Name: Determinando a eficácia da desinfecção viral da lavagem de água quente (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Aprenda a avaliar a eficácia da desinfecção viral da lavagem com água quente em EPIs e roupas usando o bacteriófago Phi6 como organismo modelo. Este protocolo padronizado oferece dados quantitativos sobre a redução de unidades formadoras de placas.

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A Agência de Proteção Ambiental dos EUA (EPA), por meio de seu Escritório de Pesquisa e Desenvolvimento, dirigiu a pesquisa aqui descrita no EP-C-15-008 com a Jacobs Technology Inc. Foi revisto pela Agência, mas não reflecte necessariamente os pontos de vista da Agência. Nenhum endosso oficial deve ser inferido. A EPA não endossa a compra ou venda de quaisquer produtos ou serviços comerciais. Os autores gostariam de agradecer aos contratados da EPA Denise Aslett pela supervisão da microbiologia da EPA RTP, Brian Ford, Rachael Baartmans e Lesley Mendez Sandoval por seu trabalho neste projeto no laboratório de microbiologia da EPA RTP, Ramona Sherman por fornecer a revisão de garantia de qualidade da EPA e Worth Calfee e Shannon Serre por fornecerem revisões técnicas da EPA.

Phi6 foi recebido de um laboratório colaborador como uma alíquota congelada de ~1 mL e foi armazenado a -80 °C até o uso. Foi inicialmente utilizado para propagar mais existências de vírus que foram posteriormente armazenadas a -80 °C até à sua utilização. O Phi6 foi selecionado como o vírus de demonstração porque é comumente utilizado como um modelo de vírus envelopado, pode ser propagado para altos títulos e requer um laboratório de baixo nível de biossegurança para a realização do teste22,23,24.
1. Preparar a solução-mãe para vírus
<ol><li>Propagar o bacteriófago Phi6 em Pseudomonas syringae do hospedeiro bacteriano usando uma preparação modificada de ágar de soja tríptica e método de sobreposição de ágar macio, conforme descrito abaixo.<ol><li>Preparar ágar de soja tríptico modificado pesando e misturando os ingredientes da Tabela 1 em água deionizada.</li>
		<li>Preparar uma cultura noturna de P. syringae adicionando uma alíquota de 1 mL de P. syringae com uma densidade óptica (OD 600) entre 0,9 a 1,5, a 100 mL de caldo de soja tríptico modificado (Tabela 1) e incubando em uma incubadora de agitação a ~260 rpm à temperatura ambiente (20-26 °C). </li>
		<li>Prepare tubos de ágar macio colocando ágar de soja tríptico modificado (~ 6 mL) em tubos de ensaio e cobrindo com uma tampa autoclavável. Conservar a 4 °C até à utilização. Tubos de ágar macio em autoclave a 121 °C durante 15 minutos para derreter o ágar. Manter a 48 °C até ao revestimento. O equilíbrio a 48 °C é importante, caso contrário, o vírus pode ser inativado no ensaio.</li>
		<li>Adicionar 1 mL de alíquota concentrada do vírus não diluído ao ágar mole e 100 μL de uma cultura de P. syringae em fase logarítmica (OD600 entre 0,9 a 1,5). Despeje ágar macio sobre a superfície de uma placa de ágar Tryptic Soy modificada de 100 mm de diâmetro solidificada. Para evitar bolhas e/ou derramamentos, gire as placas suavemente para distribuir uniformemente o ágar macio sobre a superfície do ágar sólido e incubar durante a noite à temperatura ambiente.</li>
		<li>Raspe suavemente25 o conteúdo das três placas com um espalhador de células estéreis em um tubo cônico estéril de 50 mL contendo 15 mL de tampão SM. Tubos de vórtice na configuração máxima por 1-2 min para quebrar o ágar e, em seguida, centrifugar a 7.000 x g por 15 min.</li>
		<li>Remova o sobrenadante e filtre através de um filtro de seringa de 0,2 μm. Conservar alíquotas de 1 ml em criofrais a -80 °C até à utilização.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Realizar avaliação visual pré-teste do item EPI
<ol><li>Coloque cada item de EPI em uma superfície limpa e lisa (por exemplo, uma bancada de laboratório coberta com um forro de papel descartável). Avalie cada item do EPI em triplicado.</li>
	<li>Garantir a iluminação adequada durante o exame de EPI. Meça e registre o comprimento e a largura dos itens não lavados em vários locais (Figura 1).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64164/64164fig1v2.jpg"> Figura 1. Locais de medição da avaliação pré-teste de EPIs. Denim, esfoliação e locais de cobertura facial onde o comprimento foi registrado para rastrear alterações de material do processo de lavagem. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/64164fig01large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
3. Prepare cupons
<ol><li>Faça cupons de teste de 2 cm x 4 cm cortando EPIs, prepare dois cupons por cobertura facial (três coberturas faciais foram testadas), cinco cupons por calça jeans (três calças jeans foram testadas) e três cupons por camisa esfoliante (três esfoliantes foram testados).</li>
	<li>Prepare um conjunto de cupons em branco processuais de 2 cm x 4 cm (um conjunto para um item de EPI de tamanho normal) para cada tipo de material que não será inoculado, mas será lavado. Prepare dois cupons para cada dia de experimentos de cobertura facial, cinco cupons para cada dia de experimentos de jeans e três cupons para cada dia de experimentos de esfoliação.</li>
	<li>Prepare um conjunto de cupons de controle positivo de 2 cm x 4 cm que serão inoculados, mas não lavados. Prepare dois cupons para cada dia de experimentos de cobertura facial (três coberturas faciais foram testadas), cinco cupons para cada dia de experimentos de denim (três calças jeans foram testadas) e três cupons para cada dia de experimentos de esfoliação (três esfoliantes foram testados) e três cupons de aço inoxidável. Observação : números diferentes de replicações foram selecionados com base no tamanho do item. Por exemplo, é fisicamente difícil aderir cinco cupons na cobertura facial, e dois cupons representariam uma área limitada das calças jeans. Os locais foram selecionados para maximizar a cobertura e em zonas que podem ficar dobradas durante a lavagem e ser mais difíceis de limpar.</li>
</ol>4. Realizar inoculação
<ol><li>Preparar uma solução de extrato de carne bovina a 10% dissolvendo 1 g de extrato de carne bovina em um volume total de 10 mL de solução salina tamponada com fosfato 1x. O filtro esteriliza todo o volume utilizando um filtro de seringa de 0,2 μm.</li>
	<li>Descongelar a solução-mãe para o vírus preparada no ponto 1 à temperatura ambiente. No dia de utilização, adicionar 100 μL da unidade populacional de Phi6 descongelada a 900 μL da solução de extracto de bovino a 10%.</li>
	<li>Inocular cupons de teste e cupons de controle positivo com ~107 PFU/amostra pipetando uma gota de solução de 10 μL no item EPI e espalhando a gota usando a ponta da pipeta. Dependendo do material do EPI, as gotículas se separarão e se reagregarão de forma diferente.</li>
	<li>Permita que os cupons inoculados sequem em um armário de biossegurança. Determinado tempo(s) de secagem através da observação de seus materiais específicos. Para os resultados aqui apresentados, foram utilizados os seguintes tempos: esfoliação = 30 min de tempo seco; cobertura facial = 60 min de tempo seco; denim = 30 min de tempo seco; aço inoxidável = 120 min de tempo seco.</li>
	<li>Anexe cupons inoculados a itens de EPI de tamanho normal de acordo com a Figura 2 usando pinos de segurança e técnicas assépticas.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64164/64164fig2v2.jpg"> Figura 2. Teste os locais dos cupons em jeans, esfoliantes e coberturas faciais. As letras A-D correspondem aos identificadores de cupom exclusivos para todos os experimentos de lavagem. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/64164fig2v2large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
5. Realizar lavagem
<ol><li>Prepare o detergente de lavagem da seguinte forma.<ol><li>Esterilize a água da torneira que será usada na máquina de lavar roupa e recolha 10 ml de água autoclavada para uma verificação da esterilidade. Para este protocolo, autoclave 7 L de água da torneira em um ciclo líquido de 60 minutos.</li>
		<li>Preparar a solução de lavagem de acordo com as instruções de diluição do fabricante. Para este protocolo, dissolver 1,54 mL de detergente em 3,5 L de água da torneira estéril. Aqueça a solução de lavagem a 50 °C usando uma placa quente e agite a barra. Medir e registar o pH e a temperatura da solução de lavagem. Recolher 10 ml de solução para verificação da esterilidade.</li>
	</ol></li>
	<li>Despeje a solução de lavagem em uma lavadora esterilizada (3,25 L). Pré-esterilizar arruelas usando um ciclo de 250 ppm-4 h de peróxido de hidrogênio vaporoso entre os testes.</li>
	<li>Coloque o(s) artigo(s) de EPI numa arruela esterilizada. Adicione uma calça jeans e uma camisa esfoliante por máquina de lavar. Adicione uma cobertura facial inoculada e quatro máscaras de enchimento não contaminadas por lavadora; As máscaras de preenchimento não tinham cupons anexados.</li>
	<li>Lave o item de EPI por 18 min (dois ciclos de lavagem de 9 min com agitação normal). Escorra a máquina de lavar roupa e triplice o enxágue com água da torneira à temperatura ambiente (5 L de cada vez) para remover a espuma. Adicione água da torneira esterilizada à temperatura ambiente na arruela (3,25 L) e realize um ciclo de enxágue de 9 minutos de duração.</li>
	<li>Mova o(s) item(ns) do EPI para o lado giratório da anilha e gire por 5 min. Deslocar o(s) artigo(s) EPI(s) para o secador e secar durante 80 minutos na regulação de calor elevado (93 °C).</li>
	<li>Mova os EPIs do secador para o espaço de trabalho estéril e remova assepticamente os cupons de cada item e coloque-os em tubos cônicos. Pré-encha os tubos com 10 mL de tampão de extração de caldo Dey-Engley a 10% e cubra com papel alumínio.</li>
</ol>6. Extraia e enumere cargas virais em cupons
<ol><li>Extraia cupons em 10 mL de caldo neutralizante Dey-Engley a 10% por vórtice por 2 min na configuração máxima do seu equipamento.</li>
	<li>Extratos de chapas utilizando um método convencional de sobreposição de ágar de capota macia26.<ol><li>Preparar tubos de ágar de soja tríptico modificado e macio e uma cultura de P. syringae , conforme descrito na secção 1. No dia do teste, autoclave os tubos de ágar macio a 121 °C por 15 min para derreter o ágar. Manter o ágar macio a 48 °C até ao revestimento. O equilíbrio a 48 °C é importante, caso contrário o vírus pode ser inactivado termicamente no ensaio.</li>
		<li>Preparar uma série de diluição de dez vezes em solução salina tamponada com fosfato 1x para cada amostra de ensaio utilizada no estudo de branqueamento. Use alíquotas diluídas em série (100 μL) e não diluídas (1 mL e 100 μL) para chapeamento.</li>
		<li>Adicionar alíquotas da amostra de teste ao tubo de ágar macio contendo 6 mL de ágar macio e 100 μL da cultura de P. syringae da fase logarítmica (OD600 entre 0,9-1,5). Despeje o ágar macio na superfície de uma placa de ágar Tryptic Soy modificada solidificada. Distribua uniformemente o ágar macio sobre a superfície do ágar sólido girando a placa.</li>
		<li>Incubar as placas durante a noite à temperatura ambiente e enumerar manualmente no dia seguinte, contando as unidades formadoras de placas em cada placa.</li>
	</ol></li>
</ol>7. Realizar avaliação visual pós-teste do(s) item(ns) EPI(s)
<ol><li>Documente o seguinte nos vários itens de EPI usados para o teste: sinais de desbotamento, descoloração e/ou danos (por exemplo, rasgo, alongamento); Odores; pequenos buracos, cortes ou rasgos (use uma pequena lanterna para procurar danos); separação de camadas, roscas em falta, áreas onde a ligação está danificada; danos a costuras ou zíperes; medir e registrar o alongamento do elástico.</li>
</ol>

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<li>Derraik, J. G., Anderson, W. A., Connelly, E. A., Anderson, Y. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+review+of+SARS-CoV-1+and+SARS-CoV-2+viability%2C+susceptibility+to+treatment%2C+and+the+disinfection+and+reuse+of+PPE%2C+particularly+filtering+facepiece+respirators%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Environmental+Research+and+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Rapid review of SARS-CoV-1 and SARS-CoV-2 viability, susceptibility to treatment, and the disinfection and reuse of PPE, particularly filtering facepiece respirators.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 17 (17), 6117(2020).</li>
<li>Fedorenko, A., Grinberg, M., Orevi, T., Kashtan, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+of+the+enveloped+bacteriophage+Phi6+%28a+surrogate+for+SARS-CoV-2%29+in+evaporated+saliva+microdroplets+deposited+on+glass+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Survival of the enveloped bacteriophage Phi6 (a surrogate for SARS-CoV-2) in evaporated saliva microdroplets deposited on glass surfaces.</a> Scientific Reports. 10 (1), 1-10 (2020).</li>
<li>Calfee, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Virucidal+efficacy+of+antimicrobial+surface+coatings+against+the+enveloped+bacteriophage+%CE%A66%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Virucidal efficacy of antimicrobial surface coatings against the enveloped bacteriophage Φ6.</a> Journal of Applied Microbiology. 132 (3), 1813-1824 (2022).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse conhecidos a serem divulgados.

Este protocolo foi desenvolvido para executar testes laboratoriais sistemáticos para avaliar a eficácia de lavagem da desinfecção viral de itens de EPI/vestuário de tamanho normal. Os procedimentos descrevem as etapas críticas para preparar o vírus, inocular o material de teste, avaliar as alterações nos itens devido ao processo de lavagem e quantificar a redução da carga viral como resultado do processo de lavagem (lavagem e secagem à máquina). Além disso, o protocolo descreve as amostras de controle de qualidade necessárias para garantir que os experimentos não sejam tendenciosos por contaminação e medições/observações que devem ser registradas para rastrear a integridade do material dos itens de EPI após vários ciclos de lavagem. Os resultados utilizando Phi6 indicam que o processo de lavagem de água quente utilizado neste protocolo alcançou uma redução superior a 3 log na carga viral para todas as amostras (cobertura facial, esfoliantes e calças jeans). A redução da carga viral também foi uniforme em diferentes locais nos EPI/itens de vestuário. Para demonstrar a redução de 3 toras, este protocolo requer o uso de uma alta carga viral e um agente estabilizador (extrato de carne bovina) que pode não ser representativo da carga do solo para todas as situações.
Mini lavadoras e secadoras compactas foram selecionadas para otimizar o número de experimentos replicados que poderiam ser conduzidos em um ambiente com espaço restrito e para manter a esterilização do equipamento e do volume de água usado durante os experimentos gerenciável para a equipe do laboratório. Como resultado do uso da mini lavadora, as etapas de enxágue foram manuais em comparação com a maioria das aplicações de lavagem doméstica que são totalmente automatizadas. Também é importante lembrar que a lavagem à máquina predomina nos países desenvolvidos, mas a lavagem das mãos ainda é praticada em todo o mundo15. Além disso, alguns podem não ter acesso a água quente para lavagem, e outros secam manualmente roupas ao ar em vez de secagem à máquina. Essas diferenças nas práticas de lavagem não foram abordadas neste protocolo atual, mas poderiam ser facilmente investigadas com pequenas modificações, como a substituição das etapas de lavagem e secagem pelo uso de um balde e uma linha fechada.
Tem havido um foco mínimo na limpeza / desinfecção de coberturas faciais contaminadas por vírus e roupas de rua na literatura científica em grande escala. Mais comumente, estudos avaliam o desempenho filtratório de coberturas faciais após lavagem e secagem repetidas, mas não avaliam a eficácia da desinfecção viral27,28. Por exemplo, Clapp et al. avaliaram a eficiência de filtração ajustada de máscaras de pano e máscaras de procedimento modificadas e encontraram grande variação no desempenho, com modificações simples proporcionando maior ajuste e eficiência de filtração29. Outro estudo analisou a eficiência de filtragem de quatro máscaras de pano de diferentes materiais30, novamente com foco no controle da fonte ou proteção pessoal. Isso pode ser devido à falta de especialização tanto para a porção microbiana quanto para os testes mecânicos no mesmo laboratório. O protocolo aqui apresentado fornece uma avaliação da eficácia da desinfecção, bem como da degradação do material.
Existem vários métodos de descontaminação/desinfecção para proteção respiratória descartável (principalmente N95s) publicados recentemente na literatura científica31,32,33. O foco principal nos FFRs (por exemplo, N95s) é devido à proteção respiratória crítica que eles fornecem para os profissionais de saúde e outras ocupações da linha de frente. As principais tecnologias para a descontaminação do respirador envolveram peróxido de hidrogênio vaporizado (VHP), radiação germicida ultravioleta (UVGI) e calor úmido (vapor) para inativação do vírus. Viscusi et al. avaliaram cinco métodos de descontaminação para FFRs e UVGI; o óxido de etileno e o VHP foram os métodos de descontaminação mais promissores31. Fischer et al. avaliaram quatro diferentes métodos de descontaminação - luz UV, calor seco, etanol a 70% e VHP - por sua capacidade de reduzir a contaminação por SARS-CoV-2 e seu efeito na função do respirador N9532. Existem muitos estudos adicionais sobre tecnologias eficazes de descontaminação para FFRs que foram resumidos e publicados em 202033. No entanto, esses métodos especializados não são acessíveis ou projetados para serem usados com segurança pelo proprietário médio da casa ou da pequena empresa.
Este protocolo foi desenvolvido utilizando Phi6, um bacteriófago envelopado que é semelhante ao SARS-CoV-2, possui proteínas spike e é de tamanho semelhante (80-100 nm)34, para todos os testes. Como o Phi6 não é um patógeno conhecido, ele pode ser manipulado em um laboratório microbiológico geral de Nível 1 (BSL-1). A eficácia contra o Phi6 pode indicar a eficácia de outros vírus envelopados, no entanto, a verificação empírica para cada vírus de interesse é necessária35. Usando um agente viral semelhante e não patogênico, espera-se que este protocolo possa ser repetido em outros lugares e usado para estudar futuras epidemias/pandemias virais. Pesquisas futuras podem incluir o uso de desinfetantes (por exemplo, água sanitária), além de detergentes e um protocolo padronizado para lavagem das mãos e secagem de linha.

A pandemia da doença do coronavírus 2019 (COVID-19) causou uma interrupção sem precedentes na cadeia de suprimentos global e levou a uma escassez crítica de muitos itens, incluindo equipamentos essenciais de proteção individual (EPI)1,2,3. Aqueles em ocupações de alto risco tiveram que se adaptar usando estratégias recomendadas de capacidade de crise e o público adotou o uso de itens não especializados, como coberturas faciais de material de pano, principalmente para controle de fontes, mas também para fornecer alguma proteção respiratória para os usuários. Nos Estados Unidos, a proteção respiratória especializada (ou seja, respiradores faciais filtrantes (FFRs), como N95s) foi reservada para algumas dessas ocupações de alto risco (por exemplo, cuidados de saúde) durante a escassez de suprimentos4. Quando pouco se sabia sobre a transmissão do coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-Cov-2), uma variedade de outros tipos de materiais de vestuário também foram considerados como proteção de barreira no início da pandemia5. Com a diversidade de tecidos sendo utilizados para proteção do usuário, surgiram dúvidas sobre o uso, reutilização e desinfecção/descontaminação desses itens. Enquanto nos Estados Unidos era geralmente aceito que a lavagem rotineira de roupas faciais e outros itens de vestuário tornava os vírus nessas superfícies não infecciosos, existiam poucos dados para validar essa alegação, e havia uma falta de protocolos laboratoriais publicados para testes. O objetivo do protocolo de pesquisa aqui apresentado é fornecer um exemplo de um processo laboratorial para a realização de estudos de lavagem que geram dados sobre desinfecção viral. Embora o protocolo tenha sido desenvolvido para pesquisa durante a pandemia de COVID-19, pretende-se que seja uma estrutura adaptável a outros estudos de desinfecção de vírus.
O papel do vestuário na transmissão de doenças é um conceito difícil de quantificar. O Fórum Científico Internacional sobre Higiene Doméstica tentou essa tarefa desafiadora realizando uma revisão do papel do vestuário na disseminação de doenças infecciosas, juntamente com uma avaliação de risco das práticas de higiene doméstica6. Incluiu-se neste trabalho a revisão de diversos estudos científicos que examinaram a sobrevivência de diferentes cepas virais em diferentes tipos de tecidos, como lã e algodão 7,8,9,10,11. Cada estudo se concentrou em um tipo diferente de vírus, incluindo vaccinia, poliovírus, vírus sincicial respiratório, herpesvírus e vírus da gripe. Os tempos de sobrevivência dos diferentes vírus nos tecidos variaram de 30 min a 5 meses, dependendo da combinação vírus-material. Vários dos estudos também demonstraram a transferência de contaminação viral do material para as mãos. Como parte da publicação, a lavagem efetiva foi discutida como uma importante técnica de manejo para reduzir a transmissão, mas reconheceu que a magnitude do impacto da lavagem na redução da carga de doença era dependente do contaminante viral específico e difícil de quantificar 7,8,9,10,11.
O processo de lavagem destrói microrganismos usando processos de tratamento químico, físico e térmico. Por exemplo, sabões e detergentes podem separar os solos e podem transmitir alguma ação antimicrobiana mediada quimicamente. Fisicamente, a diluição e a agitação podem auxiliar na redução das cargas virais. Um estudo que examinou a persistência do coronavírus humano HCoV-OC43 em amostras de algodão usando ciclos de lavagem industrial e doméstica com e sem temperatura e detergente não encontrou vírus detectável ao lavar em água não aquecida sem detergente, mas que, na presença de uma carga de solo (saliva artificial), os ciclos de lavagem doméstica exigiam detergente para que as amostras tivessem cargas de vírus não detectáveis12. A própria água quente também pode fornecer um meio eficaz de destruir alguns microrganismos13,14.
Em publicação recente resumindo o estado das práticas atuais de lavanderia, muitos fatores como composição do tecido, condições de armazenamento, carga de sujeira, temperatura e tempo de lavagem e temperatura de secagem foram identificados como variáveis nas práticas globais de lavagem15. Embora a lavagem seja um método de limpeza comum para uma grande porcentagem da população, essa grande variação nas práticas existentes torna a emissão de orientações detalhadas sobre como fazer isso com segurança e eficácia, quando um item pode estar contaminado por um vírus, desafiadora e escassa. Durante a pandemia de COVID-19, os Centros de Controle e Prevenção de Doenças (CDC) dos Estados Unidos emitiram orientações sobre como lavar itens para proprietários de imóveis16,17. Grande parte dessa orientação de lavagem foi baseada em vários estudos mais antigos sobre desinfecção bacteriana18,19 e apoiada por vários estudos de bancada que encontraram vírus envelopados inativados em água com detergentes20,21. A orientação pode ser resumida em: 1) siga as instruções do fabricante para o detergente, 2) use a configuração de água mais quente apropriada e 3) seque completamente os itens. A lógica dessas recomendações era que a lavagem no ciclo mais quente possível com detergente combinado com secagem completa (com calor, se possível) mataria o vírus SARS-CoV-2.
O grande número de possíveis variações no processo de lavagem requer um protocolo uniforme, como o aqui apresentado, para poder isolar variáveis e testar a eficácia da desinfecção viral de processos específicos. A intenção deste protocolo, juntamente com um vídeo instrutivo, é demonstrar um processo de lavagem de água quente baseado em laboratório para replicação em outros estudos de pesquisa. Além disso, os resultados desse teste de eficácia de desinfecção viral devem aumentar a confiança do consumidor na eficácia da lavagem doméstica durante pandemias baseadas em vírus.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Congelador (- 80 > C)</td> <td>ThermoFisher Scientific</td><td>FDE30086FA</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Placa de Aquecimento</td><td>VWR</td><td>97042-714</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Alfinetes de Segurança (aço)</td><td>Singer</td><td>319921</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; </td><td>Shaker Lab-Line Instruments, Inc.</td><td>3525</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Buffer SM</td><td>Teknova,&nbsp; Hollister, CA</td><td>S0249</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Filtro de seringa (0,2 &mu; m)</td> <td>Corning, Corning, NY</td><td>Filtros de seringa PES, 431229</td><td></td></tr><tr><td>1X Phosphate Buffered Saline</td><td>Teknova, Hollister, CA</td><td>P0196, 10X PBS solução</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Becton Dickinson</td><td>214010</td><td></td></tr><tr><td>Tampas autoclaváveis</td><td>DWK Life Sciences, Millville, NJ</td><td>Tampas KIM-KAP, 73663-18</td><td></td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Esterilizador a vapor Steris</td><td>AMSCO 250LS Modelo 20VS</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de carne</td><td>bovina Sigma-Aldrich, Millipore Sigma, St. Louis, MO, EUA</td><td>P/N B4888-100g</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto</td><td>de cálcio Sigma-Aldrich</td><td>793639</td><td></td></tr><tr><td>Espalhadores de células</td><td>Centrífuga de 23600894</td><td></td><td></td>descartáveis do Hospital Busse</tr><tr><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75004271</td><td>Centrífuga Heraeus MegaFuge 16R</td><td></td></tr><tr><td>Temporizador Certificado</td><td>https://nist.time.gov/</td> <td>Não aplicável</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos (50 mL)</td><td>Corning Life Sciences</td><td>352098</td><td>Falcon Tubos de centrífuga cônicos de polipropileno de alta clareza de 50 mL</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>AY509X33</td><td></td></tr><tr><td>Denim</td><td>Wrangler</td><td>Rustler Jeans de perna reta de ajuste regular Jeans de quatro bolsos com bolsos frontais redondos, PN:87619PW</td><td></td></tr><tr><td>Detergente</td><td>Proctor and Gamble</td><td>Tide Original Scent Detergente Líquido para Lavanderia Número do Produto (PN): 003700023068</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Fisher</td><td>BP350</td><td></td></tr><tr><td>Caldo neutralizante Dey-Engley</td> Secador <td>de DF0819172</td><td></td><td>Becton Dickinson</td></tr><tr><td>Coberturas</td> faciais <td>Magic Chef</td><td>MCSDRY15W</td><td></td></tr><tr><td>Máscaras</td><td></td><td>faciais de algodão orgânico reutilizáveis, PN: 990121P4</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora (ágar superior)</td><td>Caderno</td> de laboratório Symphony <td>414004-596</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Caderno científico Empresa</td><td>2001</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de magnésio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de esterilização e dispensação de meios</td><td>Integra</td><td>Media Clave/Media Jet</td><td></td></tr><tr><td>Placas de Petri (100 mm)</td><td>VWR</td><td>25384-342</td><td></td></tr><tr><td>Medidor de pH</td><td>Orion/Oakton</td><td>STARA1110/EW-35634-35</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de pH</td><td>Orion</td><td>8157BNUMD</td><td></td></tr><tr><td>Padrões de pH</td><td>Oakton</td><td>00654-(00/04/08)</td><td></td></tr><tr><td>Phi 6 e Pseudomonas syringae</td><td>Battelle Memorial Institute, Columbus, OH</td><td>Não aplicável</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta e Dicas</td><td>Rainin</td> <td>(pipetas) 17014391, 17002921; (Pontas de pipeta) 30389239, 17014382</td><td></td></tr><tr><td>Geladeira</td><td>True Manufacturing Co., Inc.</td><td>GDM-33</td><td></td></tr><tr><td>Scrubs</td><td>Gogreen cool</td><td>PN: WS19100PT</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>57656</td><td></td></tr><tr><td>Stir Bar</td><td>Fisherbrand</td><td>16-800-512</td><td></td></tr><tr><td>Fita métrica</td><td>Lufkin</td><td>PS3425</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ensaio para ágar macio (14 mL)</td> <td>Corning, Corning, NY</td><td>352059</td><td></td></tr><tr><td>Termômetro</td><td>Fisherbrand</td><td>14-983-19B</td><td></td></tr><tr><td>Triptona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9410</td><td></td></tr><tr><td>Sacos de esterilização de peróxido de hidrogênio vaporoso</td><td>STERIS</td><td>62020TW</td><td></td></tr><tr><td>Vortex (durante o processo de galvanização)</td><td>Daigger Scientific, Inc</td><td>3030A</td><td>Vortex Genie 2</td></tr><tr><td>Vortex (para extração de amostra)</td><td>Branson Ultrasonics</td><td>58816-115</td><td>Multi-Tube vortexer</td></tr><tr><td>Lavadora</td><td>Kuppet</td><td>KP1040600A</td><td></td></tr><tr><td>Arruela Esterilização</td><td>Steris</td><td>STERIS VHP ED1000 gerador</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de levedura</td><td>Gibco</td><td>212750</td><td></td></tr></tbody></table>

determinando a eficácia da desinfecção viral da lavagem de água quente

Determining Viral Disinfection Efficacy of Hot Water Laundering

Este protocolo fornece um exemplo de um processo laboratorial para a realização de estudos de lavagem que geram dados sobre a desinfecção viral. Embora o protocolo tenha sido desenvolvido para pesquisa durante a pandemia da doença do coronavírus 2019 (COVID-19), pretende-se que seja um quadro, adaptável a outros estudos de desinfecção do vírus; demonstra as etapas de preparação do vírus de teste, inoculação do material de teste, avaliação de alterações visuais e de integridade dos itens lavados devido ao processo de lavagem e quantificação da redução da carga viral. Além disso, o protocolo descreve as amostras de controle de qualidade necessárias para garantir que os experimentos não sejam tendenciosos por contaminação e medições/observações que devem ser registradas para rastrear a integridade do material dos itens de equipamentos de proteção individual (EPI) após vários ciclos de lavagem. Os resultados representativos apresentados com o protocolo usam o bacteriófago Phi6 inoculado em materiais de esfoliação de algodão, denim e algodão que cobrem o rosto e indicam que o processo de lavagem e secagem de água quente alcançou uma redução de 3 log (99,9%) na carga viral para todas as amostras (uma redução de 3 log é a métrica de desempenho de desinfetante na Diretriz de Teste de Desempenho de Produto 810.2200 da Agência de Proteção Ambiental dos EUA). A redução da carga viral foi uniforme nos diferentes locais dos itens de EPI. Os resultados deste protocolo de teste de eficácia de desinfecção viral devem ajudar a comunidade científica a explorar a eficácia da lavagem doméstica para outros tipos de vírus de teste e procedimentos de lavagem.

Vários tipos diferentes de dados e resultados de controle de qualidade são gerados após a conclusão deste protocolo. As contagens de placas da unidade formadora de placas (PFU), juntamente com o volume de amostra extraído, permitem o cálculo do número de PFU por cupom de teste. A Tabela 2 é um exemplo de uma folha de registro de dados para resultados de diluição/chapeamento em série. Usando o fator de diluição, o volume da amostra e a contagem de placas da Tabela 1, a Tabela 3 mostra resultados de recuperação viral representativos para um teste de cobertura facial. Observe que esses dados incluem os cupons de teste e as amostras de controle de qualidade para o inóculo, cupons e água de lavagem (com e sem detergente). As amostras de controle de qualidade em branco e esterilidade do procedimento são importantes para confirmar que as soluções aquosas e os materiais de EPI não estavam contaminados com Phi6. A indicação de contaminação causaria cálculos errados da eficácia da desinfecção e exigiria que o teste fosse repetido. As amostras de controlo positivo destinam-se a verificar se a solução-mãe do vírus não se degradou ambientalmente/naturalmente durante as experiências, inflacionando assim o efeito do processo de branqueamento na redução da carga viral. Essas amostras devem permanecer dentro de 1 log PFU dos controles de inóculo para aceitar os resultados do cupom de teste. Uma grande redução na UFP das amostras de controle positivo também indica que todas as etapas da inoculação do cupom devem ser cuidadosamente revisadas para garantir que o analista esteja executando o protocolo com técnicas adequadas de pipetagem e espalhamento.
Esse protocolo também fornece informações para avaliação de alterações nas propriedades materiais dos itens de vestuário devido à lavagem e informações de controle de qualidade referentes ao protocolo (Tabela 4 e Figura 3). Esses dados são úteis por vários motivos. O registro das tendências nas medições dos itens de EPI permite a identificação de um item com um defeito de fabricação. Essa identificação pode ajudar a explicar dados microbianos atípicos e contextualizar a variação no comportamento do produto. Tomar notas de odores ou danos também pode fornecer uma indicação se a lavadora ou secadora estava operando de forma sub-ótima durante um experimento e se os testes devem ser repetidos ou o equipamento reparado. Além disso, se o plano de teste exigir vários ciclos de lavagem do mesmo item de EPI, os dados podem ajudar a determinar por quanto tempo os itens de EPI mantêm sua integridade para uso durante a lavagem. Manter um registo do pH da solução detergente fornece um alerta para alterações na fonte de água ou no produto detergente. Manter um registro de tempo das etapas de lavagem garante que o temporizador na lavadora e secadora não cause variações no protocolo experimental.
Em última análise, esses dados são usados para relatar a eficácia da desinfecção do procedimento de lavagem de água quente contra um substituto para patógenos virais. A eficácia da desinfecção por lavagem (Eqn. 1) é calculada pela subtração da média de recuperações de vírus log 10 do cupom de teste de EPI da média de recuperações de vírus log10 de resultados de controle positivo de EPI (Figura 4). Para resultados de cupom de teste que não são detectados, o log10 do limite de detecção é usado no cálculo da eficácia da desinfecção. É comum relatar a eficácia da desinfecção como valores logarítmicos para comparação com outras técnicas e padrões de desinfecção viral.
Eficácia da Desinfecção = Média log 10 (Controles Positivos) - Média log10 (Cupons de Teste) (Eqn. 1)
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64164/64164fig3v2.jpg"> Figura 3. Alteração das dimensões dos EPI por localização. Δ = Medição pré-teste - medição pós-teste. Um valor Δ negativo corresponde ao alongamento do item no local especificado e um valor positivo corresponde ao encolhimento. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/64164fig3v2large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64164/64164fig04.jpg"> Figura 4. Eficácia da lavagem de água quente na desinfecção de materiais de coberturas faciais, jeans e esfoliação de EPIs de Phi6. As estrelas denotam que a desinfecção completa ocorreu (não detecta nos cupons de teste). As barras de erro indicam desvio padrão (n = 3). As letras de localização correspondem ao posicionamento representado na Figura 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/64164fig04large.jpg" target="_blank">Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
Tabela 1. Receitas de solução. Ingredientes e quantidades necessárias para preparar ágar tríptico de soja, caldo de soja tríptico e soluções de extrato de carne bovina. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/Table1_Solutions.xlsx" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar esta Tabela.</a>
Tabela 2. Uma parte de exemplo de uma folha de resultados de diluição/chapeamento em série. Modelo para relatar dados microbianos brutos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/Table2_PlatingResultsSheet_RE.xlsx" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar esta Tabela.</a>
Tabela 3. Resultados microbianos de cobertura facial. Exemplo de folha de resumo para dados de unidade formadora de placa (PFU) processada. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/Table%203%20Viral%20Recovery%20Results_Re.xlsx" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar esta Tabela.</a>
Tabela 4. Controle de qualidade de esfoliantes e registro de avaliação de materiais. Modelo para relatar calibração de sonda de pH, pH de solução detergente, medições pré e pós-lavagem e tempos de ciclo de lavagem. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64164/Table%204_scrubs%20log.xlsx" target="_blank">Por favor, clique aqui para baixar esta Tabela.</a>

Em resposta à pandemia de coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2), um protocolo de laboratório foi desenvolvido para testar a eficácia da desinfecção viral da lavagem de água quente de coberturas faciais de pano, esfoliantes de algodão e calças jeans. O vírus Phi6 (bacteriófago) foi utilizado como organismo para testar a eficácia da desinfecção.

Determinando a eficácia da desinfecção viral da lavagem de água quente

This protocol provides an example of a laboratory process for conducting laundering studies that generate data on viral disinfection. While the protocol ...

Este protocolo testa a eficácia de desinfecção da lavagem de água quente. Pode ajudar a avaliar se uma lavadora e secadora são adequadas para limpar roupas contaminadas por um vírus. A principal vantagem dessa técnica de lavagem é que ela pode ser replicada em outros laboratórios em menor escala usando procedimentos que passaram pelo processo de garantia de qualidade.Demonstrando o procedimento estarão Ahmed Abdel-Hady, um microbiologista, Mariela Monge e Jonathan Sawyer, cientistas de pesquisa e outros do nosso laboratório. Para começar, prepare o ágar tríptico de soja modificado pesando e misturando os ingredientes em água deionizada, conforme descrito no texto. Em seguida, adicione um mililitro de alíquota Phi6 concentrada não diluída ao ágar macio e 100 microlitros de uma cultura de pseudomonas syringae de fase logarítmica.Em seguida, despeje ágar macio na superfície de uma placa de ágar de soja tríptica modificada solidificada com um diâmetro de 100 milímetros. Evite bolhas ou derramamento girando as placas suavemente e distribuindo o ágar macio uniformemente sobre a superfície sólida do ágar. Após a incubação durante a noite à temperatura ambiente, raspe suavemente o conteúdo das três placas com um espalhador de células estéreis em um tubo crônico estéril de 50 mililitros contendo 15 mililitros de tampão SM.Vórtice os tubos na configuração máxima por um a dois minutos para quebrar o ágar e, em seguida, centrifuga-os por 15 minutos a 7.000 vezes G.Em seguida, colete o sobrenadante e filtre-o através de um filtro de seringa de 0,2 mícron. Armazenar o sobrenadante filtrado como alíquotas de um mililitro em criovios a 80 graus Celsius até novo uso. Realizar a avaliação visual pré-teste, medindo e registrando o comprimento e a largura dos equipamentos de proteção individual não lavados ou itens de EPI em vários locais.Para a inoculação, preparar uma solução de extrato de carne bovina a 10%, dissolvendo um grama de extrato de carne bovina em um volume total de 10 mililitros de 1X PBS. O filtro esteriliza todo o volume da solução utilizando um filtro de seringa de 0,2 mícron. Em seguida, dentro do gabinete de biossegurança, inocular os cupons de teste e controle positivo com aproximadamente 10 a sétima placa formando unidades por amostra, pipetando uma quantidade de 10 microlitros da solução no item de EPI como múltiplas gotículas e espalhando a gota usando a ponta da pipeta.Aqueça a solução de lavagem a 50 graus Celsius usando uma placa quente e agite a barra. Em seguida, meça e registre o pH e a temperatura da solução de lavagem e colete 10 mililitros de solução para verificação da esterilidade. Em seguida, despeje 3,25 litros de solução de lavagem em uma lavadora esterilizada.Coloque itens de EPI, uma cobertura facial inoculada e quatro máscaras de filme não contaminadas sem cupons na lavadora. Depois de lavar os itens de EPI por 18 minutos, escorra a lavadora e triplifique o enxágue com cinco litros de água da torneira à temperatura ambiente de cada vez para remover a espuma. Adicione 3,25 litros de água da torneira esterilizada à temperatura ambiente na lavadora e realize um ciclo de enxágue de nove minutos de duração.Em seguida, mova os itens de EPI para o lado giratório da lavadora para girar por cinco minutos. Seque os itens de EPI por 80 minutos na configuração de calor elevado de 93 graus Celsius no secador. Em seguida, mova os itens de EPI do secador para o espaço de trabalho estéril.Remova assepticamente os cupons dos itens inoculados e coloque-os em tubos cônicos. Em seguida, extraia os cupons em 10 mililitros de caldo neutralizante 10%Dey-Engley por vórtice por dois minutos na configuração máxima do equipamento. Para chapear os extractos utilizando um método convencional de sobreposição de ágar de tampa mole, adicionar alíquotas de amostra de ensaio ao tubo de ágar macio contendo seis mililitros de ágar macio e 100 microlitros das seringas P da fase logar.Em seguida, despeje o ágar macio na superfície de uma placa de ágar de soja tríptica modificada solidificada e distribua uniformemente o ágar macio sobre a superfície do ágar sólido girando a placa. Após a incubação durante a noite à temperatura ambiente, enumere manualmente as unidades de plataforma em cada placa. Os testes laboratoriais sistemáticos para avaliar a eficácia de lavagem da desinfecção viral a partir de EPIs ou roupas de tamanho normal, mostraram que a unidade de plataforma ou contagem de placas de PFU e o volume de amostra extraído permitiram o cálculo do número de unidades de plataforma por cupom de teste.Os resultados da recuperação viral representativa foram obtidos para um teste de cobertura facial. Os testes de lavagem forneceram informações sobre as propriedades do material, como o alongamento ou encolhimento dos itens de vestuário e dados de qualidade controlada do protocolo. A eficácia da lavagem de água quente na desinfecção de coberturas faciais, denim e materiais de EPI de esfoliação de Phi6 foi demonstrada neste gráfico onde as estrelas denotam a desinfecção completa.É importante usar técnicas assépticas durante todo este procedimento para evitar a contaminação cruzada. Além disso, os tempos de secagem de inóculo para cupons são exclusivos para cada material e são estabelecidos antes do teste. Outros métodos complementares incluem testes de microscopia e penetração de líquidos para explorar a degradação do material ou avaliações de tamanho adicionais, garantindo que a proteção da barreira ainda se encaixe no usuário.Essa técnica forneceu a base para ampliar a eficácia da lavagem e os testes de material para roupas e itens de EPI em grande escala. Também pode ajudar a estabelecer procedimentos eficazes de lavagem durante outro evento de contágio ou pandemia.

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Research

JoVE Journal

Engineering

Engenharia

Source: Fout, G. S., Cashdollar, J. L. EPA Method 1615. Measurement of Enterovirus and Norovirus Occurrence in Water by Culture and RT-qPCR. II. Total Culturable Virus Assay. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates the use of a total culturable virus assay to quantify infectious viruses in water samples. It outlines host cell inoculation, observation of cytopathic effect, and statistical quantification of infectious virus concentration.

Quantifying Infectious Viruses in Water Samples Using an In Vitro Total Culturable Virus Assay

Este vídeo demonstra o ensaio de inativação viral, mostrando a avaliação do impacto dos agentes antivirais nas partículas virais.

Avaliando a eficácia de um composto de teste antiviral por meio de um ensaio de inativação viral

Um método é descrito com acompanhamento visual para a realização escaláveis, selecções de alto rendimento de bibliotecas combinatórias de anticorpos sintéticos exibidos em fagos contra centenas de antigénios simultaneamente. Usando esta abordagem paralela, isolámos fragmentos de anticorpos que exibem uma elevada afinidade e especificidade para diversos antígenos que são funcionais em imunoensaios convencionais.

Selecção de alta Scalable Rendimento de bibliotecas de anticorpos em fagos sintética exibida-

O lavagem das mãos é amplamente recomendado para prevenir a transmissão de doenças infecciosas. No entanto, há pouca evidência sobre o qual os métodos de lavagem das mãos são mais eficazes na remoção de patógenos das doenças infecciosas. Desenvolvemos um método para avaliar a eficácia dos métodos de lavagem das mãos na remoção de microorganismos.

Um método para testar a eficácia do lavagem das mãos para a remoção de patógenos infecciosos emergentes

Métodos de deteção de rotina utilizando a amplificação do genoma viral são limitados pela sua incapacidade de discriminar infecciosas de partículas não-infecciosas. O objetivo deste artigo é fornecer protocolos detalhados para métodos alternativos ajudar na discriminação de partículas infecciosas norovírus usando vinculação aptamer, espalhamento dinâmico de luz e microscopia eletrônica de transmissão.

Métodos de alternativas In Vitro para a determinação da integridade estrutural do capsídeo Viral

Um laboratório rapidamente destacáveis, fora da rede foi projetado e construído para configurações globais remotas, com recursos limitados. São explorados as características e aspectos críticos dos módulos de laboratório avançado logisticamente, expansível, multifuncional. Uma lista de verificação para um fluxo de trabalho básico de laboratório e um protocolo para um teste de diagnóstico viral respiratório são desenvolvidos e apresentados.

Gerenciamento remoto do laboratório: Diagnósticos de vírus respiratório

Aqui nós apresentamos VirWaTest, que é um método simples, disponível e portátil para a concentração e a deteção dos vírus das amostras da água no ponto do uso.

VirWaTest, um método de ponto de uso para a detecção de vírus em amostras de água

Descrevemos um teste de ensaio de carga bacteriana molecular de tuberculose realizado após a inativação do calor da escória. A inativação do calor torna as amostras de espelo não infecciosas e evita a necessidade de laboratórios de nível de contenção 3 para testes moleculares de tuberculose.

Um ensaio de carga bacteriana molecular de tuberculose (TB-MBLA)

Este protocolo descreve uma abordagem que combina métodos estáticos e dinâmicos para avaliar a eficácia de peroxiácidos orgânicos para erradicar biofilmes na indústria de laticínios. Esta abordagem também pode ser usada para testar a eficácia de novas formulações biológicas ou químicas para o controle de biofilmes.

Avaliação da Eficácia dos Perácidos Orgânicos na Erradicação de Biofilmes Laticínios Usando uma Abordagem Combinando Métodos Estáticos e Dinâmicos

Este protocolo descreve os métodos para usar uma nova tecnologia de desinfecção com vaporização com peróxido de hidrogênio aerossolizado seco (aHP) que oferece conectividade hospitalar inteligente, permitindo a integração dentro de plataformas de dados para fornecer dados históricos sobre uso de equipamentos, verificação de dosagens de aHP, cobertura de salas, tempos de desinfecção e locais para reduzir infecções associadas à saúde (HAIs).

Desinfecção Automatizada de Quartos de Hospital utilizando uma nova tecnologia aerossolizada de dispersão de microgotículas de peróxido de hidrogênio

Este protocolo fornece uma estrutura sistemática para avaliar como os fitoquímicos podem potencializar os efeitos bactericidas dos biocidas tradicionais usando modelagem de atividade bactericida e ensaios de interação combinatória, que visam identificar misturas sinérgicas que melhorem o controle microbiano e reduzam o uso geral de biocidas.

In Vitro Avaliação dos Efeitos Potenciadores de Moléculas Derivadas de Plantas sobre Biocidas Convencionais

Aprenda a avaliar a eficácia da desinfecção viral da lavagem com água quente em EPIs e roupas usando o bacteriófago Phi6 como organismo modelo. Este protocolo padronizado oferece dados quantitativos sobre a redução de unidades formadoras de placas.

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