTA: Deve ser adaptado aos objetivos de cada investigador.</li>
	<li>Avalie os critérios de desmame do PNR e certifique-se de que todos os critérios sejam atendidos, conforme detalhado na Tabela 1.</li>
</ol>6. Avaliação da recuperação cardíaca
<ol><li>Gerar análises de alça pressão-volume (PV) para medir a contratilidade cardíaca. O cateter de condutância permite medidas contínuas das relações VE-PV.<ol><li>Obter registros em estado estacionário para gerar parâmetros dependentes do volume, trabalho braçal e pressão desenvolvida, e ocluir a VCI com uma fita umbilical para gerar parâmetros independentes de volume através da oclusão, ou seja, trabalho de curso recrutável pré-carga.</li>
	</ol></li>
	<li>Medir a pressão venosa central, pressão de artéria pulmonar, débito cardíaco, pressão de VD e pressão de oclusão de capilar pulmonar usando o cateter de Swans-Ganz introduzido no início do experimento.</li>
	<li>Analise a função cardíaca através da ecocardiografia utilizando uma sonda transesofágica padrão e uma sonda transtorácica colocada diretamente sobre o coração.</li>
	<li>Realizar avaliações metabólicas através da coleta de amostras de sangue arterial e venoso para análises. Extrair sangue diretamente do seio coronário para avaliar a função metabólica do coração especificamente. Analise os níveis de gases sanguíneos e lactato.</li>
	<li>Além disso, coletar biópsias miocárdicas do VD e do VE, se necessário. Obter amostras de outros órgãos transplantáveis de interesse (por exemplo, pulmões, fígado, rins), dependendo dos objetivos do investigador.</li>
</ol>7. Remoção do NRP e avaliação cardíaca
<ol><li>Quando os critérios de desmame forem atendidos, pare o NRP. Retire a cânula do AR e aperte rapidamente a sutura em bolsa para minimizar a perda de sangue. Fixar a sutura com nós e seguir o mesmo procedimento para retirada da cânula aórtica.</li>
	<li>Avaliar a função cardíaca a cada 30 min por 2 h após a interrupção da NRP, conforme descrito nos passos 6.1. até 6.4.</li>
</ol>8. Término do experimento
<ol><li>Após 2 h, colocar um cateter de cardioplegia 16 G ou 18 G na aorta ascendente. Conecte a cânula ao circuito NRP.</li>
	<li>Em seguida, descomprimir as cavidades cardíacas direitas incisando a VCI e as cavidades esquerdas incisando o átrio esquerdo com o uso do cautério.</li>
	<li>Apertar a aorta ascendente após a inserção da cânula e administrar 1,5 L de solução de cardioplegia Del Nido a 4 °C ao coração. Certifique-se de que a pressão de perfusão é de 50 mmHg.</li>
	<li>Interromper a ventilação mecânica e colocar gelo (NaCl a 0,9%) na cavidade torácica após o início da cardioplegia para resfriamento. Prosseguir com a cardiectomia de maneira tradicional assim que a infusão de cardioplegia estiver completa.</li>
	<li>Utilizar o coração coletado para obtenção de biópsias miocárdicas extensas para avaliação e avaliação. Realizar outras biópsias de outros órgãos (por exemplo, pulmões, fígado, rins), dependendo do desenho experimental e do objetivo dos investigadores NOTA: A Figura 1 fornece um resumo das etapas do protocolo mostradas e a Tabela 1 fornece a definição dos parâmetros e critérios utilizados neste estudo.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64009/64009fig01.jpg"> Figura 1: Resumo esquemático do protocolo experimental. Abreviações: NRP = Normothermic Regional Perfusion. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64009/64009fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>Definição/Critérios</td>
		</tr><tr><td>Período de Isquemia Quente Funcional</td>
			<td>Período que se inicia quando a pressão sistólica &lt; 50 mmHg e termina quando a PRN é iniciada. Neste protocolo, esse período é de 15 min</td>
		</tr><tr><td>Prisão Circulatória</td>
			<td>Estabelece-se quando o coração está em assistolia ou fibrilação ventricular</td>
		</tr><tr><td>Período de impasse</td>
			<td>Período que se inicia com a parada circulatória e termina com a declaração de óbito. Neste protocolo, esse período é de 5 min</td>
		</tr><tr><td rowspan="6">Desmame bem-sucedido do NRP</td>
			<td>Uso mínimo de inotrópicos e vasopressores</td>
		</tr><tr><td>IC &gt; 2,2 L/min/m2</td>
		</tr><tr><td>PAM &gt; 55 mmHg</td>
		</tr><tr><td>PAR &lt; 15 mmHg</td>
		</tr><tr><td>POAP &lt; 15 mmHg</td>
		</tr><tr><td>Função normal do VE e VD</td>
		</tr></tbody></table>Tabela 1: Definição representativa dos parâmetros e critérios utilizados neste protocolo. Abreviações: IC = Índice Cardíaco; PAM = Pressão Arterial Média; NRP = Perfusão Regional Normomêmica; POAP = pressão capilar pulmonar; PAR = Pressão de Átrio Direito.

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<li>Aceros, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Celastrol-type+HSP90+modulators+allow+for+potent+cardioprotective+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Celastrol-type HSP90 modulators allow for potent cardioprotective effects.</a> Life Sciences. 227, 8-19 (2019).</li>
<li>Aceros, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-clinical+model+of+cardiac+donation+after+circulatory+death%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Pre-clinical model of cardiac donation after circulatory death.</a> Journal of Visualized Experiments. (150), e59789(2019).</li>
<li>Der Sarkissian, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Celastrol+protects+ischaemic+myocardium+through+a+heat+shock+response+with+up-regulation+of+haeme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Celastrol protects ischaemic myocardium through a heat shock response with up-regulation of haeme oxygenase-1.</a> British Journal of Pharmacology. 171 (23), 5265-5279 (2014).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este manuscrito descreve uma doação em modelo de animais de grande porte após morte circulatória (DCD) seguida de perfusão regional toracoabdominal normotérmica. Neste experimento, o coração é reperfundido por um mínimo de 30 min e um máximo de 3 h antes de ser desmamado do circuito de ECMO. O coração está então funcionando por conta própria por 2 h, o que permite uma avaliação cardíaca valiosa a curto prazo. Portanto, a principal limitação desse protocolo é o seguimento em curto prazo; no entanto, uma avaliação a longo ...

Mais de 300.000 indivíduos morrem na América do Norte a cada ano de insuficiência cardíaca (IC); O transplante cardíaco continua sendo a única opção de tratamento para alguns desses pacientes com doença terminal1. Historicamente, a fonte exclusiva para o transplante cardíaco eram os corações de doadores obtidos após a determinação neurológica do óbito (NDD), mas, mesmo assim, apenas cerca de 40% estavam adequados para otransplante2. Entre 15% a 20% dos pacientes morrem enquanto aguardam a doação de um coração, sendo a escassez de corações doados um dos motivos que cria uma discrepância entre os corações disponíveis e os corações necessários2. Para aumentar o pool de doadores de órgãos, uma consideração importante é a utilização de corações doados após morte circulatória (DCD)3. Há relutância em usar corações DCD porque esses órgãos são invariavelmente submetidos a um período de isquemia desprotegida (quente) após a interrupção da circulação sanguínea e podem sofrer danos irreversíveis. Embora existam relatos de sucesso no transplante cardíaco DCD com excelentes resultados precoces4,5, há necessidade de desenvolver um método de avaliação validado para determinar se esses corações são utilizáveis e potencialmente predizer seu desempenho pós-transplante 6,7. Para limitar os períodos isquêmicos dos corações com DCD e monitorá-los continuamente durante o armazenamento e transporte, foram desenvolvidos sistemas de perfusão cardíaca ex situ 8. No entanto, essa tecnologia conta com máquinas complexas com equipamentos de perfusão e tem um alto custo inicial sem qualquer garantia de que o órgão captado será adequado para transplante. Um novo protocolo para transplante cardíaco DCD baseado em perfusão regional normotérmica (NRP) foi proposto por Messer ecols.3. Essa técnica consiste em restaurar a perfusão miocárdica enquanto o coração ainda está no doador e excluir a circulação cerebral. Permite uma avaliação funcional in situ antes da aquisição3.
Quando se utilizam modelos de grandes animais, o coração porcino é uma das plataformas preferidas para a realização de pesquisas cirúrgicas cardíacas, devido à sua semelhança anatômica com o coração humano. Entretanto, alguns fatores importantes em corações suínos devem ser considerados ao utilizar esse modelo. Por exemplo, o tecido cardíaco suíno é muito frágil e friável e propenso a rupturas, especialmente na artéria pulmonar e no átrio direito9. Outro fator importante a ser considerado é que o coração suíno é muito sensível à isquemia e propenso a arritmias, razão pela qual os antiarrítmicos devem ser administrados rotineiramente a todos os animais antes do experimento; no entanto, ainda é considerado um modelo adequado para o estudo da isquemia aguda no transplantecardíaco9.
Este manuscrito descreve um modelo de doação após morte circulatória seguida de perfusão regional normotérmica toracoabdominal que simula de perto o cenário clínico no transplante cardíaco e tem o potencial de facilitar novos estudos terapêuticos e estratégias de pesquisa translacional.

<table><tbody><tr><td>Amiodarona</td><td></td><td></td><td>Como disponível na instituição</td></tr><tr><td>Angiocath 20G</td><td>BD</td><td>381704</td><td></td></tr><tr><td>Atropina 0,4 mg/mL</td><td></td><td></td><td>Como disponível na instituição</td></tr><tr><td>Biomedicus Bomba Centrífuga</td><td>Medtronic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cardioplegia Solution (Del Nido)</td><td>feito internamente</td><td></td><td>Outra solução pode ser usada a critério do pesquisador</td></tr><tr><td>Lápis de Cauterização</td><td>Covidien</td><td>E2515H</td><td></td></tr><tr><td>Cateter Venoso Central de duplo lúmen</td><td>Cook Medical</td><td>C-UDLM-501J-LSC</td><td></td></tr><tr><td>Introdutor de Bainha Venosa Central 7 Fr</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cateter</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>de Condutância Pacote de CEC Medtronic</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DLP Cânula de Raiz Aórtica</td><td>Medtronic</td><td>12218</td><td></td></tr><tr><td>Cânula venosa de duplo estágio DLP (29 ou 37 F)</td><td>Medtronic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dobutamina</td><td></td><td></td><td>Como disponível na instituição</td></tr><tr><td>Dopamina</td><td></td><td></td><td>Como disponível na instituição</td></tr><tr><td>Eletrodo Polihesivo</td><td>Covidien</td><td>E7507</td><td></td></tr><tr><td>EOPA Cânula Arterial (17 ou 21 F)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Epinefrina</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr>Máscara <td></td><td></td><td>facial O2</td><td>Disponível na instituição</td></tr><tr><td>Luvas, Nitrilo, Médio</td><td>Fischer</td><td>27-058-52</td><td></td></tr><tr><td>Heparina 1000 UI/mL</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Isofurano</td><td></td><td></td> inalado <td>Fornecido pelo biotério da instituição</td></tr><tr><td>Cateter Jelco 16 ou 18 G</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cetamina inj. frasco de 50 mL (100 mg/mL)</td><td>Health Canada</td><td></td><td>É necessária a aprovação da Health Canada</td></tr><tr><td>Lidocaína/xilocaína 1%</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Sulfato de magnésio 5 g/10 mL</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Midazolam inj. frasco de 10 mL (5 mg/mL)</td><td>Health Canada</td><td></td><td>É necessária a aprovação da Health Canada</td></tr><tr><td>Embalagem descartável de entrega MPS Quest</td><td>Medical</td><td>5001102-AS</td><td></td></tr><tr><td>Norepinefrina</td><td></td><td></td><td>Como disponível na instituição</td></tr><tr><td>Solução salina normal (NaCl 0,9%) Saco de 1L</td><td>Baxter</td><td>JB1324</td><td></td></tr><tr><td>Ponteiras de pipeta 1 mL</td><td>Fisherbrand</td><td>02-707-405</td><td></td></tr><tr><td>Propofol 1 mg/mL</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Rocurônio</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Set Admin Prim NF PB C/ Válvula de retenção</td><td>Smith Medical</td><td>21-0442-25</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio (NaOH) 8,4%</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Sofsil 0 revestido com cera</td><td>Covidien</td><td>S316</td><td></td></tr><tr><td>Solumedrol 500 mg/5 mL</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr><tr><td>Ponta de Sucção</td><td>Covidien</td><td>8888501023</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de Sucção 1/4'' x 120''</td><td>Med-Rx</td><td>70-8120</td><td></td></tr><tr><td>Sutura 3.0 Prolene Blu M SH</td><td>Ethicon</td><td>8523H</td><td></td></tr><tr><td>Sutura 5.0 Prolene BB</td><td>Ethicon</td><td>8580H</td><td></td></tr><tr><td>Sutura Prolene Blum 4-0 SH 36</td><td>Ethicon</td><td>8521H</td><td></td></tr><tr><td>Sutura BB 4.0 Prolene</td><td>Ethicon</td><td>8881H</td><td></td></tr><tr><td>Tubo traqueal, 6,5 mm</td><td>Mallinckrodt</td><td>86449</td><td></td></tr><tr><td>Vasopressina</td><td></td><td></td><td>Conforme disponível na instituição</td></tr></tbody></table>

modelo de doação em animais de grande porte após morte circulatória e perfusão regional normotérmica para avaliação cardíaca

Large-Animal Model of Donation after Circulatory Death and Normothermic Regional Perfusion for Cardiac Assessment

O aumento da demanda por transplante cardíaco ao longo dos anos tem alimentado o interesse pela doação após morte circulatória (DCD) para ampliar o pool de doadores de órgãos. Entretanto, o processo de TDC está associado ao risco de lesão tecidual cardíaca devido ao inevitável período de isquemia quente. A perfusão regional normotérmica (NRP) permite a avaliação in situ de órgãos, permitindo a obtenção de corações determinados como viáveis. Aqui, descrevemos um modelo clinicamente relevante de DCD em animais de grande porte seguido de NRP. A morte circulatória é estabelecida em porcos anestesiados pela interrupção da ventilação mecânica. Após um período de isquemia quente predefinido, um oxigenador de membrana extracorpórea (ECMO) é usado por um período de NRP que dura pelo menos 30 min. Durante esse período de reperfusão, o modelo permite a coleta de várias biópsias miocárdicas e amostras de sangue para avaliação cardíaca inicial. Uma vez desmamada a PRN, avaliações bioquímicas, hemodinâmicas e ecocardiográficas da função cardíaca e do metabolismo podem ser realizadas antes da captação do órgão. Esse protocolo simula de perto o cenário clínico previamente descrito para TDC e NRP no transplante cardíaco e tem o potencial de facilitar estudos que visem diminuir a lesão de isquemia-reperfusão e melhorar a preservação e recuperação funcional cardíaca.

Este modelo pré-clínico tem sido utilizado com sucesso em nossa instituição para múltiplos experimentos. Primeiro, demonstramos que os corações DCD, inicialmente reperfundidos com NRP, demonstraram recuperação funcional semelhante após o transplante quando comparados à doação convencional de coração batendo preservado com armazenamento refrigerado. Além disso, utilizamos esse protocolo para mostrar que a avaliação funcional cardíaca após NRP foi preditiva de recuperação pós-transplante. Finalmente, também estudamos os ef...

O protocolo descreve um modelo de doação pós-morte circulatória de animais de grande porte (suínos), seguido de perfusão regional normotérmica toracoabdominal, que simula de perto o cenário clínico do transplante cardíaco e tem o potencial de facilitar estudos e estratégias terapêuticas.

Modelo de Doação em Animais de Grande Porte após Morte Circulatória e Perfusão Regional Normotérmica para Avaliação Cardíaca

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ ...

Este protocolo descreve um modelo animal de grande porte de doação após morte circulatória seguida de perfusão regional normotérmica toracoabdominal que mimetiza com precisão o transplante cardíaco clínico. Isso poderia ser usado para avaliar potenciais estratégias em pesquisa translacional. A principal vantagem deste protocolo é que ele fornece um modelo pré-clínico adequado para transplante cardíaco, dadas as semelhanças das técnicas anatômicas e cirúrgicas entre os corações suínos suínos e humanos.Comece usando uma caneta cauterizada para realizar uma incisão na linha média em um animal anestesiado da região cervical média até o xifoide. Em seguida, divida a gordura subcutânea, camada por camada, ao longo da linha média, utilizando eletrocautério para alcançar o peresterno. Depois de cortar ao redor da fúrcula esternal, use um dedo para retrair e varrer os tecidos moles sob o esterno.Abra o esterno com uma serra óssea, garantindo que o esterno esteja completamente dividido, tendo cuidado com a veia abaixo da parte superior do osso esternal. Em seguida, cauterizar o esterno ou aplicar cera de osso para garantir hemostasia adequada. Em seguida, com o uso do eletrocautério, dissecar e remover o timo, levantando-o do pericárdio e cauterizar os vasos que irrigam o timo da aorta e da veia cava superior para evitar sangramento.Cortar cuidadosamente o pericárdio aberto com cautério. Durante o corte, insira os dedos sob o pericárdio para evitar lesões no coração. Em seguida, administrar 300 unidades por quilograma de heparina por via intravenosa para obter anticoagulação sistêmica.Se o teste estiver disponível, verifique se o tempo de coagulação ativado é superior a 300 segundos. Administrar um bolus de três miligramas por quilograma de propofol por via intravenosa. Em seguida, interrompa a ventilação mecânica e desconecte o tubo endotraqueal.Monitorar a pressão arterial e a saturação periférica de oxigênio. Quando a pressão sistólica for inferior a 50 milímetros de mercúrio, inicie o tempo de isquemia quente funcional. Estabelecer parada circulatória quando houver assistolia e ausência de pulsatilidade arterial.Após a suspensão das terapias de manutenção da vida e confirmação do óbito, retrair inferiormente a via de saída do ventrículo direito, a artéria pulmonar à esquerda e a aorta à direita. Em seguida, dissecar cuidadosamente o espaço pulmonar da aorta com uso de cautério. Aplicar uma pinça cruzada grande sobre os vasos supra-aórticos para evitar e excluir a perfusão cerebral.Em seguida, com a pinça de Metzenbaum e ângulo reto, dissecar delicadamente entre a veia cava superior e a artéria inominada e entre a veia cava inferior e o pericárdio. Circundar as veias cavas superior e inferior com fita umbilical ou sutura simples de seda zero e fixá-las com torniquete. Com sutura 3-0, colocar dois fios concêntricos em bolsa na adventícia da aorta ascendente distal, evitando pontos de espessura total.Em seguida, coloque uma sutura em bolsa no átrio direito antes de fixar todas as suturas com um torniquete. Em seguida, montar e acionar o sistema de perfusão regional normotérmico. Em seguida, canular a aorta com cânula arterial francesa de 17 a 21 e fixá-la no lugar apertando o torniquete, segurando a sutura em bolsa.Crie uma incisão de cinco milímetros no centro da corda da bolsa no átrio direito e dilate-a usando um pequeno instrumento angulado, como um ângulo reto ou estalo. Cubra a incisão com um dedo para evitar sangramento excessivo. Em seguida, utilizar cânula venosa de duplo estágio para canular o átrio direito.Em seguida, prenda a cânula apertando as suturas da bolsa com torniquete. Conecte as cânulas à linha venosa do circuito de perfusão regional normotérmico usando um conector de meia a três sobre oito polegadas, garantindo a desarejamento completa para evitar um bloqueio de ar no sistema. Garantir que tenha decorrido um mínimo de 15 minutos entre a declaração de óbito e o início da perfusão regional normotérmica para abranger o tempo necessário no preparo da prática clínica, no drapeamento e no acesso ao coração.15 minutos após o início do tempo de isquemia quente funcional, iniciar a perfusão regional normotérmica e ajustar progressivamente as taxas de fluxo para atingir um índice de perfusão de 2,5 litros por minuto por metro quadrado. Reinicie a ventilação mecânica com uma fração inspirada de 50% de oxigênio e seis mililitros por quilograma de volume corrente. Quando os critérios de desmame forem atendidos, interrompa a perfusão regional normotérmica.Retire a cânula do átrio direito e aperte rapidamente a sutura em bolsa para minimizar a perda de sangue. Fixar a sutura com nós. Em seguida, siga o mesmo procedimento para remover a cânula aórtica.Analise a função cardíaca através da ecocardiografia utilizando uma sonda transesofágica padrão e uma sonda transtorácica colocada diretamente sobre o coração. Resultados representativos da função cardíaca demonstraram um declínio significativo da função cardíaca após a doação após morte circulatória. Entretanto, esses órgãos demonstraram recuperação funcional semelhante após o transplante quando comparados aos corações transplantados convencionalmente.As medidas de oximetria cerebral durante a perfusão regional normotérmica com os vasos supra-aórticos pinçados confirmaram a ausência de perfusão cerebral adequada, enquanto as medidas de complacência pulmonar durante a perfusão regional normotérmica e após o desmame do suporte não mostraram alteração significativa em relação aos valores basais. O desenvolvimento dessa técnica introduziu a importância de avaliar a transplantabilidade de outros órgãos, como pulmões, rins e fígado, no contexto da doação após morte circulatória e perfusão regional normotérmica.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Um modelo poderoso para perioperatório e crítica lesão renal aguda relacionada com o cuidado é apresentado. Usando hipoperfusão corpo inteiro induzida por parada cardíaca é possível a quase replicar as alterações histológicas e funcionais do AKI clínico.

Cardiac Arrest normotérmica e Ressuscitação Cardiopulmonar: um modelo do rato de isquemia-reperfusão

Há uma escassez de doadores de fígado significativo, e expandiram-se critérios para doadores de fígado. Normotérmica ex vivo fígado perfusão (NEVLP) foi desenvolvido para avaliar e modificar a função do órgão. Este estudo demonstra um modelo do rato de NEVLP e testa a capacidade do peguilado-catalase, para atenuar a lesão hepática de preservação.

Um pequeno modelo Animal de perfusão de fígado normotérmica Ex Vivo

Normotérmica ex situ coração perfusão (ESHP), preserva o coração em um estado semi fisiológico, batendo. Quando executada em um modo de funcionamento, ESHP fornece a oportunidade de realizar avaliações sofisticadas de doador viabilidade de função e de órgão do coração. Aqui, descrevemos nosso método para a avaliação de desempenho do miocárdio durante ESHP.

Normotérmica Ex Situ coração perfusão na modalidade de trabalho: avaliação da função cardíaca e metabolismo

Aqui, nós descrevemos um modelo pré-clínico do grande-animal (porcine) da transplantação transplantação orthotopic do do coração que foi estabelecida firmemente e utilizada para investigar estratégias cardioprotetores novas.

Um modelo pré-clínico porcino de transplante cardíaco ortotópico

Este protocolo apresenta uma abordagem simples e flexível para a avaliação de novos agentes condicionantes ou estratégias para aumentar a viabilidade da doação cardíaca após a morte circulatória.

Modelo pré-clínico de doação cardíaca após a morte circulatória

Falta uma abordagem não invasiva confiável para avaliação funcional do coração do doador durante a perfusão cardíaca normotérmica ex situ (NESP). Descrevemos aqui um protocolo para avaliação ex situ do desempenho miocárdico utilizando o método de ecocardiografia epicárdica e cateter de condutividade.

Avaliação funcional do coração do doador durante a perfusão ex situ : insights de alças de pressão-volume e ecocardiografia de superfície

O presente estudo demonstra um modelo animal altamente reprodutível de lesão aguda de isquemia e reperfusão miocárdica regional em coelhos, utilizando uma minitoracotomia esquerda para casos de sobrevida ou uma esternotomia mediana para casos de não sobrevida.

Modelo de Lesão de Isquemia e Reperfusão em Coelhos

Apresentamos aqui um protocolo de avaliação de um coração implantado heterotopicamente após preservação ex situ normotérmica no modelo de ratos.

Modelo de Transplante Cardíaco Heterotópico Perfundido Normothermic Ex-Situ em Rato

Descrevemos um protocolo de coração de rato isolado ex vivo para testar estratégias de preservação do coração do doador. Este trabalho descreve o protocolo para uso em armazenamento estático a frio de corações de doadores de roedores; no entanto, o protocolo também pode ser usado para corações de doadores obtidos após doação após morte circulatória e morte encefálica.

Usando um modelo isolado de coração de rato de trabalho para testar estratégias de preservação do coração do doador

O protocolo aqui descrito descreve um modelo de transplante cardíaco suíno de alta fidelidade após doação após morte circulatória utilizando perfusão ex vivo do aloenxerto.

Um modelo suíno de alta fidelidade de transplante cardíaco ortotópico após doação após morte circulatória

Aprenda um modelo de doação após morte circulatória com perfusão regional normotérmica em suínos para avaliação cardíaca. Este método reproduz clinicamente o transplante cardíaco humano.

Modelo de Doação em Animais de Grande Porte após Morte Circulatória e Perfusão Regional Normotérmica para Avaliação Cardíaca

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