Name: Avaliação do Dano Térmico da Craniotomia Robotizada para Cirurgia de Janela de Crânio em Camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T13:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Aprenda a avaliar danos térmicos em cirurgia de janela craniana robotizada em camundongos transgênicos. Este método padronizado reduz variabilidade entre cirurgiões e minimiza lesões vasculares cerebrais durante a perfuração óssea.

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Este estudo foi apoiado em parte pelos Prêmios de Revisão de Mérito GRANT12418820 (Capadona) e GRANTI01RX003420 (Shoffstall/Capadona), e pelo Prêmio de Cientista de Carreira de Pesquisa # GRANT12635707 (Capadona) do Serviço de Pesquisa e Desenvolvimento de Reabilitação do Departamento de Assuntos de Veteranos dos Estados Unidos (EUA). Além disso, este trabalho também foi apoiado em parte pelo National Institute of Health, pelo National Institute of Neurological Disorders and Stroke GRANT12635723 (Capadona) e pelo National Institute for Biomedical Imaging and Bioengineering, T32EB004314, (Capadona/Kirsch). Este material é baseado em trabalho apoiado pela National Science Foundation Graduate Research Fellowship sob o número GRANT AWARD12635723. Quaisquer opiniões, descobertas e conclusões ou recomendações expressas neste material são dos autores e não refletem necessariamente as opiniões da National Science Foundation.

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<li>Holtmaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((high-resolution+imaging+in+the+mouse+neocortex+through+a+chronic+cranial+window%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window.</a> Nature Protocols. 4 (8), 1128-1144 (2009).</li>
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Os autores não têm conflitos de interesse a declarar. O conteúdo não representa as opiniões do Departamento de Assuntos de Veteranos dos EUA, dos Institutos Nacionais de Saúde ou do Governo dos Estados Unidos.

O uso de corante EB e imagens é simples, rápido e útil para avaliar o dano vascular no cérebro para novos métodos e técnicas. Seja usando um robô cirúrgico ou confirmando métodos atualmente feitos em laboratório, é importante validar métodos cirúrgicos para isolar os efeitos de tratamentos experimentais versus impacto cirúrgico e melhorar o bem-estar animal. Uma configuração de termopar também é útil na avaliação de métodos de perfuração para garantir que nenhum aquecimento ocorra. Sabe-se que o aumento da temperatura de...

As janelas cranianas tornaram-se utilizadas de forma ubíqua nos campos da neurociência, engenharia neural e biologia para permitir a visualização direta e a obtenção de imagens do córtex em animais vivos 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11 . A poderosa combinação de camundongos transgênicos e imagens de múltiplos fótons forneceu informações extremamente valiosas sobre a atividade do circuito e outros conhecimentos biológicos no cérebro in vivo 12,13,14,15,16,17,18. Microscópios em miniatura montados no crânio ampliaram ainda mais essas capacidades para permitir gravações em animais acordados e em movimento livre19. O processo de criação de uma janela craniana requer perfurações elétricas para afinar ou remover completamente o osso craniano para produzir craniotomias grandes o suficiente para fixar um pedaço de vidro transparente sobre o córtex20. Polidimetilsiloxano (PDMS) e outros polímeros também têm sido testados como materiais de janela craniana 9,21. Em última análise, a janela craniana ideal é aquela que não altera ou interfere com a atividade endógena normal por baixo. No entanto, é comumente aceito que a perfuração da janela craniana agrava o tecido subjacente, levando a danos ao cérebro, ruptura do ambiente e afetando meninges a ponto de ocluir a profundidade de imagens multifótons22. A neuroinflamação resultante tem uma ampla gama de efeitos que vão desde a permeabilidade da barreira hematoencefálica (BHE), até a ativação e recrutamento de células gliais ao redor do local do implante23. Portanto, caracterizar métodos de perfuração de janela craniana mais seguros e reprodutíveis é crucial para uma qualidade de imagem consistente e redução dos fatores de confusão.
Enquanto se toma cuidado para minimizar o trauma no tecido subjacente, o ato de perfurar o osso tem o potencial de causar perturbações térmicas e mecânicas ao cérebro24,25. O trauma mecânico decorrente da penetração acidental da broca na dura-máter pode induzir graus variados de lesão cortical24. No estudo de Shoffstall et al.25, o calor da perfuração óssea resultou em aumento da permeabilidade à BHE, como indicado pela presença do corante Azul de Evans (EB) no parênquima cerebral 25. O corante EB, injetado por via intravenosa, liga-se à albumina circulante na corrente sanguínea e, portanto, normalmente não atravessa um BBB saudável em concentrações apreciáveis. Como resultado, o corante EB é comumente usado como um marcador sensível da permeabilidade à BHE26,27. Embora seu estudo não tenha medido diretamente o impacto da permeabilidade da BBB nas sequelas biológicas subsequentes em estudo, estudos anteriores correlacionaram a permeabilidade à BBB a uma resposta neuroinflamatória aumentada a microeletrodos implantados cronicamente e alterações na função motora28.
Dependendo dos objetivos do estudo, a magnitude dos danos térmicos e mecânicos pode contribuir como fonte de erro experimental, afetando negativamente o rigor e a reprodutibilidade do estudo. Existem dezenas de métodos citados para a confecção de janelas cranianas, cada um utilizando diferentes equipamentos de perfuração, velocidades, técnicas e usuários 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11. Shoffstall et al.25 relataram que a variação observada nos resultados de aquecimento foi atribuída à variabilidade na força aplicada, taxa de alimentação e ângulo de aplicação da broca, entre outros aspectos que não podem ser controlados durante a perfuraçãomanual25. Acredita-se que sistemas de perfuração automatizados e outros equipamentos estereotáxicos possam melhorar a reprodutibilidade e a consistência dos resultados, mas estudos de métodos publicados não avaliaram rigorosamente a temperatura ou a permeabilidade à BHE como um dos desfechos. Portanto, há necessidade de métodos mais reprodutíveis e consistentemente aplicados para produzir janelas cranianas, bem como métodos rigorosamente aplicados para avaliar o impacto da perfuração da janela craniana no tecido neural subjacente.
O foco deste estudo é determinar e desenvolver métodos de perfuração consistentes e seguros para janelas cranianas. O tamanho da craniotomia para instalação da janela craniana é significativamente maior do que as craniotomias padrão para microeletrodos implantados no cérebro. Tais craniotomias não podem ser completadas com um único orifício de broca quando se utiliza equipamento padrão, introduzindo maior variabilidade da técnica intercirurgião quando realizadasmanualmente20. Robôs de perfuração cirúrgica têm sido introduzidos no campo, mas ainda não têm sido amplamente adotados 1,6,29. A automação da perfuração oferece controle sobre as variáveis que contribuem para a variação experimental-a-experimental, sugerindo que o uso do equipamento pode reduzir os efeitos inter e intra-cirurgião. Isso é de particular interesse dada a dificuldade adicional da craniotomia maior necessária para a colocação da janela craniana. Embora se possa supor que haja benefícios claros para o controle proporcionado pela automação da perfuração, há pouca avaliação da implementação desses equipamentos. Embora lesões visíveis não tenham sidoobservadas5, o teste de maior sensibilidade com o uso da EB é desejado.
Aqui, a permeabilidade BBB é medida usando um robô de perfuração cirúrgica disponível comercialmente com software correspondente, que permite a programação de coordenadas estereotáxicas, planejamento/mapeamento de craniotomia e uma seleção de estilos de perfuração ("ponto-a-ponto" vs "horizontal"), referindo-se ao caminho roteado da broca. Inicialmente, são perfurados oito pontos de "semente" (Figura 1A), delineando a janela craniana. A partir daqui, o espaço entre as sementes é recortado usando o método de broca "ponto a ponto" ou "horizontal". "Ponto a ponto" realiza cortes de furo piloto verticais (semelhante a uma prensa de perfuração CNC), enquanto "horizontal" realiza cortes horizontais ao longo da circunferência da janela craniana que delineia o furo (semelhante a um roteador CNC). O resultado para ambos os métodos é um pedaço de crânio que pode ser removido para revelar a janela craniana. Para isolar os danos da perfuração, a janela craniana não é removida fisicamente, de modo a evitar qualquer dano adicional. Uma combinação de corante EB acoplado a imagens fluorescentes é usada para medir a permeabilidade à BHB após a realização de craniotomias em camundongos, e um termopar inserido é usado para medir diretamente a temperatura da superfície cerebral durante a perfuração (Figura 1B,C). Observações anteriores indicaram que a perfuração pulsada liga/desliga com intervalos de 2 s foi suficiente para mitigar o aquecimento da broca25 e, portanto, está incorporada à abordagem experimental para o robô cirúrgico.
A intenção do trabalho apresentado é demonstrar métodos de avaliação de danos térmicos decorrentes da perfuração de craniotomias. Embora os métodos sejam apresentados no contexto da perfuração automatizada, tais métodos também podem ser aplicados a esquemas de perfuração manual. Esses métodos podem ser usados para validar o uso de equipamentos e/ou esquemas de perfuração antes de adotar como procedimento padrão.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64188/64188fig01.jpg"> Figura 1: Esquema de pipeline experimental. Esquema demonstrando o processo a que os animais foram submetidos para quantificação da EB pós-janela craniana. (A) Configuração esquemática do mouse com a armação estereotáxica e broca robótica cirúrgica. Um exemplo de janela craniana é mostrada sobre o córtex motor com pontos de semente (verde) e pontos de borda (azul). (B) A configuração de perfusão inclui a injeção de 1x solução salina tamponada com fosfato (PBS) em todo o animal para remover qualquer sangue, seguida de extração do cérebro. (C) O cérebro é então colocado na câmara do sistema de imagem fluorescente EB para conduzir imagens fluorescentes no corante azul de Evans. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64188/64188fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<table><tbody><tr><td>1x Tampão com Fosfato Salino Tipo: Reagente</td><td>VWR</td><td>MRGF-6235</td><td>Para Diluição Evans Blue</td></tr><tr><td>Aura Software Tipo: Ferramenta</td><td>Spectral Instruments Software</td><td></td><td>de processamento de imagens de acesso aberto para sistemas de imagem Lumina</td></tr><tr><td>Buprenorfina Tipo: Medicamento</td><td>Proveniente de Instalações de Animais</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Broca de Carboneto, 0,6mm (Broca Robotizada) Tipo:</td><td>Estoelting</td><td>de ferramentas 58640-1</td><td></td></tr><tr><td>Carprofeno Tipo: Medicamento</td><td>proveniente de Biotério</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cefazolina Tipo: Medicamento</td><td>Proveniente de Biotério</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Evans Blue Dye Tipo: Reagente</td><td>Millipore Sigma</td><td>E2129</td><td>Reconstituído em 1x solução salina tamponada com fosfato</td></tr><tr><td>Isoflurano Tipo: Medicamento</td><td>Proveniente do Biotério</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IVIS Lumina II Tipo: Ferramenta</td><td>Perkin Elmer</td><td>CLS136334</td><td>IVIS Lumina III atualmente no lugar do Lumina II no mercado</td></tr><tr><td>Termômetro Linearizador Jenco Tipo: Ferramenta</td><td>Jenco</td><td>765JF</td><td>Para configuração</td></tr><tr>do<td>termopar Cetamina Tipo: Medicamento</td><td>Proveniente do Biotério</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LivingImage Tipo: Ferramenta</td><td>Software Perkin Elmer</td><td></td><td>para IVIS Lumina III</td></tr><tr><td>Marcaine Tipo: Medicamento</td><td>Proveniente de Animal Facility</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neurostar Software Tipo: Armazenamento</td><td>de</td><td></td> Ferramentas <td>Vem com compra de robô cirúrgico</td></tr><tr><td>Physiosuite com MouseSTAT&reg; Oxímetro de pulso e Monitor de Freqüência Cardíaca Tipo: Ferramenta</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-03</td><td>Usado para monitorar os sinais vitais</td></tr><tr><td>Ratos PrismPlus Tipo: Animal</td><td>Jackson Labortory</td><td>031478, RRID:IMSR_JAX:031478, Macho, ~8 meses de idade</td><td>Animais usados para o estudo</td></tr><tr><td>Broca de Armazenamento e Robô de Injeção para Instrumentos Estereotáxicos Motorizados Tipo: Ferramenta</td><td>Stoelting</td><td>58640</td><td>Broca robótica principal com estrutura estereotáxica</td></tr><tr><td>Tipo de termopar : Ferramenta</td><td>TC Direct</td><td>206-557</td><td>Para configuração de termopar</td></tr><tr><td>USB-6008 E/S multifuncional DAQ Tipo: Ferramenta</td><td>National Instruments</td><td>USB-6008</td><td>Para configuração de termopar</td></tr><tr><td>Xilazina Tipo: Medicamento</td><td>proveniente de Animal Facility</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação do dano térmico da craniotomia robotizada para cirurgia de janela de crânio em camundongos

Assessment of Thermal Damage from Robot-Drilled Craniotomy for Cranial Window Surgery in Mice

A cirurgia da janela craniana permite a obtenção de imagens de tecido cerebral em camundongos vivos com o uso de multifótons ou outras técnicas de imagem intravitais. No entanto, ao realizar qualquer craniotomia à mão, muitas vezes há dano térmico ao tecido cerebral, que é inerentemente variável de cirurgia para cirurgia e pode ser dependente da técnica individual do cirurgião. A implementação de um robô cirúrgico pode padronizar a cirurgia e levar a uma diminuição do dano térmico associado à cirurgia. Neste estudo, três métodos de perfuração robótica foram testados para avaliar o dano térmico: horizontal, ponto a ponto e pulsado ponto a ponto. A perfuração horizontal utiliza um esquema de perfuração contínua, enquanto a perfuração ponto a ponto faz vários furos que abrangem a janela craniana. O pulsado ponto a ponto adiciona um esquema de perfuração "2 s on, 2 s off" para permitir o resfriamento entre as perfurações. A imagem fluorescente do corante Azul de Evans (EB) injetado por via intravenosa mede os danos ao tecido cerebral, enquanto um termopar colocado sob o local de perfuração mede o dano térmico. Os resultados do termopar indicam uma diminuição significativa na mudança de temperatura no grupo pulsado ponto a ponto (6,90 °C ± 1,35 °C) em comparação com os grupos horizontal (16,66 °C ± 2,08 °C) e ponto a ponto (18,69 °C ± 1,75 °C). Da mesma forma, o grupo pulsado ponto a ponto também mostrou presença significativamente menor de EB após a perfuração da janela craniana em comparação com o método horizontal, indicando menos danos aos vasos sanguíneos no cérebro. Assim, um método de perfuração ponto a ponto pulsado parece ser o esquema ideal para reduzir o dano térmico. Uma furadeira robótica é uma ferramenta útil para ajudar a minimizar o treinamento, a variabilidade e reduzir os danos térmicos. Com a expansão do uso de imagens multifótons em laboratórios de pesquisa, é importante melhorar o rigor e a reprodutibilidade dos resultados. Os métodos abordados aqui ajudarão a informar outros sobre como usar melhor esses robôs cirúrgicos para avançar ainda mais no campo.

Avaliação térmica O potencial de dano térmico foi avaliado medindo-se a mudança de temperatura em relação à linha de base devido à perfuração usando métodos horizontal (Figura 2A), ponto a ponto (Figura 2B) e pulsado ponto a ponto (Figura 2C). A Figura 2D mostra o arranjo experimental para a obtenção de dados térmicos. Um tamanho de amostra de N = 4 janelas cranianas foi utilizado pa...

As janelas cranianas tornaram-se uma técnica cirúrgica onipresente para permitir imagens intravitais em camundongos transgênicos. Este protocolo descreve o uso de um robô cirúrgico que realiza perfuração óssea semi-automatizada de janelas cranianas e pode ajudar a reduzir a variabilidade cirurgião-cirurgião e mitigar parcialmente os danos da barreira térmica hematoencefálica.

Avaliação do Dano Térmico da Craniotomia Robotizada para Cirurgia de Janela de Crânio em Camundongos

Cranial window surgery allows for the imaging of brain tissue in live mice with the use of multiphoton or other intravital imaging techniques. However, ...

Este protocolo fornece um método para avaliar o dano vascular como resultado da perfuração da janela craniana. Um robô cirúrgico oferece consistências aprimoradas entre os procedimentos, reduzindo a quantidade de treinamento para aprender a técnica. Durante esse procedimento, utilizamos injeções cranianas, que podem ser muito desafiadoras.Recomendamos treinamento extensivo para aqueles que são novos na técnica. Para começar, configure o sistema conforme descrito no manuscrito e realize a calibração do quadro seguindo o manual do robô cirúrgico. Navegue até o software cirúrgico e crie um novo projeto selecionando começar com um projeto limpo.Em seguida, defina o assunto como mouse na parte superior para designar o atlas de coordenadas de perfuração a ser usado. Em seguida, selecione iniciar novo projeto e clique em planejamento no canto inferior esquerdo para navegar até a tela de planejamento de coordenadas de perfuração. Crie o esquema de perfuração para a técnica de janela craniana a ser realizada clicando em qualquer lugar no atlas estereotáxico.Use bregma como referência e insira as coordenadas para o córtex motor conforme descrito no manuscrito. Pressione Enter no teclado para atualizar as coordenadas selecionadas. Clique em destino da loja para salvar essas coordenadas e inserir um nome apropriado.Em seguida, clique no botão mover no canto inferior esquerdo para navegar de volta para a tela de perfuração principal. Clique em ferramentas, projete e salve como opção para reutilizar este projeto de modelo para projetos posteriores, pois ele manterá automaticamente as coordenadas de perfuração. Primeiro, administrar injeções subcutâneas de antibióticos, cefazolina, analgésico, carprofeno e buprenorfina no camundongo anestesiado.Em seguida, coloque o mouse em uma bolsa térmica e mantenha a anestesia com isoflurano a 0,5% a 2% por inalação através de um cone nasal. Monte o animal na estrutura estereotáxica do robô cirúrgico usando barras auriculares fornecidas e avalie rotineiramente os sinais vitais e a profundidade anestésica através da pinça dos dedos. Em seguida, esfregar a área cirúrgica com gluconato de clorexidina e isopropanol a 70% para esterilização.E coloque um filme plástico estéril sobre o mouse e armação estereotáxica para manter a esterilidade durante a cirurgia. Usando uma lâmina de bisturi, realizar uma incisão de uma polegada na linha média do crânio, começando na parte de trás dos olhos, secar e limpar o crânio usando peróxido de hidrogênio a 3% com aplicadores de algodão. Para preparar a cauda para injeção fácil, limpe com álcool.Usando o polegar e o indicador, dobre a cauda para expor a veia da cauda em cima da curvatura da cauda. Insira a seringa paralelamente à veia e injete lentamente o volume de azul de Evans. Uma vez injetado, aguarde cinco minutos para permitir que o azul de Evans circule.Uma injeção bem-sucedida é imediatamente verificada quando as extremidades do mouse e a janela cirúrgica ficam azuis. Uma vez que o crânio está preparado para perfuração, navegue de volta para o software cirúrgico e clique em ferramentas. Em seguida, selecione projeto, seguido de novo e selecione um projeto de modelo no menu suspenso para escolher um projeto de modelo.Selecione os mesmos elementos de protocolo. Clique em planejamento, selecione os parâmetros de perfuração para transportar para este novo projeto e clique em iniciar novo projeto. Em seguida, corrija a broca e o quadro para contabilizar a inclinação e o dimensionamento do crânio do mouse do animal atual clicando em Ferramentas e selecione Correto para inclinação e dimensionamento para abrir a tela de correções.Na parte superior da tela, certifique-se de que a broca esteja ativa clicando no botão vermelho claro Depois que a correção tiver sido executada, saia da janela de correção clicando em fechar no meio inferior da tela e navegue até a tela de perfuração clicando em ferramentas e, em seguida, selecionando broca para iniciar o procedimento de perfuração. Confirme o local da broca selecionando a janela de forma da craniotomia na parte superior da tela, seguida pela visualização dos detalhes do alvo de perfuração na lista suspensa abaixo. Para realizar a perfuração manual de pulso, desative o recurso de parada automática desmarcando a caixa de seleção ao lado da opção de parada automática no menu de perfuração, que permite controlar quando a broca está desligada para o pulso.No menu de perfuração, selecione 100 micrômetros como o avanço da profundidade da perfuração. Abra o menu do local de perfuração e navegue até o primeiro local de perfuração. Use o botão de avanço ou os controles manuais para abaixar a broca até que ela toque o crânio e pressione a superfície ajustada assim que a broca atingir o crânio.Depois de pronto, clique em avançar para iniciar a perfuração. E depois que a broca tiver avançado 100 micrômetros, pressione Escape duas vezes para parar a broca. Após dois segundos, repita este ciclo para a profundidade do crânio.Para cada ponto de semente e borda durante a perfuração, certifique-se de definir a dura-máter usando o botão no menu de perfuração assim que a dura-máter sido atingida. Meça as mudanças de temperatura do crânio e do cérebro usando um termopar em combinação com os três diferentes esquemas de perfuração conectados a um sistema de aquisição de dados, que permite que a medição seja lida no MATLAB. Monte um mouse cadáver na estrutura estereotáxica e na configuração da broca robótica.Faça manualmente um pequeno orifício a aproximadamente dois milímetros de distância de onde a janela craniana será feita na lateral do crânio, o que permite que o termopar seja deslizado para a posição sob onde ocorre a perfuração da janela craniana. Inicie o processo de perfuração para cada um dos três esquemas como demonstrado anteriormente, resultando em picos devido à mudança de temperatura, indicando que o aquecimento ocorre perto do cérebro à medida que a broca atravessa o crânio. O potencial de dano térmico foi avaliado medindo-se a mudança de temperatura em relação à linha de base devido à perfuração usando métodos horizontais, ponto a ponto e pulsado ponto a ponto.Tanto o esquema de perfuração horizontal quanto o ponto a ponto mostram diferenças não significativas nas mudanças térmicas. No entanto, a mudança para um método pulsado ponto a ponto resultou em significativamente menos aquecimento do cérebro do que a perfuração horizontal e ponto a ponto. A perfuração de borda horizontal levou 300 segundos, enquanto a perfuração de borda ponto a ponto levou 200 segundos.O método de pulso levou mais tempo com a perfuração da semente e da borda, levando aproximadamente 500 segundos cada. Para monitorar a relação entre o esquema de perfuração e o dano vascular, imagens fluorescentes com azul de Evans foram realizadas. A perfuração via corte horizontal e ponto a ponto foi vista como prejudicial à vasculatura no cérebro.Em comparação com os grupos controle, o método pulsado ponto a ponto teve menos danos localizados na semente e no ponto de borda, mas ainda tinha presença visível de azul de Evans dentro da janela craniana. Ao perfurar manualmente, é crucial verificar a craniotomia após o avanço da broca para garantir que a dura-máter não seja rompida. Além das janelas cranianas, um robô cirúrgico pode ser usado para craniotomias padrão para melhorar os resultados cirúrgicos.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este vídeo e protocolo de demonstrar como a implantação de um vidro coberto janela craniana em roedores. Estas preparações podem ser usados ​​para doenças crônicas in vivo de dois fótons de imagens do neocórtex em escalas de tempo de meses. Também pode ser utilizado para outros tipos de imagem, incluindo imagens sinal óptico intrínseco.

Um procedimento de cirurgia Craniotomia para Brain Imaging crônica

Lateral fluido percussão (LFP), um modelo estabelecido de lesão cerebral traumática em camundongos, é demonstrada. LFP preenche três critérios principais para modelos animais: relevância, fiabilidade, validade e clínicos. O procedimento, que consiste em craniotomia cirúrgico, a fixação do cubo seguida de indução de lesão, resultando em lesões focais e difusas, é descrito.

Percussão Fluid lateral: Modelo de Lesão em Ratos

Este vídeo apresenta um procedimento cirúrgico para implantar janela craniana em um modelo de camundongo para acesso óptico estável a diferentes regiões do cérebro.

Implantação de janela de imagem craniana em modelo de camundongo: um procedimento cirúrgico para implantar lamínula à base de vidro para acesso óptico estável a regiões do cérebro murino

Este vídeo demonstra o procedimento para induzir uma lesão cerebral traumática de crânio aberto em um camundongo, fazendo uma incisão na linha média do crânio, perfurando o crânio e removendo a aba óssea para expor o córtex cerebral e aplicando alta pressão para induzir trauma. A ferida é então suturada para preparar o modelo de camundongo para experimentos subsequentes.

Gerando um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática usando uma sonda impactadora

Trauma cerebral aguda é uma lesão grave que não tem tratamento adequado à data. Microscopia Multiphoton permite estudar longitudinalmente o processo de desenvolvimento agudo trauma cerebral e sondagem estratégias terapêuticas em roedores. Dois modelos de trauma cerebral aguda estudou com in vivo de dois fótons de imagem de cérebro são demonstrados neste protocolo.

Aguda Cérebro Trauma em camundongos seguiu por Longitudinal dois fótons de imagem

Lesões cerebrais traumáticas (TCEs) continuam sendo um sério problema de saúde. Utilizando o modelo de cirurgia de impacto cortical controlado, pesquisas sobre os efeitos do TCE e possíveis métodos de tratamento podem ser realizadas.

Controlado Modelo Impact Cortical para lesão cerebral traumática

Este protocolo demonstra as metodologias para um modelo do rato do ferimento de cérebro traumático do abrir-crânio e a transplantação de pilhas células-derivadas pluripotentes induzidas humanas cultivadas no local da lesão. Os testes comportamentais e histologic dos resultados destes procedimentos são descritos igualmente em breve.

Modelo de impacto cortical controlado da lesão cerebral do rato com transplantação terapêutica de células neurais pluripotentes induzidas humanas da pilha de haste

Aqui nós descrevemos um protocolo para a indução de ferimento de cérebro traumático murino através de um impacto cortical controlado da abrir-cabeça.

Modelo murino de impacto cortical controlado para a indução de traumatismo cranioencefálico

Este estudo demonstra a entrega de um traumatismo cranioencefálico repetitivo em camundongos e o implante simultâneo de uma janela craniana para posterior imagem intravital de um EGFP expresso por neurônio usando microscopia de dois fótons.

Imagem Intravital da Expressão de Proteínas Fluorescentes em Camundongos com Traumatismo Cranioencefálico de Crânio Fechado e Janela Craniana Usando um Microscópio de Dois Fótons

Este protocolo descreve um método cirúrgico em duas fases para criar uma grande janela craniana revedável e preservadora da dura-máter em camundongos. Essa técnica permite registros eletrofisiológicos crônicos e multimodais a partir de redes transmissas profundas do cérebro, como a Rede de Modos Padrão, ao longo de várias semanas.

Protocolo cirúrgico para uma grande janela craniana reselável que permite registros eletrofisiológicos longitudinais e multimodais da rede de modo padrão do camundongo

Aprenda a avaliar danos térmicos em cirurgia de janela craniana robotizada em camundongos transgênicos. Este método padronizado reduz variabilidade entre cirurgiões e minimiza lesões vasculares cerebrais durante a perfuração óssea.

Avaliação do Dano Térmico da Craniotomia Robotizada para Cirurgia de Janela de Crânio em Camundongos

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