Geração de um Modelo de Decidualização Artificial em Camundongos com Ovariectomia para Pesquisa em Decidualização Endometrial

O comprometimento da descentralização leva ao vírus de distúrbios endometriais, como na fatalidade, um aborto espontâneo recorrente. Este método fornece um modelo animal bom e confiável para o estudo da descentralização endometrial. Este modelo de descentralização artificial com Ovariectomia pode evitar a influência da angelina sobre os hormônios, que muitas vezes podem ser altamente reprodutíveis com pequenas diferenças dentro dos grupos.

Iniciar a esterilização dos instrumentos cirúrgicos com um esterilizador de alta temperatura e alta pressão um dia antes da operação. Aplique a pomada protetora dos olhos nos globos oculares para evitar o ressecamento durante a anestesia. Inicie a operação quando os ratos estiverem completamente anestesiados.

Coloque os ratos na posição prona na superfície de operação e raspe os cabelos nas costas depois de molhá-los com água e sabão. Desinfetar a pele com etanol 70%. Encontrar o local da incisão da operação a 0,5 centímetros na borda superior da raiz da coxa de ambos os membros posteriores paralelos à coluna vertebral.

Tome o local da incisão como centro e desinfete a área da incisão com iodóforo, três vezes. Faça uma incisão longitudinal de cerca de 0,5 a um centímetro usando tesoura. Corte a fáscia e separe passivamente os músculos com uma pinça.

Encontre um pedaço do coxim de gordura branca no campo de incisão perto do polo inferior do rim através da fina camada muscular. Aperte a massa gorda com clipes hemostáticos e puxe o ovário envolvido pelo coxim gorduroso para fora da incisão. Aperte a junção do ovário e das trompas de Falópio com uma pinça curva e remova o ovário ao longo do pedículo ovariano com uma tesoura.

Pare de sangrar usando uma caneta de eletrocoagulação ou uma agulha de uma seringa de um mililitro aquecida na lâmpada de álcool. Enxaguar a incisão cirúrgica com soro fisiológico para evitar a adesão tecidual. Use uma sutura 4-0 para semear o músculo e a pele, respectivamente, e desinfete a incisão cirúrgica com iodóforo novamente.

Coloque os ratos na posição prona na gaiola e ressuscite-os em uma incubadora de 25 graus Celsius. Equipado com fonte de luz e sistema de ventilação por cerca de duas horas. Preste atenção aos ratos após a operação.

Coloque-os de volta no local de alimentação original sozinhos até que se recuperem completamente e dê-lhes água e comida suficientes. Injetar por via subcutânea 100 nanogramas de estrogênio em 50 microlitros de óleo de gergelim em cada camundongo por três dias seguidos de dois dias de descanso. Injete um miligrama de progesterona e 10 nanogramas de estrogênio em 50 microlitros de óleo de gergelim em cada camundongo por mais três dias.

Operar os camundongos para induzir o modelo de residualização artificial seis horas após a terceira injeção combinada de estrogênio progesterona. Encontre o chifre do útero na extremidade inferior das trompas de Falópio e injete 20 microlitros de óleo de gergelim lentamente ao longo do corno uterino. Empurre o tecido para trás, suture a incisão e deixe o rato recuperar.

Fixar de três a cinco mililitros do tecido uterino com formalina a 10% embebida em parafina e seccioná-los. Corar os cortes com hematoxilina e eosina para observar as alterações morfológicas. Incorpore mais três a cinco milímetros do tecido do útero em temperatura de corte ideal, congele o composto em nitrogênio líquido e armazene em um freezer de 80 graus Celsius negativos.

Corte congelado do tecido em 10 micrômetros e detecção da atividade da fosfatase alcalina no tecido uterino pelo método de acoplamento Azo. A morfologia geral do útero artificial descentralizado de camundongos induzido por óleo é mais próxima da do útero na gravidez. O corpo uterino torna-se espesso e a cavidade uterina torna-se menor do que o lado não induzido.

O volume e o peso do corno uterino induzido são significativamente maiores do que o do lado não induzido. A coloração de hematoxilina e eosina do tecido uterino mostrou que as glândulas desaparecem e as células do estroma endometrial final do rasgo induzido se diferenciam em grandes células deciduais redondas citoplasmáticas e decíduas multinucleadas com limites celulares pouco claros. Os cortes laterais não induzidos mostram a morfologia do tecido endometrial em estado fisiológico normal.

O resultado do método de acoplamento Azo mostrou que o teor de fosfatase alcalina do lado induzido por óleo foi significativamente maior do que o do lado não induzido. Os resultados da QPCR mostraram que a expressão de RNAm de PRL-8-A-2, ALPL e IGFBP-1 no corno induzido foi significativamente maior do que no corno não induzido, sugerindo que o óleo pode induzir descentralização artificial em camundongos. A suplementação de homo é um processo demorado que requer atenção especial a contaminação entre homos, que é a chave para o sucesso.

Com base neste modelo pode ser realizada a injeção de adenovírus no corno uterino que pode estudar o mecanismo relevante de moléculas específicas reguladoras da residualização.