Name: Geração de um Modelo de Decidualização Artificial em Camundongos com Ovariectomia para Pesquisa em Decidualização Endometrial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Aprenda a gerar um modelo de decidualização artificial em camundongos ovariectomizados para pesquisa em biologia reprodutiva. Este método oferece resultados reprodutíveis para estudar distúrbios endometriais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores desejam agradecer o apoio da National Nature Science Foundation of China (82001629, XQS), do Programa Jovem da Fundação de Ciências Naturais da Província de Jiangsu (BK20200116, XQS) e do Financiamento de Pesquisa de Pós-doutorado da Província de Jiangsu (2021K277B, XQS).

Todos os experimentos com animais descritos foram aprovados pelo Comitê de Uso e Cuidado de Animais do Hospital da Torre de Tambor Afiliado da Faculdade de Medicina da Universidade de Nanjing (nº 20171202). Todas as operações seguem os cuidados e uso adequado dos animais e as diretrizes nacionais.
NOTA: Os camundongos foram criados em ambiente específico livre de patógenos (FPS), com temperatura de 22 °C ± 1 °C, umidade relativa do ar de 50% ± 1%, ciclo claro/escuro de 12 h/12 h e livre acesso a água e ração.
1. Ooforectomia de camundongos
<ol><li>Esterilizar os instrumentos cirúrgicos com um esterilizador de alta temperatura e alta pressão 1 dia antes da operação.</li>
	<li>Pesar camundongos C57BL/6 de 8 semanas de idade e injetar pentobarbital sódico a 1% por via intraperitoneal (i.p.) para anestesiar os camundongos. A dose utilizada é de 40 mg/kg17. Esta dose fornece 40-60 minutos de sedação, que atende aos requisitos de uma ooforectomia. Para analgesia pré-operatória, injetar 5 mg/kg de meloxicam (s.c.) em camundongos. NOTA: O sucesso da anestesia em camundongos pode ser indicado pelo desaparecimento dos reflexos musculares profundos e respiração estável. Os sinais de anestesia bem-sucedida incluem não piscar ao tocar o canto interno, não engolir ao puxar a língua, não dobrar a perna ao beliscar a pele entre os dedos dos pés e não quicar ao agulhar a cauda.</li>
	<li>Aplique a pomada protetora dos olhos nos globos oculares para evitar o ressecamento durante a anestesia.</li>
	<li>Inicie a operação quando os ratos estiverem completamente anestesiados. Coloque e fixe os ratos na posição prona na superfície de operação e raspe os pelos nas costas depois de molhá-los com água e sabão. Desinfetar a pele com etanol 70% após o barbear.</li>
	<li>Localizar o local da incisão da operação a 0,5 cm (ou 1,0 cm abaixo da costela) na borda superior da raiz da coxa de ambos os membros posteriores paralelos à coluna vertebral (Figura 1A). NOTA: A localização correta da incisão é essencial para localizar rapidamente o ovário.</li>
	<li>Tome o local da incisão como centro e desinfete a área da incisão com iodóforo 3x, em seguida, coloque um pano cirúrgico ao redor da área da incisão.</li>
	<li>Faça uma incisão longitudinal de cerca de 0,5-1,0 cm usando tesoura. Corte a fáscia e separe passivamente os músculos com uma pinça.</li>
	<li>Encontrar um pedaço do coxim gorduroso branco no campo de incisão próximo ao polo inferior do rim através da fina camada muscular (Figura 1B). NOTA: O coxim de gordura branca é o indicador mais óbvio da localização do ovário.</li>
	<li>Aperte a massa gorda com clipes hemostáticos e puxe o ovário envolvido pelo coxim gorduroso para fora da incisão.</li>
	<li>Aperte a junção do ovário e da tuba uterina com uma pinça curva e remova o ovário ao longo do pedículo ovariano com uma tesoura. Pare o sangramento usando uma caneta de eletrocoagulação ou uma agulha de uma seringa de 1 mL aquecida na lâmpada de álcool. NOTA: Certifique-se de preservar a trompa de Falópio, que é o marco anatômico para a subsequente injeção de óleo de gergelim nos chifres uterinos.</li>
	<li>Enxaguar a incisão cirúrgica com soro fisiológico para evitar a adesão tecidual, usar uma sutura 4-0 para costurar o músculo e a pele, respectivamente, e desinfetar a incisão cirúrgica com iodóforo novamente.</li>
	<li>Coloque os camundongos em decúbito ventral na gaiola e ressuscite-os em uma incubadora de 25 °C equipada com uma fonte de luz e um sistema de ventilação por cerca de 2 h.</li>
	<li>Preste atenção aos ratos após a operação, coloque-os de volta no local de alimentação original sozinhos até que eles se recuperem completamente e dê-lhes água e comida suficientes.</li>
</ol>2. Repouso pós-operatório e formulação de estrógeno e progesterona
<ol><li>Certifique-se de que os ratos descansem por 2 semanas após a ooforectomia.</li>
	<li>Em um gabinete ultralimpo, adicione estrogênio (2 ng/μL) e progesterona (0,2 ng/μL) ao óleo de gergelim em tubos de centrífuga sem enzimas de RNA.</li>
	<li>Coloque os tubos de centrifugação num banho-maria termostático a 37 °C e agite os tubos continuamente para acelerar a dissolução.</li>
	<li>Após a dissolução completa, divida a solução de óleo de gergelim em aliqouts de 100 μL para uso conveniente. Conservar as soluções preparadas de estrogénio e progesterona num frigorífico a 4 °C.</li>
</ol>3. Modelo de decidualização artificial induzida
<ol><li>Por via subcutânea (s.c) injetar 100 ng de estrogênio em 50 μL de óleo de gergelim em cada camundongo por 3 dias, seguidos por 2 dias de repouso15. NOTA: Certifique-se de que o estrogênio e a progesterona foram formulados e colocados em lugares diferentes. Qualquer contaminação de estrogênio por progesterona pode levar à falha.</li>
	<li>Injetar (s.c.) 1 mg de progesterona e 10 ng de estrogênio em 50 μL de óleo de gergelim em cada camundongo por mais 3 dias15.</li>
	<li>Operar os camundongos para induzir o modelo de decidualização artificial15 a 6 h após a terceira injeção combinada de estrogênio e progesterona.</li>
	<li>Encontre o corno do útero na extremidade inferior das trompas de Falópio e injete 20 μL de óleo de gergelim lentamente junto com o corno uterino, empurre o tecido para trás, suture a incisão e permita que o camundongo se recupere. A abordagem da operação é a mesma da ooforectomia de camundongos15. NOTA: Só prossiga com a segunda cirurgia no caso de uma ovariectomia bem-sucedida (a incisão da pele está bem cicatrizada, o ovário é completamente excisado e a extremidade residual da tuba uterina não está aderida aos tecidos circundantes). NOTA: Para induzir o modelo AD, 20 μL de óleo de gergelim são apropriados; mais de 20 μL de óleo de gergelim penetrarão facilmente no outro lado.</li>
	<li>Injetar (s.c.) 50 μL de óleo de gergelim contendo 1 mg de progesterona e 10 ng de estrogênio (H.) por mais 4 dias. Ver detalhes na Figura 215,18.</li>
</ol>4. Coleta de amostras
<ol><li>Eutanasiar os camundongos (n = 6) por asfixia por dióxido de carbono e coletar os úteros. Observe a forma dos úteros bilaterais, tire fotos e pese os cornos uterinos (Figura 3A, B).</li>
	<li>Fixar 3-5 mm do tecido uterino com formalina a 10%, embutir em parafina e seccioná-los. Corar os cortes com hematoxilina e eosina para observar as alterações morfológicas19 (Figura 4A).</li>
	<li>Incorpore mais 3-5 mm do tecido do útero em composto de temperatura de corte ideal (OCT), congele em nitrogênio líquido e armazene em uma geladeira de -80 °C. Corte congelado do tecido a 10 μm e detecção de atividade de fosfatase alcalina no tecido uterino pelo método de acoplamento azo20 (Figura 4B). NOTA: Resultados satisfatórios podem ser obtidos usando seções congeladas para detectar o conteúdo de ALP, não cortes de parafina.</li>
	<li>Extrair os RNAs totais do útero com o reagente Trizol e realizar PCR quantitativo em tempo real (qPCR) em um sistema de PCR em tempo real (Tabela de Materiais) com mix mestre de qPCR (Tabela de Materiais) para detectar a expressão relativa de RNAm do membro 2 da subfamília 2 da família prolactina 8 (Prl8a2), fosfatase alcalina fígado/osso/rim (Alpl) e proteína ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina 1 (Igfbp1)15 por normalização para os níveis de mRNA 18S (Figura 4C-E ). Siga as condições de PCR: Estágio 1, 95 °C por 30 s; Estágio 2, 95 °C por 10 s e 60 °C por 30 s; repita o ciclo 40x. Uma lista completa das sequências de primers é fornecida na Tabela 1.</li>
	<li>Analise os dados da qPCR usando o método 2-ΔΔCT e um método de teste t para análise estatística no software apropriado. Neste estudo, considerou-se estatisticamente significante p < 0,05.</li>
</ol>

<ol><li>Carson, S. A., Kallen, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+management+of+infertility%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and management of infertility: A review.</a> JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).</li>
<li>Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetics+of+human+female+infertility+dagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Genetics of human female infertility dagger.</a> Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).</li>
<li>Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+mechanisms+of+endometrial+decidualization+and+pregnancy-related+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Regulatory mechanisms of endometrial decidualization and pregnancy-related diseases.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 52 (2), 105-115 (2020).</li>
<li>Ng, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+decidualization%3A+The+primary+driver+of+pregnancy+health%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Endometrial decidualization: The primary driver of pregnancy health.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 4092(2020).</li>
<li>Birgit, G., Brosens, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+decidualization+of+the+human+endometrium+in+reproductive+health+and+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Cyclic decidualization of the human endometrium in reproductive health and failure.</a> Endocrine Reviews. 35 (6), 851-905 (2014).</li>
<li>Owusu-Akyaw, A., Krishnamoorthy, K., Goldsmith, L. T., Morelli, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mesenchymal-epithelial+transition+in+endometrial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction+Update%22%5BJournal%5D)">The role of mesenchymal-epithelial transition in endometrial function.</a> Human Reproduction Update. 25 (1), 114-133 (2019).</li>
<li>Paulson, E. E., Comizzoli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+receptivity+and+embryo+implantation+in+carnivores-commonalities+and+differences+with+other+mammalian+species%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial receptivity and embryo implantation in carnivores-commonalities and differences with other mammalian species.</a> Biology of Reproduction. 104 (4), 771-783 (2021).</li>
<li>Kelleher, A. M., Milano-Foster, J., Behura, S. K., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+glands+coordinate+on-time+embryo+implantation+and+impact+endometrial+decidualization+for+pregnancy+success%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Uterine glands coordinate on-time embryo implantation and impact endometrial decidualization for pregnancy success.</a> Nature Communications. 9 (1), 2435(2018).</li>
<li>Tian, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuated+monoamine+oxidase+a+impairs+endometrial+receptivity+in+women+with+adenomyosis+via+downregulation+of+FOXO1dagger%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Attenuated monoamine oxidase a impairs endometrial receptivity in women with adenomyosis via downregulation of FOXO1dagger.</a> Biology of Reproduction. 105 (6), 1443-1457 (2021).</li>
<li>Large, M. J., DeMayo, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regulation+of+embryo+implantation+and+endometrial+decidualization+by+progesterone+receptor+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+and+Cellular+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">The regulation of embryo implantation and endometrial decidualization by progesterone receptor signaling.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 358 (2), 155-165 (2012).</li>
<li>Dunn, C. L., Kelly, R. W., Critchley, H. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decidualization+of+the+human+endometrial+stromal+cell%3A+an+enigmatic+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22Reproductive+BioMedicine+Online%22%5BJournal%5D)">Decidualization of the human endometrial stromal cell: an enigmatic transformation.</a> Reproductive BioMedicine Online. 7 (2), 151-161 (2003).</li>
<li>Zhu, H., Hou, C. C., Luo, L. F., Hu, Y. J., Yang, W. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+stromal+cells+and+decidualized+stromal+cells%3A+Origins%2C+transformation+and+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Endometrial stromal cells and decidualized stromal cells: Origins, transformation and functions.</a> Gene. 551 (1), 1-14 (2014).</li>
<li>Jose, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+and+decidual+stromal+precursors+show+a+different+decidualization+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial and decidual stromal precursors show a different decidualization capacity.</a> Reproduction. 160 (1), 83-91 (2020).</li>
<li>Pan-Castillo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphophysical+dynamics+of+human+endometrial+cells+during+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Morphophysical dynamics of human endometrial cells during decidualization.</a> Nanomedicine. 14 (7), 2235-2245 (2018).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+mouse+decidualization+models+at+the+molecular+level%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of mouse decidualization models at the molecular level.</a> Genes. 11 (8), 935(2020).</li>
<li>De Clercq, K., Hennes, A., Vriens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+mouse+endometrial+epithelial+and+stromal+cells+for+in+vitro+decidualization%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation of mouse endometrial epithelial and stromal cells for in vitro decidualization.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55168(2017).</li>
<li>Kerger, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+oxygen+delivery+and+interstitial+oxygenation+during+sodium+pentobarbital+anesthesia%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Microvascular oxygen delivery and interstitial oxygenation during sodium pentobarbital anesthesia.</a> Anesthesiology. 86 (2), 372-386 (1997).</li>
<li>Filant, J., Spencer, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endometrial+glands+are+essential+for+blastocyst+implantation+and+decidualization+in+the+mouse+uterus%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Endometrial glands are essential for blastocyst implantation and decidualization in the mouse uterus.</a> Biology of Reproduction. 88 (4), 93(2013).</li>
<li>Sheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+protease+LONP1+maintains+oocyte+development+and+survival+by+suppressing+nuclear+translocation+of+AIFM1+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial protease LONP1 maintains oocyte development and survival by suppressing nuclear translocation of AIFM1 in mammals.</a> EBioMedicine. 75, 103790(2022).</li>
<li>Grogg, E., Pearse, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+azo+dye+methods+for+histochemical+demonstration+of+alkaline+phosphatase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Coupling azo dye methods for histochemical demonstration of alkaline phosphatase.</a> Nature. 170 (4327), 578-579 (1952).</li>
<li>Labarta, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+serum+and+endometrial+progesterone+in+determining+endometrial+receptivity%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Reproduction%22%5BJournal%5D)">Analysis of serum and endometrial progesterone in determining endometrial receptivity.</a> Human Reproduction. 36 (11), 2861-2870 (2021).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A decidualização em camundongos é um processo espontâneo que depende da presença de embriões, o que é diferente dos humanos. No entanto, verificou-se que a estimulação artificial, como a injeção uterina de contas de vidro e laceração uterina, pode induzir a decidualização do endométrio em vez de embriões. Além disso, pesquisadores descobriram que muitos fatores poderiam induzir a decidualização ou participar da decidualização, como a injeção de hormônios esteroides, prostaglandinas e fatores inibitórios do crescimento na...

Com o desenvolvimento da tecnologia de reprodução assistida por humanos, a atual taxa clínica de gestação de fertilização in vitro-transferência embrionária (FIV-TE) atingiu ou até mesmo excedeu a da gravidez natural. Apesar disso, muitas pacientes na prática clínica de reprodução assistida ainda são submetidas a múltiplas transferências de embriões, mas não conseguem engravidar como desejado. No entanto, seu mecanismo molecular específico ainda não está claro, de modo que a intervenção clínica é ineficaz, o que é um dos desafios significativos enfrentados pela medicinareprodutiva1,2.
Os fatores endometriais são responsáveis por cerca de dois terços das causas de falha da FIV3. A implantação do embrião humano é dividida em três etapas: posicionamento, adesão e invasão 4,5,6. O endométrio materno passa por uma série de mudanças para atender a chegada do embrião. A formação de um "período de janela" de implantação proporciona condições favoráveis para a implantação embrionária 7,8.
Na maioria dos mamíferos, após a adesão do blastocisto ao epitélio luminal do útero, as células estromais ao redor do blastocisto rapidamente começam a proliferar e se diferenciar, e a rápida remodelação do mesênquima muda sua forma e função, levando à implantação embrionária 5,9,10. O rápido aumento do volume e do peso do sítio permite que o blastocisto fique embutido no estroma uterino, processo conhecido como decidualização11. O estroma endometrial diferencia e remodela na preparação para a gestação, enquanto a transição das células estromais fornece espaço e novas conexões de sinalização para que as células deciduais desempenhem suas funções12,13. As células estromais se transformam em células deciduais e secretam muitos fatores icônicos, como prolactina (PRL), proteína ligadora do fator de crescimento semelhante à insulina 1 (Igfbp1), e assim por diante. Estudos têm mostrado que a decidualização anormal é uma das principais razões para o fracasso da implantação embrionária, mas a causa da decidualização anormal ainda não está clara e precisa ser mais bem elucidada 1,14.
O modelo de decidualização artificial em camundongos é essencial para estudar o processo fisiológico e os mecanismos moleculares subjacentes à decidualização. A decidualização artificial (DA) refere-se principalmente ao processo de decidualização endometrial estabelecido por métodos artificiais para simular a gravidez ou o ciclo menstrual. Em termos morfológicos, há pouca diferença global entre a decidualização da gestação e a decidualização artificial15,16. As glândulas uterinas existem no endométrio antes da forma de decídua e desaparecem após a decidualização. Em relação à expressão gênica, apenas uma pequena diferença é identificada entre a decidualização natural da gravidez (DNP) e aDA15. Consequentemente, o modelo de decidualização artificial em camundongos pode simular a decidualização da gravidez para explorar a patogênese desconhecida e o novo tratamento de doenças reprodutivas humanas.
NPD, AD e decidualização in vitro (IVD) são três métodos para alcançar a decidualização em camundongos. O modelo da DNP depende da gestação natural e está mais próximo do estado fisiológico materno, incluindo os efeitos dos embriões. Comparar as diferenças entre os sítios de implantação e não-implantação é uma abordagem mais fisiológica e conveniente para estudar a decidualização. O modelo AD foi desenvolvido usando uma injeção intrauterina de óleo de gergelim como estimulante para induzir a decidualização em uma rata pseudogestante acasaladas com machos vasectomizados para evitar o impacto dos embriões. Ambos os modelos de DNP e DA desempenham papéis essenciais em diferentes propósitos de pesquisa, mas não podem evitar a falha no acasalamento e as diferenças intragrupo causadas pelas diferentes atividades do metabolismo hormonal materno. IVD é um método que depende do tratamento de estrogênio e progesterona combinados em nível celular, que requer condições experimentais mais rigorosas e capacidade operacional. No entanto, o modelo in vitro não consegue simular completamente a resposta decidual em condições fisiológicas15. Portanto, propomos um método de indução simples e aprimorado modificado da DA tradicional para reduzir o efeito dos hormônios endógenos na decidualização. Baseado em garantir o sucesso da indução da decidualização, ele está mais próximo do estado fisiológico e mais adequado para experimentos que precisam excluir fatores embrionários.

<table><tbody><tr><td>Suplemento</td><td>hormonal</td><td>Estrogen Sigma</td><td>E2758</td></tr><tr><td>Progesterona</td><td>Sigma</td><td>P0130</td><td>Suplemento hormonal</td></tr><tr><td>Óleo de gergelim&nbsp;</td><td>Suplemento hormonal</td> <td>Sigma</td><td>S3547</td></tr><tr><td>Pentobarbital de sódio&nbsp;</td><td>Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd.</td><td></td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Injeção de meloxicam</td><td>Qilu Animal Health Products Co., Ltd</td><td></td><td>Analgesia</td></tr><tr><td>Kit de coloração de fosfatase alcalina (método de acoplamento kaplow's/azo)</td><td>Solarbio</td><td>G1480</td><td>Coloração de fosfatase alcalina</td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Servicebio</td><td>G1005-2</td><td>HE coloração</td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Servicebio</td><td>G1005-1</td><td>HE coloração</td></tr><tr><td>ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix</td><td>Vazyme</td><td>Q711-02</td><td>qPCR</td></tr><tr><td>70% etanol</td><td>Lircon</td><td>ZH1120090</td><td>desinfetar</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Runzekang</td><td>RZK-DF</td><td></td></tr><tr><td>desinfetar eritromicina pomada para os olhos</td><td>Guangzhou Baiyunshan</td><td></td><td>globo ocular de camundongos proteger</td></tr><tr><td>4-0 sutura</td><td>Ethicon</td><td>W329</td><td>Sutura de incisão</td></tr><tr><td>10% formalina</td><td>Yulu</td><td>L25010118</td><td>Fixação de tecido Composto</td></tr> de <tr><td>temperatura de corte ideal</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>Ssection</td></tr><tr><td>Trizol reagente</td><td>Ambion</td><td>15596018</td><td>qPCR</td></tr></tbody></table>

geração de um modelo de decidualização artificial em camundongos com ovariectomia para pesquisa em decidualização endometrial

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

A decidualização endometrial é um processo único de diferenciação do endométrio, intimamente relacionado à menstruação e à gravidez. O comprometimento da decidualização leva a vários distúrbios endometriais, como infertilidade, aborto espontâneo recorrente e parto prematuro. O desenvolvimento e o uso do modelo de decidualização endometrial em estudos reprodutivos têm sido um destaque para os pesquisadores reprodutivos há muito tempo. O camundongo tem sido amplamente utilizado no estudo da reprodução e decidualização. Existem três modelos bem estabelecidos em camundongos em relação à decidualização: decidualização natural da gravidez (NPD), decidualização artificial (AD) e decidualização in vitro (IVD). Dentre eles, o AD é considerado um modelo confiável para decidualização de camundongos, de fácil implementação e próximo ao NPD. Este trabalho enfoca um método modificado do processo de geração e aplicação do modelo de decidualização artificial de camundongos com ooforectomia para evitar efeitos ovarianos, que podem obter resultados altamente reprodutíveis com pequenas variâncias dentro do grupo. Este método fornece um bom e confiável modelo animal para o estudo da decidualização endometrial.

Os índices do modelo de decidualização em camundongos incluem a morfologia geral do útero, a razão de massa do útero decidualizado e não decidualizado, a morfologia histológica do endométrio e o nível de expressão de moléculas marcadoras de decidualização. A morfologia geral do útero artificial decidualizado de camundongos induzido por óleo é mais próxima à do útero na gestação. O corpo uterino torna-se espesso, e a cavidade uterina torna-se menor do que o lado não induzido. O volume e o peso do corno uterino induzido sã...

Aqui, descrevemos o método de geração de um modelo de decidualização artificial usando a rata ovariectomizada, um experimento clássico de decidualização endometrial no campo de pesquisa da decidualização endometrial.

Geração de um Modelo de Decidualização Artificial em Camundongos com Ovariectomia para Pesquisa em Decidualização Endometrial

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

O comprometimento da descentralização leva ao vírus de distúrbios endometriais, como na fatalidade, um aborto espontâneo recorrente. Este método fornece um modelo animal bom e confiável para o estudo da descentralização endometrial. Este modelo de descentralização artificial com Ovariectomia pode evitar a influência da angelina sobre os hormônios, que muitas vezes podem ser altamente reprodutíveis com pequenas diferenças dentro dos grupos.Iniciar a esterilização dos instrumentos cirúrgicos com um esterilizador de alta temperatura e alta pressão um dia antes da operação. Aplique a pomada protetora dos olhos nos globos oculares para evitar o ressecamento durante a anestesia. Inicie a operação quando os ratos estiverem completamente anestesiados.Coloque os ratos na posição prona na superfície de operação e raspe os cabelos nas costas depois de molhá-los com água e sabão. Desinfetar a pele com etanol 70%. Encontrar o local da incisão da operação a 0,5 centímetros na borda superior da raiz da coxa de ambos os membros posteriores paralelos à coluna vertebral.Tome o local da incisão como centro e desinfete a área da incisão com iodóforo, três vezes. Faça uma incisão longitudinal de cerca de 0,5 a um centímetro usando tesoura. Corte a fáscia e separe passivamente os músculos com uma pinça.Encontre um pedaço do coxim de gordura branca no campo de incisão perto do polo inferior do rim através da fina camada muscular. Aperte a massa gorda com clipes hemostáticos e puxe o ovário envolvido pelo coxim gorduroso para fora da incisão. Aperte a junção do ovário e das trompas de Falópio com uma pinça curva e remova o ovário ao longo do pedículo ovariano com uma tesoura.Pare de sangrar usando uma caneta de eletrocoagulação ou uma agulha de uma seringa de um mililitro aquecida na lâmpada de álcool. Enxaguar a incisão cirúrgica com soro fisiológico para evitar a adesão tecidual. Use uma sutura 4-0 para semear o músculo e a pele, respectivamente, e desinfete a incisão cirúrgica com iodóforo novamente.Coloque os ratos na posição prona na gaiola e ressuscite-os em uma incubadora de 25 graus Celsius. Equipado com fonte de luz e sistema de ventilação por cerca de duas horas. Preste atenção aos ratos após a operação.Coloque-os de volta no local de alimentação original sozinhos até que se recuperem completamente e dê-lhes água e comida suficientes. Injetar por via subcutânea 100 nanogramas de estrogênio em 50 microlitros de óleo de gergelim em cada camundongo por três dias seguidos de dois dias de descanso. Injete um miligrama de progesterona e 10 nanogramas de estrogênio em 50 microlitros de óleo de gergelim em cada camundongo por mais três dias.Operar os camundongos para induzir o modelo de residualização artificial seis horas após a terceira injeção combinada de estrogênio progesterona. Encontre o chifre do útero na extremidade inferior das trompas de Falópio e injete 20 microlitros de óleo de gergelim lentamente ao longo do corno uterino. Empurre o tecido para trás, suture a incisão e deixe o rato recuperar.Fixar de três a cinco mililitros do tecido uterino com formalina a 10% embebida em parafina e seccioná-los. Corar os cortes com hematoxilina e eosina para observar as alterações morfológicas. Incorpore mais três a cinco milímetros do tecido do útero em temperatura de corte ideal, congele o composto em nitrogênio líquido e armazene em um freezer de 80 graus Celsius negativos.Corte congelado do tecido em 10 micrômetros e detecção da atividade da fosfatase alcalina no tecido uterino pelo método de acoplamento Azo. A morfologia geral do útero artificial descentralizado de camundongos induzido por óleo é mais próxima da do útero na gravidez. O corpo uterino torna-se espesso e a cavidade uterina torna-se menor do que o lado não induzido.O volume e o peso do corno uterino induzido são significativamente maiores do que o do lado não induzido. A coloração de hematoxilina e eosina do tecido uterino mostrou que as glândulas desaparecem e as células do estroma endometrial final do rasgo induzido se diferenciam em grandes células deciduais redondas citoplasmáticas e decíduas multinucleadas com limites celulares pouco claros. Os cortes laterais não induzidos mostram a morfologia do tecido endometrial em estado fisiológico normal.O resultado do método de acoplamento Azo mostrou que o teor de fosfatase alcalina do lado induzido por óleo foi significativamente maior do que o do lado não induzido. Os resultados da QPCR mostraram que a expressão de RNAm de PRL-8-A-2, ALPL e IGFBP-1 no corno induzido foi significativamente maior do que no corno não induzido, sugerindo que o óleo pode induzir descentralização artificial em camundongos. A suplementação de homo é um processo demorado que requer atenção especial a contaminação entre homos, que é a chave para o sucesso.Com base neste modelo pode ser realizada a injeção de adenovírus no corno uterino que pode estudar o mecanismo relevante de moléculas específicas reguladoras da residualização.

generation-mouse-artificial-decidualization-model-with-ovariectomy

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Uma descrição da indução cirúrgica de endometriose em camundongos e ratos por auto-transplante de tecido do útero para a cascata arterial do mesentério intestinal.

Modelo do rato de endometriose cirurgicamente induzida pela Auto-transplante de tecido uterino

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para colher ovário intacto de um modelo de camundongo.

Colheita de ovário intacto de camundongo: um procedimento cirúrgico para isolar o ovário completo do modelo murino

Este estudo apresenta um método padronizado e validado para o isolamento e cultura de rato primária do estroma do endométrio e pelas células epiteliais, o que pode ser utilizado num sistema de co-cultura para estudo em decidualização vitro.

Isolamento de rato Endometrial epiteliais e estromais para células<em&gt; In Vitro</em&gt; decidualization

Este estudo apresenta um processo otimizado e validado para o isolamento e a cultura de células do estroma endometriais humanas para realizar o ensaio de decidualization em vitro . Além disso, este estudo fornece um método detalhado para eficientemente "knockdown" um gene específico usando siRNAs em células do estroma endometriais humanas.

Isolamento de células do estroma Endometrial humanas para In Vitro Decidualization

Aqui, apresentamos um protocolo para imagens ao vivo de fluorescente etiquetadas fragmentos endometriais humanas transplantada em ratos. O método permite estudar os efeitos das drogas de escolha no tamanho da lesão endometriotic através do acompanhamento e quantificação da fluorescência emitida pelo repórter fluorescente em tempo...

Monitorização não invasiva do tamanho da lesão em um modelo de Mouse heteróloga de endometriose

Muitos modelos de roedores de endometriose são limitados pela complexidade técnica, reprodutibilidade e/ou necessidade de animais imunocomprometidos ou ratos repórteres especiais. Apresentamos um sistema simplificado de indução de lesão utilizando qualquer camundongo experimental com um sistema de pontuação objetiva e independentemente verificável e sem necessidade de cirurgia de ovariectomia ou sobrevivência.

Um modelo de murina síndico de endometriose usando ratos naturalmente ciclistas

Este protocolo descreve metodologias para estabelecer organoides epiteliais endometriais de camundongos para expressão gênica e análises histológicas.

Estabelecendo organoides endometriais 3D do útero do rato

O estabelecimento da gravidez é um processo dinâmico que envolve o crosstalk embrionário e uterino complexo. As contribuições precisas do ambiente uterino materno para esses processos permanecem como uma área ativa de investigação. Aqui, protocolos detalhados são fornecidos para ajudar no projeto de modelos animais in vivo para abordar essas questões de pesquisa.

Métodos para o Estudo das Contribuições Uterinas para o Estabelecimento da Gestação em Modelo de Camundongo Ovariectomizado

O hormônio folículo-estimulante (FSH) em vários tecidos e órgãos extragonadais está associado à patogênese de múltiplas doenças. O modelo de camundongos ovariectomizados e tratados com FSH (OVF) pode ser usado para explorar as ações extragonadais do FSH.

Explorando os efeitos independentes do hormônio folículo-estimulante in vivo em um modelo de camundongo

Este estudo apresenta um novo modelo de camundongo projetado especificamente para simular o endometrioma, um subtipo clinicamente significativo de endometriose. Ao utilizar camundongos C57BL / 6J, o modelo visa elucidar os mecanismos fisiopatológicos subjacentes à infertilidade relacionada ao endometrioma, oferecendo uma ferramenta refinada para preencher a lacuna de conhecimento atual em medicina reprodutiva.

Estabelecimento de um modelo experimental de endometrioma em camundongos para estudar sua infertilidade relacionada

Este artigo descreve um protocolo detalhado para produzir um endométrio fino confiável e reprodutível com uma taxa de mortalidade muito baixa e aderências intrauterinas mínimas, injetando etanol a 95% no útero de camundongo em 1-3 minutos.

Estabelecendo um modelo de endométrio fino em camundongos

Aprenda a gerar um modelo de decidualização artificial em camundongos ovariectomizados para pesquisa em biologia reprodutiva. Este método oferece resultados reprodutíveis para estudar distúrbios endometriais.

Geração de um Modelo de Decidualização Artificial em Camundongos com Ovariectomia para Pesquisa em Decidualização Endometrial

Explorar mais vídeos