Name: Reconstituição da Assembleia septina em membranas para estudar propriedades e funções biofísicas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-28T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: Aprenda a reconstituir assembleias septinas em membranas para estudar propriedades biofísicas. Este protocolo versátil permite investigar como a forma da membrana influencia a organização de proteínas em diferentes contextos experimentais.

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Este trabalho foi apoiado pelo Instituto Nacional de Saúde (NIH) Grant no. R01 GM-130934 e Fundação Nacional de Ciência (NSF) Grant MCB- 2016022. B.N.C, E.J.D.V., e K.S.C. foram apoiados em parte por uma bolsa do Instituto Nacional de Ciências Médicas Gerais sob o prêmio T32 GM1199999.

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<li>Lee, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stochasticity+and+positive+feedback+enable+enzyme+kinetics+at+the+membrane+to+sense+reaction+size%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Stochasticity and positive feedback enable enzyme kinetics at the membrane to sense reaction size.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 118 (47), 2103626118(2021).</li>
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<li>Lou, H. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+curvature+underlies+actin+reorganization+in+response+to+nanoscale+surface+topography%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Membrane curvature underlies actin reorganization in response to nanoscale surface topography.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 116 (46), 23143-23151 (2019).</li>
<li>Bridges, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Septin+assemblies+form+by+diffusion-driven+annealing+on+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Septin assemblies form by diffusion-driven annealing on membranes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 111 (6), 2146-2151 (2014).</li>
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<li>Johnson, J. M., Ha, T., Chu, S., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+steps+of+supported+bilayer+formation+probed+by+single+vesicle+fluorescence+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Early steps of supported bilayer formation probed by single vesicle fluorescence assays.</a> Biophysical Journal. 83 (6), 3371-3379 (2002).</li>
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<li>Gidi, Y., Bayram, S., Ablenas, C. J., Blum, A. S., Cosa, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+one-step+PEG-silane+passivation+of+glass+surfaces+for+single-molecule+fluorescence+studies%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Applied+Materials+%26+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Efficient one-step PEG-silane passivation of glass surfaces for single-molecule fluorescence studies.</a> ACS Applied Materials & Interfaces. 10 (46), 39505-39511 (2018).</li>
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<li>Cannon, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+duplication+of+a+septin+provides+a+developmentally-regulated+filament+length+control+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">A gene duplication of a septin provides a developmentally-regulated filament length control mechanism.</a> bioRxiv. , (2021).</li>
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<li>Reimhult, E., Höök, F., Kasemo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intact+vesicle+adsorption+and+supported+biomembrane+formation+from+vesicles+in+solution%3A+Influence+of+surface+chemistry%2C+vesicle+size%2C+temperature%2C+and+osmotic+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Intact vesicle adsorption and supported biomembrane formation from vesicles in solution: Influence of surface chemistry, vesicle size, temperature, and osmotic pressure.</a> Langmuir. 19 (5), 1681-1691 (2003).</li>
<li>Cha, T., Guo, A., Zhu, X. -Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+supported+phospholipid+bilayers+on+molecular+surfaces%3A+Role+of+surface+charge+density+and+electrostatic+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Journal%22%5BJournal%5D)">Formation of supported phospholipid bilayers on molecular surfaces: Role of surface charge density and electrostatic interaction.</a> Biophysical Journal. 90 (4), 1270-1274 (2006).</li>
<li>Andrews, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+supported+lipid+bilayers+%28SLBs%29+from+buffers+containing+low+concentrations+of+group+I+chloride+salts%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Formation of supported lipid bilayers (SLBs) from buffers containing low concentrations of group I chloride salts.</a> Langmuir. 37 (44), 12819-12833 (2021).</li>
<li>Gurtovenko, A. A., Vattulainen, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+NaCl+and+KCl+on+phosphatidylcholine+and+phosphatidylethanolamine+lipid+membranes%3A+Insight+from+atomic-scale+simulations+for+understanding+salt-induced+effects+in+the+plasma+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physical+Chemistry+B%22%5BJournal%5D)">Effect of NaCl and KCl on phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine lipid membranes: Insight from atomic-scale simulations for understanding salt-induced effects in the plasma membrane.</a> The Journal of Physical Chemistry B. 112 (7), 1953-1962 (2008).</li>
<li>Danuser, G., Waterman-Storer, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+fluorescent+speckle+microscopy+of+cytoskeleton+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Biophysics+and+Biomolecular+Structure%22%5BJournal%5D)">Quantitative fluorescent speckle microscopy of cytoskeleton dynamics.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 35 (1), 361-387 (2006).</li>
<li>Chan, Y. -H. M., Boxer, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Model+membrane+systems+and+their+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Model membrane systems and their applications.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 11 (6), 581-587 (2007).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse.

As membranas celulares assumem muitas formas diferentes, curvaturas e propriedades físico-químicas. Para estudar o maquinário em escala de nanômetros através do qual as células constroem conjuntos em escala de micrômetros, é necessário projetar sistemas mínimos de reconstituição de mimetéticas de membrana. Este protocolo apresenta técnicas que controlam precisamente a curvatura e a composição da membrana, permitindo ao usuário facilmente tomar medidas quantitativas de fluorescência usando técnicas de microscopia amplamen...

As formas das células e muitos de seus compartimentos internos dependem das membranas lipídicas que as cercam. As membranas são estruturas viscoelásticas que podem ser deformadas através de interações com proteínas, triagem lipídica e atuação de forças internas e externas para gerar uma variedade de formas 1,2,3,4. Essas formas são frequentemente descritas em termos de curvatura de membrana. As células utilizam um conjunto diversificado de proteínas capazes de se reunir preferencialmente, ou "sensoriamento", curvaturas de membrana específicas para garantir o controle espátula-temporal definido sobre processos como tráfico celular, citocinas e migração 5,6. A dinâmica do maquinário celular na membrana é notavelmente difícil de observar devido à dificuldade de equilibrar o tempo e a resolução espacial com a saúde celular. Embora as técnicas de superrespeição possam oferecer uma visão detalhada de tais estruturas, elas exigem aquisições longas que não são favoráveis às escalas de tempo de montagem/desmontagem para a maioria das máquinas. Além disso, a complexidade molecular desses conjuntos em seu ambiente nativo e a multiplicidade de papéis que um único componente pode desempenhar fazem dos sistemas mínimos de reconstituição uma ferramenta valiosa para estudar a capacidade funcional das moléculas.
A mímética de membrana mínima foi desenvolvida para estudar propriedades de membrana e interações proteína-membrana fora da célula. Os miméticos de membrana variam de bicamadas lipídicas de pé livre, como lipossomos ou vesículas unilamellar gigantes, até bicamadas lipídicas suportadas (SLBs)7,8,9,10. SLBs são membranas biomiméticas ancoradas ao suporte subjacente, tipicamente composto de vidro, mica ou sílica 11,12. Uma variedade de geometrias pode ser usada, incluindo superfícies planares, esferas, hastes e até substratos ondulantes ou micropatterados para sondar interações proteína-membrana em curvaturas côncavas e convexas simultaneamente1 3,14,15,16,17,18 . A formação de bicamadas começa com a adsorção de vesículas em uma superfície hidrofílica, seguida de fusão e ruptura para formar uma bicamada contínua (Figura 1)19. Bicamadas suportadas são particularmente favoráveis à microscopia de luz e elétrons, fornecendo melhor tempo e resolução espacial do que muitas vezes é alcançável nas células. Os SLBs curvos fornecem especialmente um meio atraente para sondar a sensibilidade à curvatura da proteína na ausência de deformação significativa da membrana, permitindo que se distingue entre sensor de curvatura e indução de curvatura, que muitas vezes são impossíveis de separar em sistemas autônomos.
Os septinos são uma classe de proteínas citoesqueletal formadoras de filamentos bem conhecidas por sua capacidade de se reunir em membranas positivamente curvas 6,18,20. Ao longo do ciclo celular na levedura, os septinos se reúnem em um anel e devem reorganizar-se para formar as estruturas de ampulheta e anel duplo associadas ao surgimento de brotos e citocinese, respectivamente21. Embora belo trabalho tenha sido feito usando microscopia eletrônica de réplica de platina para observar a arquitetura de septina em diferentes estágios de ciclo celular22, assistir ao conjunto de septina ao longo do tempo usando microscopia de luz na levedura encontrou-se com resolução espacial limitada. Trabalhos anteriores em septinas usando monocamadas lipídicas visualizadas pela microscopia eletrônica de transmissão (TEM) foi capaz de reconstituir várias estruturas de septina interessantes, como anéis, feixes e gazes23. No entanto, as técnicas EM também são limitadas em sua resolução temporal, ao contrário da microscopia de fluorescência. A fim de melhor resolver os parâmetros cinéticos do processo multies em escala da montagem de septina, recorremos a miméticas de membrana suportadas, onde podemos controlar cuidadosamente a geometria da membrana, as condições amostrais e a modalidade de imagem.
Os protocolos descritos aqui usam SLBs planar ou curvos, proteína purificada e uma combinação de técnicas de microscopia. A microscopia de fluorescência quantitativa e a microscopia total de fluorescência interna (TIRFM) foram utilizadas para medir tanto a ligação de proteína a granel em várias curvaturas de membrana, quanto para medir a cinética vinculante de moléculas únicas. Além disso, este protocolo foi adaptado para ser usado com microscopia eletrônica de varredura (SEM) para examinar a ultraestrutura proteica em diferentes curvaturas de membrana. Embora o foco desses protocolos esteja no citoesqueleto septino, os protocolos podem ser facilmente modificados para investigar a sensibilidade da curvatura de qualquer proteína que o leitor ache interessante. Além disso, aqueles que trabalham em áreas como endocitose ou tráfico vesicular podem achar essas técnicas úteis para sondar os conjuntos dependentes da curvatura de complexos multiprofissionais.

<table><tbody><tr><td>Tubos de PCR de 0,2 mL com tampa plana, Natural</td><td>Watson</td><td>137-211C(EX)</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de baixa adesão de 0,5 mL USA</td><td>Scientific</td><td>1405-2600</td><td></td></tr><tr><td>Beta mercaptoetanol (BME)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4612-25G</td><td></td></tr><tr><td>Coverglass para fazer lamínulas PEGylated</td><td>Thermo Scientific</td><td>152450</td><td>Richard-Allan Scientific SLIP-RITE Tampa de Vidro 24x50 #1.5</td></tr><tr><td>DOPC</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>850375</td><td></td></tr><tr><td>Egg Liss Rhodamine PE</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>810146</td><td></td></tr><tr><td>EMS Glutaraldeído Aquoso 25%, Grau EM</td><td>VWR</td><td>16220</td><td></td></tr><tr><td>EMS Cacodilato de Sódio Buffer</td><td>VWR</td><td>11652</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, 200 provas</td><td>Fisher Scientific</td><td>04-355-223EA</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Hexametildisilazane</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>440191</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio</td><td>VWR</td><td>7791-18-6</td><td></td></tr><tr><td>Metilcelulose 4000cp</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M052-100G</td><td></td></tr><tr><td>Lamínulas de microvidro para bicamadas planares</td><td>Matsunami</td><td>Mini</td><td></td>centrífuga</tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> 22x22 <tr><td>descontinuada Microesferas de sílica não funcionalizada</td><td>Bangs Laboratories, Inc.</td><td>Depende do tamanho: SS0200*-SS0500*</td><td>Sílica em suspensão aquosa</td></tr><tr><td>Adesivo óptico</td><td>Norland Thorlabs</td><td>NOA 68</td><td>Adesivo flexível para vidro ou plásticos</td></tr><tr><td>Tetróxido de ósmio</td><td>Millipore Sigma</td><td>20816-12-0</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>VWR</td><td>52858-000</td><td></td></tr><tr><td>Limpador de plasma</td><td>Plasma Etch</td><td>PE-25</td><td>Voltagem: 120V, 60Hz. Corrente: 15 AMPS</td></tr><tr><td>Cloreto de potássio</td><td>VWR</td><td>0395-1kg</td><td></td></tr><tr><td>Tampa de lamínula redonda, #1.5 12mm&nbsp; &nbsp;</td><td>VWR</td><td>64-0712</td><td></td></tr><tr><td>Sonicator bath</td><td>Branson</td><td>1510R-MT</td><td>Bransonic Limpador ultrassônico. 50-60 Hz. Saída: 70W</td></tr><tr><td>Soja PI</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>840044</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de mesa</td><td>Eppendorf</td><td>22331</td><td></td></tr><tr><td>Lâmpada UV</td><td>Spectroline</td><td>ENF-260C</td><td>115 Volts, 60 Hz, 0,20 AMPS</td></tr><tr><td>Papel de filtro de microfibra WhatmanGlass</td><td>VWR</td><td>28455-030</td><td>42,5 mm de diâmetro, grau GF/C</td></tr></tbody></table>

reconstituição da assembleia septina em membranas para estudar propriedades e funções biofísicas

Reconstitution of Septin Assembly at Membranes to Study Biophysical Properties and Functions

A maioria das células pode sentir e mudar sua forma para realizar processos celulares fundamentais. Em muitos eucariotes, o citoesqueleto de septina é um componente integral na coordenação de mudanças de forma como citocinese, crescimento polarizado e migração. Os septinas são proteínas formadoras de filamentos que se reúnem para formar diversas estruturas de alta ordem e, em muitos casos, são encontradas em diferentes áreas da membrana plasmática, mais notavelmente em regiões de curvatura positiva em escala de mícon. O monitoramento do processo de montagem de septina in vivo é dificultado pelas limitações da microscopia de luz nas células, bem como pela complexidade das interações com membranas e elementos citoesqueléticos, dificultando a quantificação da dinâmica do septino nos sistemas vivos. Felizmente, houve progressos substanciais na última década na reconstituição do citoesqueleto de septina em um sistema livre de células para dissecar os mecanismos que controlam a montagem de septinas em altas resoluções espaciais e temporais. Os passos centrais da montagem de septina incluem associação de heterooligomeres de septina e dissociação com a membrana, polimerização em filamentos, e a formação de estruturas de alta ordem através de interações entre filamentos. Aqui, apresentamos três métodos para observar a montagem de septina em diferentes contextos: bicamadas de planar, suportes esféricos e suportes de hastes. Esses métodos podem ser usados para determinar os parâmetros biofísicos dos septinos em diferentes estágios de montagem: como octamers únicos que ligam a membrana, como filamentos, e como conjuntos de filamentos. Utilizamos esses parâmetros emparelhados com medidas de amostragem de curvatura e adsorção preferencial para entender como o sensor de curvatura opera em uma variedade de escalas de comprimento e tempo.

Após a preparação de cada SLB, os septinos ou a proteína de interesse podem ser incubados com o suporte desejado e imageados via TIRFM, microscopia confocal ou SEM. Os resultados aqui apresentados utilizam septinas recombinantemente expressas e purificadas de E. coli17. Utilizando o TIRFM em SLBs planar, é possível determinar o comprimento dos filamentos e sua flexibilidade, medir os coeficientes de difusão e observar a montagem ao longo do tempo 28,29<s...

A reconstituição livre de células tem sido uma ferramenta fundamental para entender a montagem do citoesqueleto, e o trabalho na última década estabeleceu abordagens para estudar a dinâmica dos septins em sistemas mínimos. Aqui apresentados estão três métodos complementares para observar a montagem de septina em diferentes contextos de membrana: bicamadas planares, suportes esféricos e suportes de hastes.

Reconstituição da Assembleia septina em membranas para estudar propriedades e funções biofísicas

Most cells can sense and change their shape to carry out fundamental cell processes. In many eukaryotes, the septin cytoskeleton is an integral component ...

Este protocolo orientará aqueles que trabalham em proteínas de ligação de membrana para determinar como a forma da membrana desempenha um papel na organização de conjuntos proteicos. A principal vantagem dessa técnica é sua versatilidade para tipo de proteína, composição de membrana e geometria da membrana. Também permite o interrogatório de como um bicamheiro lipídico pode alterar propriedades de proteínas associadas.Para identificar uma boa membrana para o experimento, sugerimos estabelecer uma lista de verificação que pode incluir taxas de difusão lipídica, mobilidade da proteína de interesse e se há lipossomos desexplosados ou lipossomos fundidos presos à superfície. Para iniciar a limpeza plasmática dos slides, purgue o limpador de plasma por cinco minutos com oxigênio para remover o ar das linhas e da câmara. Disponha deslizamentos de vidro de cobertura seca em um berço de cerâmica.Durante a purga, flua um gás inerte sobre as lâminas de vidro de micro tampa para remover poeira e partículas. Coloque o berço na parte de trás da câmara de plasma para que as tampas sejam paralelas com a borda longa da câmara. Execute o limpador de plasma por 15 minutos com oxigênio na potência má

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Neste vídeo, demonstramos um procedimento para investigar a organização da septina em uma bicamada lipídica suportada por vidro in vitro usando microscopia de fluorescência de reflexão interna total.

Ensaio de Bicamada Lipídica Planar: Uma Técnica In Vitro Baseada em Microscopia para Investigar a Montagem de Septina em Mimetizadores de Membrana Biológica

Este vídeo descreve a técnica de estudo da montagem da proteína septina em microesferas revestidas com bicamadas lipídicas. Essa técnica ajuda a entender os conjuntos de proteínas dependentes da curvatura em superfícies curvas.

Ensaio de Bicamada Lipídica Esférica Suportada: Uma Técnica para Observar a Montagem de Septina em Microesferas

Procedimentos para a reconstituição completa da voltagem dependentes do canal de potássio protótipo em membranas lipídicas são descritos. Os canais reconstituídos são adequados para ensaios bioquímicos, gravações elétricas, triagem ligante e estudos de cristalografia de elétrons. Esses métodos podem ter aplicações gerais para os estudos estruturais e funcionais de outras proteínas de membrana.

Reconstituição de um canal de Kv para membranas lipídicas de Estudos estruturais e funcionais

A montagem e o posicionamento do fuso mitótico dependem das forças combinadas geradas pela dinâmica dos microtúbulos, proteínas motoras e reticulantes. Aqui apresentamos nossos métodos recentemente desenvolvidos nos quais o confinamento geométrico de gotículas de emulsão esférica é usado para a reconstituição de baixo para cima de fusos mitóticos básicos.

Reconstituição do Basic mitótico Fusos no esféricas Emulsão Gotas

Aqui, apresentamos um protocolo para reconstituir feixes de microtúbulos in vitro e quantificar diretamente as forças exercidas dentro deles usando aprisionamento óptico simultâneo e microscopia de fluorescência de reflexão interna total. Este ensaio permite a medição em nível de nanoescala das forças e deslocamentos gerados por conjuntos de proteínas dentro de redes ativas de microtúbulos.

Forças de Medição Direta Dentro de Feixes de Microtúbulos Ativos Reconstituídos

A reconstituição in vitro de proteínas citoesqueléticas é uma ferramenta vital para entender as propriedades funcionais básicas dessas proteínas. O presente trabalho descreve um protocolo para purificar e avaliar a qualidade de complexos de septina recombinante, que desempenham um papel central na divisão e migração celular.

Purificação e Controle de Qualidade de Complexos de Septina Recombinante para Reconstituição Livre de Células

Septinas são proteínas citoesqueléticos. Eles interagem com membranas lipídicas e podem sentir, mas também gerar curvatura de membrana na escala de míces. Descrevemos neste protocolo metodologias in vitro para analisar deformações de membrana, ligação de septina sensível à curvatura e ultraestrutura de filamento de septina.

Métodos in vitro de baixo para cima para avaliar a organização ultraestrutural, remodelação da membrana e comportamento de sensibilidade da curvatura dos septinos

Este protocolo descreve a formação de bicamadas lipídicas suportadas e a adição de filamentos citoesqueléticos e proteínas motoras para estudar a dinâmica de redes citoesqueléticas reconstituídas e ligadas à membrana usando microscopia de fluorescência.

Reconstituição de Córtices de Actina Mínima Amarrados à Membrana em Bicamadas Lipídicas Suportadas

Bacillus anthracis é o agente patogénico obrigatório do antraz mortal por inalação, pelo que os estudos dos seus genes e proteínas são rigorosamente regulados. Uma abordagem alternativa é estudar genes ortólogos. Descrevemos estudos biofísico-químicos de um ortólogo de B. anthracis em B. cereus , bc1531, requerendo equipamento experimental mínimo e sem preocupações de segurança graves.

Expressão de Proteína Recombinante, Cristalização e Estudos Biofísicos de<em&gt; Bacillus</em&gt; -conservado Nucleotide Pyrophosphorylase, BcMazG

Neste método, apresentamos procedimentos bioquímicos para isolamento rápido e eficiente de proteínas de filamento intermediário (IF) a partir de tecidos de múltiplos ratos. IFs isoladas podem ser usadas para estudar mudanças em modificações pós-translacionais por espectrometria de massa e outros ensaios bioquímicos.

Isolamento de Proteínas de Filamento Intermediário a partir de Tecidos Múltiplos de Rato para Estudar Modificações Pós-Translacionais associadas ao Envelhecimento

Aprenda a reconstituir assembleias septinas em membranas para estudar propriedades biofísicas. Este protocolo versátil permite investigar como a forma da membrana influencia a organização de proteínas em diferentes contextos experimentais.

Reconstituição da Assembleia septina em membranas para estudar propriedades e funções biofísicas

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