Name: Preparação padronizada do anel coronário de rato e gravação em tempo real de mudanças dinâmicas de tensão ao longo do diâmetro do vaso (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-16T14:50:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: Aprenda a técnica de miografia de fio para medir a reatividade vascular em artérias coronárias de rato. Este método permite registrar mudanças dinâmicas de tensão arterial em diâmetros de 60 micrômetros a 10 milímetros.

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Este trabalho foi apoiado pelo projeto key P&D do Sichuan Provincial Science and Technology Plan (2022YFS0438), da National Natural Science Foundation of China (82104533), da China Postdoctoral Science Foundation (2020M683273) e do Departamento de Ciência & Tecnologia da Província de Sichuan (2021YJ0175).

O protocolo animal foi revisado e aprovado pelo Comitê de Gestão da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Record nº 2021-11). Os ratos machos Sprague Dawley (SD) (260-300 g, 8-10 semanas de idade) foram utilizados para o presente estudo. Os ratos eram mantidos em uma câmara animal e eram livres para beber e comer durante o experimento.
1. Preparação da solução
<ol><li>Prepare a solução fisiológica de sal (PSS) dissolvendo 118 mM de NaCl, 4,7 mM de K+, 2,5 mM de CaCl2, 1,2 mM de KH2PO4, 1,2 mM de MgCl2∙6H2O, 25 mM de NaHCO3, 11 mM de D-glicose e 5 mM de HEPES (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Prepare a solução de sal K+ alta dissolvendo 58 mM de NaCl, 60 mM de K+, 2,5 mM de CaCl2, 1,2 mM de KH2PO4, 1,2 mM de MgCl2∙6H2O, 25 mM de NaHCO3, 11 mM de D-glicose e 5 mM de HEPES.</li>
	<li>Saturar as duas soluções acima e bolha com um gás misto de 95% O2 e 5% de CO2. Enquanto isso, mantenha os valores de pH da solução entre 7,38 e 7,42 com 2 mM NaOH. NOTA: Para obter informações sobre a preparação da solução, consulte a referência15.</li>
</ol>2. Dissecção da artéria coronária do rato
<ol><li>Anestesiar o rato por inalação de 2% de isoflurane. Confirme a anestesia profunda por beliscão do dedo do sol e, se necessário, administre anestésicos adicionais. Em seguida, abra imediatamente a cavidade torácica para expor o coração na mesa de operação portátil após um relatório publicado anteriormente12.</li>
	<li>Depois de dissociar e remover o coração, drene o sangue residual de todas as câmaras cardíacas apertando levemente com fórceps plásticos médicos. Coloque rapidamente o coração pré-processado em uma placa de Petri contendo 95% O2 + 5% DE CO2 Saturado PSS a 4 °C, tendo um valor de pH de 7,40.</li>
	<li>Para identificar com precisão a posição anatômica das artérias coronárias, ajuste a postura do coração isolado sob o microscópio de luz de acordo com o diagrama esquemático (Figura 2A). NOTA: Na visão frontal, a aurícula direita e a artéria pulmonar estavam no canto superior esquerdo e superior direito, respectivamente.<ol>
<li>Corte as cavidades ventriculares esquerda e direita ao longo do septo interventricular da raiz da artéria pulmonar com tesoura cirúrgica e pinça (Figura 2B).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Para dissociar as artérias coronárias esquerda e direita do tecido miocárdio, dissecar o ventrículo direito sob um microscópio anatômico óptico para expor completamente o ramo da artéria coronária direita. Em seguida, identifique a posição da artéria coronária esquerda girando o tecido cardíaco 45° no sentido horário (Figura 2D).</li>
	<li>Depois de remover o tecido miocárdio pegajoso circundante, discerna explicitamente as artérias coronárias pulsantes esquerda (cerca de 5 mm) e direita (cerca de 5 mm). Separe as artérias coronárias no meio imediatamente e mergulhe completamente no PSS a 4 °C. Adquira um anel arterial de cerca de 2 mm cortando verticalmente a artéria destacada com uma tesoura anatômica para registrar a tensão vascular sob diferentes estímulos (Figura 2E).</li>
</ol>3. Suspensão e fixação do anel arterial
NOTA: Para obter detalhes sobre esta etapa, consulte a referência14.
<ol><li>Prepare dois fios de aço inoxidável de 2 cm (ver Tabela de Materiais) e pré-mergulhe na solução PSS de 4 °C saturada com 95% O2 + 5% DE CO2. Passe ambos os fios paralelamente através do anel arterial, juntamente com a direção do vaso sob um microscópio anatômico óptico e com fios de comprimento igual expostos em ambas as extremidades da cavidade vascular.</li>
	<li>Fixar o anel arterial com a frente do fio de aço e para trás na banheira do micrografo do fio preenchido com PSS borbulhante com 95% O2 + 5% CO2. Gire o botão horizontal do parafuso para um espaçamento dianteiro e traseiro adequado para que os dois fios sejam horizontais e o anel arterial esteja em um estado natural de relaxamento.</li>
	<li>Após a instalação do banho DMT no aparelho termostático, abra o software de aquisição de dados (ver Tabela de Materiais) para garantir que o sinal de caminho correspondente seja registrado. Definir os seguintes parâmetros: calibração da ocular (mm/div): 0,36; pressão do alvo (kPa): 13,3; IC1/IC100: 0,9; tempo médio online: 2 s; tempo de atraso: 60 s. Os passos da fixação do anel arterial são mostrados na Figura 3.</li>
</ol>4. Padronização da tensão vascular no anel arterial de rato
NOTA: Para diferentes amostras de cavidade, a tensão inicial ideal foi necessária para que os vasos mantivessem atividade excepcional in vitro. Para mais detalhes, consulte a referência15.
<ol><li>Alcance a tensão inicial ideal do anel arterial aplicando uma tensão razoável ao longo do diâmetro do vaso. NOTA: Com base no estudo anterior16, a tensão maximal induzida por agonista foi realizada no fator k valor de 0,90 com a tensão inicial de estiramento de 1,16 ± 0,04 mN/mm (valores de referência para diferentes amostras de vasos: k valor, 0,90-0,95; tensão inicial, 1,16-1,52 mN/mm).</li>
	<li>Neste ponto, defina o valor de tensão vascular exibido como zero. Depois, aplique um estímulo de 3 mN de puxar ao anel arterial girando o eixo espiral do banho.</li>
	<li>Após a incubação por 1 h no tampão PSS saturado de oxigênio a 37 °C, pH 7.40, defina o valor da tensão para 0 mN novamente no painel de controle de tensão do micrografo do fio. O processo de configuração da tensão inicial do anel arterial é mostrado na Figura 4.</li>
</ol>5. Detecção de reatividade do anel da artéria coronária
<ol><li>Realize a atividade contratil do anel da artéria coronária com a técnica de miógrafode arame 14, e valide em três operações separadas, estimulando com 60 mM de solução K+ por 10 min cada.</li>
	<li>Após cada estimulação, lave o banho com PSS saturado de oxigênio até que o tom vascular retorne ao seu estado inicial. NOTA: Somente quando a flutuação de tensão das três medidas paralelas foi inferior a 10%, e a amplitude de cada contração foi maior que 1 mN/mm, anéis arteriais qualificados e altamente ativos poderiam ser usados para outros experimentos. A verificação de atividade do anel coronário de rato é mostrada na Figura 5.</li>
</ol>6. Tratamento pós-cirúrgico
<ol><li>Após a cirurgia, eutanásia os animais seguindo protocolos institucionalmente aprovados. NOTA: Para o presente estudo, os animais foram eutanizados por inalação de excesso de isoflurano.</li>
</ol>

<ol><li>Malakar, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+coronary+artery+disease%2C+its+risk+factors%2C+and+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">A review on coronary artery disease, its risk factors, and therapeutics.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 16812-16823 (2019).</li>
<li>Murray, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((national+age-sex+specific+all-cause+and+cause-specific+mortality+for+240+causes+of+death%2C+1990-2013%3A+A+systematic+analysis+for+the+global+burden+of+disease+Study+2013%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: A systematic analysis for the global burden of disease Study 2013.</a> The Lancet. 385 (9963), 117-171 (2015).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+and+adenosine+receptor-mediated+action+in+coronary+microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Research+in+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Adenosine and adenosine receptor-mediated action in coronary microcirculation.</a> Basic Research in Cardiology. 116 (1), 22(2021).</li>
<li>Allaqaband, H., Gutterman, D. D., Kadlec, A. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+consequences+of+coronary+arteriolar+dysfunction+and+its+influence+on+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Physiological consequences of coronary arteriolar dysfunction and its influence on cardiovascular disease.</a> Physiology. 33 (5), 338-347 (2018).</li>
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<li>Alvarez-Alvarez, M. M., Zanetti, D., Carreras-Torres, R., Moral, P., Athanasiadis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+survey+of+sub-saharan+gene+flow+into+the+mediterranean+at+risk+loci+for+coronary+artery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Human+Genetics%22%5BJournal%5D)">A survey of sub-saharan gene flow into the mediterranean at risk loci for coronary artery disease.</a> European Journal of Human Genetics. 25 (4), 472-476 (2017).</li>
<li>LaCombe, P., Tariq, M. A., Lappin, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology%2C+Afterload+Reduction%5BTitle%5D)+AND+%22StatPearls+%5BInternet%5D%22%5BJournal%5D)">Physiology, Afterload Reduction.</a> StatPearls [Internet]. , StatPearls Publishing. Treasure Island (FL). (2022).</li>
<li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+microcirculation%3A+regulation+of+flow+and+beyond%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">The human microcirculation: regulation of flow and beyond.</a> Circulation Research. 118 (1), 157-172 (2016).</li>
<li>Wang, G., Li, F., Hou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+and+alternative+therapies+for+stable+angina+pectoris+of+coronary+heart+disease%3A+A+protocol+for+systematic+review+and+network+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Medicine%22%5BJournal%5D)">Complementary and alternative therapies for stable angina pectoris of coronary heart disease: A protocol for systematic review and network meta-analysis.</a> Medicine. 101 (7), 28850(2022).</li>
<li>Markousis-Mavrogenis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+disease%3A+the+%26%2334%3Bmeeting+point%26%2334%3B+of+cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular disease: the &#34;meeting point&#34; of cardiology.</a> European Journal of Clinical Investigation. 52 (5), 13737(2021).</li>
<li>Allison, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+in+vivo+continuous+cardiovascular+function+during+chronic+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fetal in vivo continuous cardiovascular function during chronic hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 594 (5), 1247-1264 (2016).</li>
<li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Ca2%2B+handling+for+the+regulation+of+vasoconstriction+between+rat+coronary+and+renal+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of Ca2+ handling for the regulation of vasoconstriction between rat coronary and renal arteries.</a> Journal of Vascular Research. 56 (4), 191-203 (2019).</li>
<li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isometric+contractility+measurement+of+the+mouse+mesenteric+artery+using+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isometric contractility measurement of the mouse mesenteric artery using wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (138), e58064(2018).</li>
<li>Guo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+hypercontractility+to+acidosis+owes+to+the+greater+activity+of+TMEM16A%2FANO1+in+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Coronary hypercontractility to acidosis owes to the greater activity of TMEM16A/ANO1 in the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 139, 111615(2021).</li>
<li>Ping, N. N., Cao, L., Xiao, X., Li, S., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+optimal+initial+tension+in+rat+coronary+artery+using+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">The determination of optimal initial tension in rat coronary artery using wire myography.</a> Physiological Research. 63 (1), 143-146 (2014).</li>
<li>Niccoli, G., Scalone, G., Lerman, A., Crea, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coronary+microvascular+obstruction+in+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Coronary microvascular obstruction in acute myocardial infarction.</a> European Heart Journal. 37 (13), 1024-1033 (2016).</li>
<li>Mumma, B., Flacke, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+diagnostic+and+therapeutic+strategies+in+microvascular+angina%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Emergency+and+Hospital+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Current diagnostic and therapeutic strategies in microvascular angina.</a> Current Emergency and Hospital Medicine Reports. 3 (1), 30-37 (2015).</li>
<li>Lanza, G. A., Parrinello, R., Figliozzi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+microvascular+angina+pectoris%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cardiovascular+Drugs%22%5BJournal%5D)">Management of microvascular angina pectoris.</a> American Journal of Cardiovascular Drugs. 14 (1), 31-40 (2014).</li>
<li>Zhu, T. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beneficial+effects+of+intracoronary+tirofiban+bolus+administration+following+upstream+intravenous+treatment+in+patients+with+ST-elevation+myocardial+infarction+undergoing+primary+percutaneous+coronary+intervention%3A+The+ICT-AMI+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Beneficial effects of intracoronary tirofiban bolus administration following upstream intravenous treatment in patients with ST-elevation myocardial infarction undergoing primary percutaneous coronary intervention: The ICT-AMI study.</a> International Journal of Cardiology. 165 (3), 437-443 (2013).</li>
<li>Huang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restoration+of+coronary+flow+in+patients+with+no-reflow+after+primary+coronary+intervention+of+acute+myocardial+infarction+%28RECOVER%29%5BTitle%5D)+AND+%22American+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Restoration of coronary flow in patients with no-reflow after primary coronary intervention of acute myocardial infarction (RECOVER).</a> American Heart Journal. 164 (3), 394-401 (2012).</li>
<li>Fu, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-atherosclerosis+and+cardio-protective+effects+of+the+Angong+Niuhuang+Pill+on+a+high+fat+and+vitamin+D3+induced+rodent+model+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-atherosclerosis and cardio-protective effects of the Angong Niuhuang Pill on a high fat and vitamin D3 induced rodent model of atherosclerosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 195, 118-126 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chinese+medicine+She-Xiang-Xin-Tong-Ning%2C+containing+moschus%2C+corydalis+and+ginseng%2C+protects+from+myocardial+ischemia+injury+via+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, containing moschus, corydalis and ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis.</a> The American Journal of Chinese Medicine. 48 (1), 107-126 (2020).</li>
<li>Wu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+dimensional+reconstruction+of+coronary+artery+stents+from+optical+coherence+tomography%3A+Experimental+validation+and+clinical+feasibility%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Three dimensional reconstruction of coronary artery stents from optical coherence tomography: Experimental validation and clinical feasibility.</a> Scientific Reports. 11 (1), 1-15 (2021).</li>
<li>Liu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Janus-like+role+of+fibroblast+growth+factor+2+in+arteriosclerotic+coronary+artery+disease%3A+Atherogenesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">Janus-like role of fibroblast growth factor 2 in arteriosclerotic coronary artery disease: Atherogenesis and angiogenesis.</a> Atherosclerosis. 229 (1), 10-17 (2013).</li>
<li>Hu, G., Li, X., Zhang, S., Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+rat+thoracic+aorta+dilatation+by+astragaloside+IV+with+the+generation+of+endothelium-derived+hyperpolarizing+factors+and+nitric+oxide%2C+and+the+blockade+of+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+reports%22%5BJournal%5D)">Association of rat thoracic aorta dilatation by astragaloside IV with the generation of endothelium-derived hyperpolarizing factors and nitric oxide, and the blockade of Ca2+ channels.</a> Biomedical reports. 5 (1), 27-34 (2016).</li>
<li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anticonstriction+effect+of+MCA+in+rats+by+danggui+buxue+decoction%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Anticonstriction effect of MCA in rats by danggui buxue decoction.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 749915(2021).</li>
<li>Jing, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apigenin+relaxes+rat+intrarenal+arteries%2C+depresses+Ca2%2B-activated+Cl%E2%88%92+currents+and+augments+voltage-dependent+K%2B+currents+of+the+arterial+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+%26+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Apigenin relaxes rat intrarenal arteries, depresses Ca2+-activated Cl− currents and augments voltage-dependent K+ currents of the arterial smooth muscle cells.</a> Biomedicine & Pharmacotherapy. 115, 108926(2019).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A perturbação da microcirculação coronariana, que envolve uma ampla gama de pacientes com CAD, tem sido gradualmente reconhecida e preocupada com a base para a perfusão adequada do miocárdio. Considerando as sérias complicações de doenças cardíacas coronarianas súbitas e doenças cardiovasculares, a prevenção e o tratamento oportunos de drogas são extremamente importantes para um indivíduo clínico com CAD17. Inevitavelmente, o sigilo da anatomia da artéria coronária e a complexidade de sua estrutur...

A doença arterial coronariana (CAD) tem sido amplamente reconhecida e preocupada como uma doença cardiovascular típica e representativa, sendo a principal causa de morte nos países desenvolvidos e em desenvolvimento 1,2. Como uma rota de fornecimento de sangue e oxigênio para a função fisiológica cardíaca normal, o sangue circulante entra e nutre o coração através de duas artérias coronárias principais e uma rede vascular de sangue na superfície do miocárdio 3,4. Depósitos de colesterol e gordura nas artérias coronárias cortam o suprimento sanguíneo do coração e a resposta inflamatória violenta do sistema vascular, causando aterosclerose, angina estável, angina instável, infarto do miocárdio ou morte cardíaca súbita 5,6. Em resposta à estenose patológica das artérias coronárias, batimentos cardíacos fisiológicos acelerados compensatórios satisfazem o suprimento sanguíneo do próprio coração ou órgãos vitais do corpo aumentando a saída do ventrículo esquerdo7. Se a estenose coronária prolongada não for aliviada a tempo, novos vasos sanguíneos extensos podem se desenvolver em certas áreas do coração8. Atualmente, o tratamento clínico da CAD muitas vezes adota trombolise medicamentosa ou trommbolise mecânica cirúrgica e um bypass vascular biônico exógeno com medicação frequente e grande incapacidade cirúrgica9. Portanto, a investigação funcional da atividade fisiológica da artéria coronária ainda é um avanço urgente para as doenças cardiovasculares10.
Não há meios técnicos disponíveis para detectar atividade fisiológica coronária, exceto para sistemas de telemetria sem fio, que podem registrar dinamicamente pressão coronariana viva , tensão vascular, saturação de oxigênio no sangue e valores de pH11. Portanto, considerando o sigilo e complexidade textural das artérias coronárias, a identificação precisa e o isolamento das artérias coronárias são, sem dúvida, as melhores opções para explorar múltiplos mecanismos de CAD in vitro4.
Um sistema multimógrafo de série, em particular um detector de tensão microvascular de fio (ver Tabela de Materiais), é um dispositivo comercializável muito maduro para registrar alterações in vitro de tensão tecidual de pequenos tubos vasculares, linfáticos e brônquicos com as características de alta precisão e gravação dinâmica contínua12. O referido sistema tem sido amplamente empregado para registrar características in vitro de tensão tecidual de estruturas de cavidade com diâmetros de 60 μm a 10 mm. As características de aquecimento contínuo da plataforma do micrografo do fio compensam em grande parte a estimulação do ambiente externo adverso. Enquanto isso, os constantes insumos da mistura de gás e os valores do pH permitem obter dados de tensão vascular mais precisos em um estado fisiológico semelhante13. No entanto, considerando a complexidade da localização anatômica das artérias coronárias de ratos (Figura 1), seu isolamento tem sido desconcertante e limitando a exploração do mecanismo de doenças cardiovasculares diversificadas e desenvolvimento de medicamentos. Portanto, o presente protocolo introduz em detalhes o processo de localização anatômica e separação da artéria coronária do rato, seguido da medição da tensão na plataforma do micrografodo fio 14.

<table><tbody><tr><td>Apigenin</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>150731</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A501330</td><td></td></tr><tr><td>D-glicose</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A610219</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Xiya Reagent Co., Ltd., Shandong, China</td><td>S3872</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A100781</td><td></td></tr><tr><td>LabChart Professional versão 8.3&nbsp;</td><td>ADInstruments, Austrália</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot; 6H2O</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A100288</td><td></td></tr><tr><td>Sistema multi-miógrafo</td>Danish <td>Myo Technology, Aarhus, Dinamarca</td><td>620M</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A100241</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sangon Biotech Co., Ltd., Xangai, China</td><td>A100865</td><td></td></tr><tr><td>Fios de aço</td><td>Danish Myo Technology, Aarhus, Dinamarca</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>U46619</td><td>Sigma, EUA</td><td>D8174</td><td></td></tr></tbody></table>

preparação padronizada do anel coronário de rato e gravação em tempo real de mudanças dinâmicas de tensão ao longo do diâmetro do vaso

Standardized Rat Coronary Ring Preparation and Real-Time Recording of Dynamic Tension Changes Along Vessel Diameter

Como um evento-chave das doenças do sistema cardiovascular, a doença arterial coronariana (CAD) tem sido amplamente considerada como o principal culpado da aterosclerose, do infarto do miocárdio e da angina pectoris, que ameaçam seriamente a vida e a saúde das pessoas em todo o mundo. No entanto, como registrar as características biomecânicas dinâmicas dos vasos sanguíneos isolados há muito intriga as pessoas. Enquanto isso, o posicionamento preciso e o isolamento das artérias coronárias para medir mudanças in vitro dinâmicas de tensão vascular tornaram-se uma tendência no desenvolvimento de medicamentos CAD. O presente protocolo descreve a identificação macroscópica e a separação microscópica das artérias coronárias de ratos. A função de contração e dilatação do anel da artéria coronária ao longo do diâmetro do vaso foi monitorada utilizando-se o sistema multimógrafo estabelecido. Os protocolos padronizados e programados de medição da tensão do anel coronário, desde a amostragem até a aquisição de dados, melhoram tremendamente a repetibilidade dos dados experimentais, o que garante a autenticidade dos registros de tensão vascular após intervenção fisiológica, patológica e medicamentosa.

Posicionados anatomicamente, as artérias coronárias de ratos distribuídas e escondidas profundamente no tecido miocárdio não foram facilmente reconhecidas. Comparando-se as artérias coronárias de humanos (Figura 1A) e ratos (Figura 1B), a separação rápida e precisa das artérias coronárias de ratos foi conduzida de acordo com o processo de amostragem na Figura 2. Depois de localizar precisamente a aurícula direita, artéria pulmonar e...

O presente protocolo descreve a técnica de miógrafo de fio para medir a reatividade vascular da artéria coronária do rato.

Preparação padronizada do anel coronário de rato e gravação em tempo real de mudanças dinâmicas de tensão ao longo do diâmetro do vaso

As a key event of cardiovascular system diseases, coronary artery disease (CAD) has been widely regarded as the main culprit of atherosclerosis, ...

Este protocolo introduz em detalhes a localização, separação e a fixação do anel muscular das artérias coronárias de ratos. Fornecendo um novo método para os mecanismos, exploração e tratamento de várias doenças cardiovasculares. O sistema é adequado e o registro estável das mudanças dinâmicas da tensão arterial in vitro, leitura em diâmetro de 60 micrômetros a 10 milímetros.Sugerimos que os novatos devem primeiro entender com precisão a localização anatômica de cada nave e podem começar com um vaso ligeiramente maior, como a artéria torácica e a artéria mesentérica. Depois de dissociar e remover o coração, comece drenando o sangue residual de todas as câmaras cardíacas apertando levemente com fórceps plásticos médicos. Coloque rapidamente o coração pré-processado em uma placa de Petri contendo 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono saturado solução de sal fisiológico a quatro graus Celsius, tendo um valor de pH de 7,40.Para identificar com precisão a posição anatômica das artérias coronárias, ajuste a postura do coração isolado sob o microscópio de luz de acordo com o diagrama esquemático. Corte as cavidades ventriculares esquerda e direita ao longo do septo inter ventricular da raiz da artéria pulmonar com tesoura cirúrgica e pinça. Para dissociar as artérias coronárias esquerda e direita do tecido miocárdio, dissecar o ventrículo direito sob um microscópio anatômico óptico para expor completamente o ramo da artéria coronária direita.Em seguida, identifique a posição da artéria coronária esquerda girando o tecido cardíaco 45 graus no sentido horário. Depois de remover o tecido miocárdio pegajoso circundante, discerna explicitamente as artérias coronárias esquerda e direita pulsantes. Separe as artérias coronárias no meio imediatamente e mergulhe completamente na solução de sal fisiológico a quatro graus Celsius.Adquira um anel arterial de cerca de dois milímetros cortando verticalmente a artéria destacada com uma tesoura anatômica para registrar a tensão vascular sob diferentes estímulos. Prepare dois fios de aço inoxidável de dois centímetros e pré-mergulhe em solução de sal fisiológico de quatro graus Celsius saturado com 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono. Passe ambos os fios paralelamente através do anel arterial, juntamente com a direção do vaso sob um microscópio anatômico óptico e com fios de comprimento igual expostos em ambas as extremidades da cavidade vascular.Fixar o anel arterial com a frente do fio de aço e para trás no banho da micrografia do fio cheia de solução de sal fisiológico borbulhante com 95% de oxigênio e 5% de dióxido de carbono. Gire o botão horizontal do parafuso para um espaçamento dianteiro e traseiro adequado para que os dois fios sejam horizontais e o anel arterial esteja em um estado natural de relaxamento. Após a instalação do banho DMT no aparelho termostático, abra o software de aquisição de dados para garantir que o sinal de caminho correspondente seja registrado.Defina os parâmetros. Alcance a tensão inicial ideal do anel arterial aplicando uma tensão razoável ao longo do diâmetro do vaso. Neste ponto, defina o valor de tensão vascular exibido como zero.Depois, aplique um estímulo de pulso newton de três mili no anel arterial girando o eixo espiral do banho. Clique no painel LCD para configurá-lo como zero milli Newton e mantenha por uma hora. Após a incubação por uma hora no tampão de solução fisiológica de sal saturado de oxigênio a 37 graus Celsius pH 7.40, defina o valor da tensão para zero mili Newton novamente no painel de controle de tensão da micrografia do fio.Realize a atividade contratil do anel da artéria coronária com a técnica do miógrafo de arame e valide em três operações separadas, estimulando com 60 milimil de solução de íons de potássio por 10 minutos cada. Após cada estimulação, lave o banho com a solução de sal fisiológico saturado de oxigênio até que o tom vascular retorne ao seu estado inicial. Adicione 0,3 micromolar U46619 para tomar banho e observar por 10 minutos.Adicione uma apigenina micromolar e observe efeitos vasculares. Quando a dilatação atingir um platô, adicione a próxima concentração. Adicione uma apigenina micromolar a 60 milimolars de solução pré-encolhimento de potássio para observar o efeito vascular.Quando a dilatação atingir um platô, adicione a próxima concentração. Adicione 28 íons de potássio milimão ao anel vascular de repouso. Quando a contração atingir um platô, adicione a próxima concentração.Adicione 0,01 micromolar U46619 ao anel vascular de repouso. Quando a contração atingir um platô, adicione a próxima concentração. Depois que uma tensão inicial de três mili newton foi aplicada ao anel arterial, sua tensão excedeu mais de dois mili newton, aplicando 60 milimônios de concentração de íons de potássio em paralelo três vezes.Assim, os procedimentos acima resultaram em um anel coronário isolado com excelente atividade fisiológica. Concentração cumulativa de íons de potássio, ou U46619 foram adicionados ao banho de DMT620M, resultando em um aumento dependente da concentração no tom vascular in vitro. A próxima concentração de íon de potássio ou U46619 foi adicionada quando o efeito vasoconstrição atingiu um platô.Para anéis coronários isolados constritos por íon de potássio e U46619, a apigenina de droga de teste causou vasodilatação de forma surpreendentemente dependente de concentração. O coração é dissecado ao longo do septo ventricular da raiz da artéria pulmonar, expondo e separando dois milímetros de anel muscular coronário. Após este procedimento, podemos registrar tensão vascular em microvexes de retina, função renal, artéria renal, e na artéria cerebral média.Uma dinâmica de região de 60 micrômetros a 10 milímetros.

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A contração da artéria mesentérica e Estudos Relaxamento Usando Miografia Fio Automated

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O protocolo descreve o uso de miografia de arame para avaliar a tensão isométrica transmural de artérias mesentéricas isoladas de camundongos, com especial consideração da modulação por fatores liberados das células endoteliais e dos tecidos adiposos perivasculares.

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Apresentado aqui é um protocolo para estudar a microcirculação coronária no tecido cardíaco murino vivo por ex vivo monitoramento da pressão e fluxo de perfusão arterial que mantém a pressão, bem como componentes de árvores vasculares, incluindo os leitos capilares e pericitos, já que a artéria septal é canulada e pressurizada.

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Preparação padronizada do anel coronário de rato e gravação em tempo real de mudanças dinâmicas de tensão ao longo do diâmetro do vaso (Vídeo) | JoVE Journal

Preparação padronizada do anel coronário de rato e gravação em tempo real de mudanças dinâmicas de tensão ao longo do diâmetro do vaso

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