Secção óssea temporal humana de alta velocidade para a avaliação da patologia do ouvido médio associada ao COVID-19
18 de maio de 2022
Este artigo descreve uma técnica para seção óssea temporal humana rápida que utiliza uma microsaw com lâminas de diamante gêmeos para gerar fatias finas para descalcificação rápida e análise da imunohistoquímica óssea temporal.
Este protocolo reduz o tempo para processamento temporal ósseo de 9 para 10 meses para 10 a 14 dias. A principal vantagem dessa técnica é que permite a rápida avaliação da otopatologia, que no nosso caso é relevante para a avaliação da patologia do ouvido médio associada ao COVID-19. Esta técnica pode ser particularmente útil para estudos sensíveis ao tempo do osso temporal.
No futuro, pode ser ainda mais otimizado para uso no estudo da patologia do ouvido interno. Comece a colheita durante a autópsia e divida os nervos cranianos bruscamente para o canal auditivo interno. Faça a primeira incisão óssea com o osteotome paralelo e apenas medial à porção escânica do osso temporal.
Em seguida, realize a segunda incisão óssea paralela à primeira na borda medial do osso temporal. Faça a terceira incisão de três a quatro centímetros anterior e paralela à cordilheira petrosa. Em seguida, faça a quarta incisão aproximadamente paralela à terceira a dois centímetros posteriores ao cume do petroo.
Use dissecção afiada para liberar o tecido mole preso ao longo da borda inferior da amostra e remover o osso temporal. Após a colheita, submerga imediatamente o tecido em 200 a 300 mililitros de formalina 10%. Em seguida, coloque uma microsserra de precisão com lâminas de diamante dupla a uma distância de cinco milímetros.
Para descalcificação rápida do tecido, corte cada amostra em três seções de tal forma que a seção central do osso temporal tem cinco milímetros de espessura e as de cada extremidade têm de três a cinco milímetros de espessura. Coloque as seções em 200 a 300 mililitros de 0,37-molar EDTA por sete a 10 dias em temperatura ambiente para amaciamento. A hematoxilina e a coloração de eosina da mucosa do ouvido médio e do tubo eustáquio mostraram que o tecido é preservado após o processamento usando este protocolo.
Análises imunohistoquímicas mostraram a presença de proteínas ACE2, transmembrana protease e furina dentro desses tecidos, fornecendo uma possível raiz para a infecção por SARS-CoV2 no epitélio respiratório do ouvido médio. É importante posicionar adequadamente o tecido ósseo temporal dentro da serra de diamante. Técnicas alternativas que podem ser combinadas com este método incluem imunohistoquímica para diferentes proteínas, diferentes manchas de tecido e transcriptômica.
Esta técnica nos permitiu avaliar rapidamente a presença das proteínas envolvidas na infecção pelo SARS-CoV2 no ouvido médio durante a pandemia COVID-19.
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Visão Geral
Este artigo descreve uma técnica para o corte rápido do osso temporal humano utilizando uma microserra com lâminas duplas de diamante. Este método reduz significativamente o tempo necessário para o processamento do osso temporal, facilitando uma análise mais rápida da imuno-histoquímica.
Principais Componentes do Estudo
Área de Ciência
- Neurociência
- Otopatologia
- Imunohistoquímica
Antecedentes
- O processamento tradicional do osso temporal pode levar de 9 a 10 meses.
- A avaliação rápida da otopatologia é fundamental para pesquisas oportunas.
- Essa técnica é relevante para o estudo da patologia da orelha média associada à COVID-19.
- A otimização futura pode aprimorar estudos sobre a patologia da orelha interna.
Objetivo do Estudo
- Reduzir o tempo de processamento para a análise do osso temporal.
- Permitir uma avaliação rápida da otopatologia.
- Fornecer um método aplicável a estudos com restrição de tempo.
Métodos Utilizados
- Coleta durante a autópsia.
- Seção cirúrgica dos nervos cranianos até o canal auditivo interno.
- Incisão óssea inicial realizada com um osteótomo.
- Uso de uma micro-serra com lâminas duplas de diamante para a secção.
Resultados Principais
- Tempo de processamento reduzido de 9-10 meses para 10-14 dias.
- Facilita a avaliação rápida da patologia da orelha média.
- Potencial para maior otimização em estudos futuros.
- Aplicável a necessidades urgentes de pesquisa em otopatologia.
Conclusões
- A técnica acelera significativamente o processamento do osso temporal.
- É particularmente útil para estudos relacionados à COVID-19.
- Pesquisas futuras podem aprimorar sua aplicação na patologia da orelha interna.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O corte acelerado do osso temporal permite uma avaliação histopatológica rápida dos tecidos da orelha média, atendendo às necessidades urgentes de pesquisa durante surtos de doenças infecciosas, como a COVID-19. Ao reduzir o tempo de processamento do tecido de meses para dias, este método apoia a validação de alvos e estudos mecanicistas dependentes de tempo na otopatologia. A abordagem aumenta a agilidade dos portfólios para equipes de pesquisa translacional que investigam vias de entrada viral e expressão proteica específica de tecidos.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêuticos
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite interrogar rapidamente a expressão proteica relevante para mecanismos de entrada viral em tecidos humanos.
- Apoia a validação funcional de alvos ao preservar a integridade do tecido para análise imunohistoquímica.
- Facilita a redução de riscos mecanicistas em estudos de interações patógeno-hospedeiro na orelha média.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Fornece cortes de tecido de alta qualidade adequados para imuno-histoquímica padronizada e ensaios moleculares.
- Reduz o tempo de análise para o desenvolvimento e validação de ensaios na pesquisa em otopatologia.
- Melhora a reprodutibilidade e a escalabilidade dos fluxos de trabalho de triagem baseados em tecidos.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Permite o alinhamento de achados baseados em tecidos com estudos translacionais de biomarcadores em modelos de doenças infecciosas.
- Garante continuidade do descobrimento até a validação pré-clínica, acelerando a análise de tecidos.
- Reduz o risco de atraso nos insights em contextos urgentes de saúde pública.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este protocolo de corte rápido se integra ao continuum de descoberta a pré-clínico, permitindo testes de hipóteses e validação de alvos em modelos de tecidos humanos com oportunidade temporal adequada.
- Biologia da Descoberta: Acelera estudos orientados por hipóteses sobre a localização proteica e a suscetibilidade tecidual à infecção.
- Triagem: Fornece seções prontas para ensaio com leituras quantitativas de imuno-histoquímica.
- Análises: Permite medições robustas de marcadores proteicos (por exemplo, ACE2, TMPRSS2, Furina) em diferentes condições.
- Pesquisa Translacional: Conecta a análise de tecidos humanos com descobertas em modelos pré-clínicos para alinhamento de biomarcadores.
- Reutilização Empresarial: Estabelece uma capacidade escalável e rápida de preparação de tecidos para pesquisas futuras sobre doenças infecciosas.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva na validação de alvos baseada em tecidos e em estudos mecanicistas.
- Valor Operacional: Padroniza e acelera o processamento de tecidos, reduzindo os custos de recursos e tempo.
- Valor Estratégico: Permite decisões mais rápidas de prosseguir ou interromper pesquisas em cenários urgentes, melhorando a eficiência do capital.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização ajustada ao risco de projetos translacionais durante emergências de saúde pública.
Considerações sobre a Implementação
- Requer experiência no manuseio de tecidos post mortem e em instrumentos de seccionamento.
- Exige acesso a microsserras de precisão com lâminas de diamante e infraestrutura de descalcificação.
- Necessita padronização entre equipes dos protocolos de processamento e coloração de tecidos.
- Adaptável a diversos tipos de tecidos e alvos proteicos mediante otimização do protocolo.
- Depende do acesso oportuno à autópsia e da qualidade da amostra para resultados ideais.
