Preparação padronizada do anel coronário de rato e gravação em tempo real de mudanças dinâmicas de tensão ao longo do diâmetro do vaso

Este protocolo introduz em detalhes a localização, separação e a fixação do anel muscular das artérias coronárias de ratos. Fornecendo um novo método para os mecanismos, exploração e tratamento de várias doenças cardiovasculares. O sistema é adequado e o registro estável das mudanças dinâmicas da tensão arterial in vitro, leitura em diâmetro de 60 micrômetros a 10 milímetros.

Sugerimos que os novatos devem primeiro entender com precisão a localização anatômica de cada nave e podem começar com um vaso ligeiramente maior, como a artéria torácica e a artéria mesentérica. Depois de dissociar e remover o coração, comece drenando o sangue residual de todas as câmaras cardíacas apertando levemente com fórceps plásticos médicos. Coloque rapidamente o coração pré-processado em uma placa de Petri contendo 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono saturado solução de sal fisiológico a quatro graus Celsius, tendo um valor de pH de 7,40.

Para identificar com precisão a posição anatômica das artérias coronárias, ajuste a postura do coração isolado sob o microscópio de luz de acordo com o diagrama esquemático. Corte as cavidades ventriculares esquerda e direita ao longo do septo inter ventricular da raiz da artéria pulmonar com tesoura cirúrgica e pinça. Para dissociar as artérias coronárias esquerda e direita do tecido miocárdio, dissecar o ventrículo direito sob um microscópio anatômico óptico para expor completamente o ramo da artéria coronária direita.

Em seguida, identifique a posição da artéria coronária esquerda girando o tecido cardíaco 45 graus no sentido horário. Depois de remover o tecido miocárdio pegajoso circundante, discerna explicitamente as artérias coronárias esquerda e direita pulsantes. Separe as artérias coronárias no meio imediatamente e mergulhe completamente na solução de sal fisiológico a quatro graus Celsius.

Adquira um anel arterial de cerca de dois milímetros cortando verticalmente a artéria destacada com uma tesoura anatômica para registrar a tensão vascular sob diferentes estímulos. Prepare dois fios de aço inoxidável de dois centímetros e pré-mergulhe em solução de sal fisiológico de quatro graus Celsius saturado com 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono. Passe ambos os fios paralelamente através do anel arterial, juntamente com a direção do vaso sob um microscópio anatômico óptico e com fios de comprimento igual expostos em ambas as extremidades da cavidade vascular.

Fixar o anel arterial com a frente do fio de aço e para trás no banho da micrografia do fio cheia de solução de sal fisiológico borbulhante com 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono. Gire o botão horizontal do parafuso para um espaçamento dianteiro e traseiro adequado para que os dois fios sejam horizontais e o anel arterial esteja em um estado natural de relaxamento. Após a instalação do banho DMT no aparelho termostático, abra o software de aquisição de dados para garantir que o sinal de caminho correspondente seja registrado.

Defina os parâmetros. Alcance a tensão inicial ideal do anel arterial aplicando uma tensão razoável ao longo do diâmetro do vaso. Neste ponto, defina o valor de tensão vascular exibido como zero.

Depois, aplique um estímulo de pulso newton de três mili no anel arterial girando o eixo espiral do banho. Clique no painel LCD para configurá-lo como zero milli Newton e mantenha por uma hora. Após a incubação por uma hora no tampão de solução fisiológica de sal saturado de oxigênio a 37 graus Celsius pH 7.40, defina o valor da tensão para zero mili Newton novamente no painel de controle de tensão da micrografia do fio.

Realize a atividade contratil do anel da artéria coronária com a técnica do miógrafo de arame e valide em três operações separadas, estimulando com 60 milimil de solução de íons de potássio por 10 minutos cada. Após cada estimulação, lave o banho com a solução de sal fisiológico saturado de oxigênio até que o tom vascular retorne ao seu estado inicial. Adicione 0,3 micromolar U46619 para tomar banho e observar por 10 minutos.

Adicione uma apigenina micromolar e observe efeitos vasculares. Quando a dilatação atingir um platô, adicione a próxima concentração. Adicione uma apigenina micromolar a 60 milimolars de solução pré-encolhimento de potássio para observar o efeito vascular.

Quando a dilatação atingir um platô, adicione a próxima concentração. Adicione 28 íons de potássio milimão ao anel vascular de repouso. Quando a contração atingir um platô, adicione a próxima concentração.

Adicione 0,01 micromolar U46619 ao anel vascular de repouso. Quando a contração atingir um platô, adicione a próxima concentração. Depois que uma tensão inicial de três mili newton foi aplicada ao anel arterial, sua tensão excedeu mais de dois mili newton, aplicando 60 milimônios de concentração de íons de potássio em paralelo três vezes.

Assim, os procedimentos acima resultaram em um anel coronário isolado com excelente atividade fisiológica. Concentração cumulativa de íons de potássio, ou U46619 foram adicionados ao banho de DMT620M, resultando em um aumento dependente da concentração no tom vascular in vitro. A próxima concentração de íon de potássio ou U46619 foi adicionada quando o efeito vasoconstrição atingiu um platô.

Para anéis coronários isolados constritos por íon de potássio e U46619, a apigenina de droga de teste causou vasodilatação de forma surpreendentemente dependente de concentração. O coração é dissecado ao longo do septo ventricular da raiz da artéria pulmonar, expondo e separando dois milímetros de anel muscular coronário. Após este procedimento, podemos registrar tensão vascular em microvexes de retina, função renal, artéria renal, e na artéria cerebral média.

Uma dinâmica de região de 60 micrômetros a 10 milímetros.