Desestabilização do Menisco Medial e Cartilagem Scratch Murine Modelo de Osteoartrite Acelerada

Este método modela muitos aspectos da osteoartrite pós-traumática humana, permitindo-nos uma maneira de investigar a doença e o impacto de possíveis terapias em um período de tempo mais curto. A principal vantagem desta técnica é que, a curto prazo, apenas duas semanas após a intervenção, os ratos apresentaram formação de osteófitos consistentes e mensuráveis, bem como alterações na carga na perna afetada que indicam dor. Recomendamos o uso deste modelo do estudo da formação de osteófitos e ossificação endocondral, bem como da dor causada por lesão.

A identificação e o corte do ligamento meniscotibial medial podem ser desafiadores, por isso aconselhamos a prática em cadáveres até que estejam confiantes. Ajudando a demonstrar o procedimento estará Lynette Dunning, assistente de pesquisa no Centro de Ciências Musculoesqueléticas. Para começar, designe uma sala estéril para realizar a cirurgia, garantindo que todas as superfícies sejam estéreis.

Organize e coloque instrumentos estéreis em cortinas estéreis. Em seguida, pese o mouse. Prenda a pele do rato anestesiado sobre o joelho, os lados frontal e lateral do meio da canela até o meio da coxa, com pequenos cortadores de cabelo.

Desinfete a pele aplicando um limpador de pele antibacteriano na pele raspada e exposta. Para analgesia, administrar 0,05 miligramas por quilograma de buprenorfina por via subcutânea. Coloque o rato no lado dorsal, deixando o joelho no qual deve ser operado para cima, e coloque o nariz do rato no bico ligado à plataforma anestésica.

Cubra o rato com uma cortina estéril com uma pequena abertura de fechadura. Posicione a perna na qual será operado com o joelho fixado em um ângulo inferior a 90 graus, com o ligamento patelar voltado para cima e o pé imobilizado com fita cirúrgica. Ajuste o microscópio para se concentrar no ligamento patelar.

Aperte a pele do joelho no lado lateral com pinça serrilhada. Faça um pequeno corte paralelo ao tendão patelar distal usando tesoura cirúrgica. Introduza a tesoura e amplie o corte para cerca de 10 milímetros.

Mova a pele para o lado medial, expondo o ligamento patelar e o platô tibial proximal. Usando uma lâmina número 11, faça uma incisão de cima para baixo ao longo do lado medial do ligamento patelar. Ao chegar ao fundo do ligamento patelar, gire a lâmina 90 graus e estenda a incisão para longe do ligamento patelar em direção ao lado medial, para obter acesso à cápsula articular.

Aperte o ligamento patelar com pinça de ponta contundente e gire o punho para mover o ligamento patelar para o lado lateral, apenas o suficiente para expor o IFP. Enquanto ainda segura o ligamento patelar levemente, aperte o IFP com micropinças para levantá-lo e movê-lo ligeiramente para cima. Se houver um sangramento, aplique pressão com um cotonete.

Identificar a MMTL do menisco medial, que ancora o corno craniano do menisco medial ao platô tibial anterior. Corte cuidadosamente o MMTL com uma pequena tesoura de mola de lâmina de dois milímetros, deixando o menisco medial e outros ligamentos intactos. Com uma faca microcirúrgica de três milímetros, marque três reentrâncias uniformemente espaçadas na cartilagem articular tibial em uma direção da parte posterior para a anterior.

Feche a pele com dois ou três pequenos clipes de metal de fechamento de sete milímetros de ferida. Remova os clipes de metal entre cinco a sete dias após a cirurgia. Em seguida, avalie a dor ou a marcha em qualquer momento durante o estudo.

Quantificar o tecido calcificado analisando as micro-tomografias computadorizadas das articulações do joelho. Para analisar a esclerose óssea subcondral, selecione um VOI no centro da carga do platô tibial medial. Em seguida, determine a densidade óssea subcondral e a microarquitetura selecionando uma região de interesse delineando a estrutura trabecular com a epífise tibial, a placa subcondral ou o osso subcondral total na visão coronal bidimensional da pilha, usando um software analisador de TC.

Identifique osteófitos nas pilhas de imagens tridimensionais reconstruídas usando o software CTVol. Avaliar o dano cartilaginoso e a sinovite de acordo com o escore de dano da cartilagem OARSI 19 e o escore de sinovite 20, em cortes de cinco micrômetros embutidas em parafina. Não houve mudanças significativas na carga da perna traseira no modelo DMM dentro de oito semanas após a indução, enquanto os camundongos DCS favoreceram significativamente a perna contralateral, ou de controle, duas semanas após a intervenção.

A razão entre a perna contralateral e ipsilateral indicou que ambos os modelos apresentaram aumento da densidade óssea na área de carga óssea subcondral do membro acometido, quatro semanas após a indução. O surgimento de osteófitos foi mais proeminente nos camundongos DCS, com um aumento significativo no número e volume em comparação com o modelo DMM duas semanas após a intervenção. A DD apresenta lesão cartilaginosa elevada nos compartimentos tibial e femoral medial, e sinovite quatro semanas após a indução.

Os danos devem ser limitados às estruturas que intencionalmente queremos afetar, portanto, é necessário um cuidado especial para manter todas as outras estruturas intactas e minimizar a exposição da cartilagem. A modificação para incluir arranhões intencionais na cartilagem nos permite investigar a osteoartrite com foco na osteofitogênese, osteoartrite precoce ou dor na lesão, e o efeito do dano da cartilagem em toda a articulação.