Detecção de Intermediários de Recombinação Homóloga via Ligadura de Proximidade e PCR Quantitativa em Saccharomyces cerevisiae

Os ensaios de captura e extensão do D-loop são os primeiros a permitir a quantificação imparcial e direta das etapas de formação e extensão do D-loop durante a recombinação homóloga em células de levedura de crescimento mitoticamente. Esta técnica independente de viabilidade permite o estudo de proteínas no metabolismo da alça D que de outra forma não seriam possíveis de se desvencilhar de papéis posteriores, apenas olhando para os produtos BIR. No futuro, imaginamos a transição desses ensaios para células humanas para entender melhor o papel das proteínas-chave, incluindo o BRCA2 e os casos de bloom e Warner kilo na recombinação homóloga.

Comece centrifugando as amostras por cinco minutos. Ressuscite o pellet em 2,5 mililitros de solução de 1x psoraleno e transfira-o para uma placa de Petri de 60 por 15 milímetros. Para nenhum controle de reticulação, ressuspenda o pellet em 2,5 mililitros da solução TE1.