Análise do líquido sinovial para identificar osteoartrite

A análise do líquido sinovial pode revelar o grau de inflamação e a presença de cristais patogênicos durante a avaliação inicial de pacientes com sintomas musculoesqueléticos e derrames articulares. A principal vantagem desta técnica é a sua simplicidade e confiabilidade. Em poucos passos, o clínico pode obter informações diagnósticas importantes sobre a doença do paciente.

A identificação de cristais específicos é fundamental para o diagnóstico e tratamento. Cristais de urato indicam gota, enquanto pirofosfato de cálcio e outros cristais de cálcio indicam artropatias relacionadas ao cálcio ou uma forma mais grave de osteoartrite. Para começar, pegue a amostra de líquido sinovial coletada durante a artrocentese de articulações inchadas dos pacientes.

Anote o volume da amostra em mililitros e transfira-a separadamente para um tubo contendo EDTA anticoagulante e outro tubo sem qualquer aditivo. Nos casos suspeitos de infecção, transferir assepticamente alguns mililitros da amostra de líquido sinovial para um frasco de cultura para teste microbiológico. Para examinar macroscopicamente a amostra, pegue um tubo contendo a amostra e defina a cor da amostra, que pode variar de amarelo pálido a amarelo escuro.

Registre a presença de sangue, se houver. Defina o grau de clareza da amostra observando-a na luz de fundo e determinando a facilidade de leitura de uma página impressa através do tubo que contém a amostra. Em seguida, avalie a viscosidade da amostra pingando-a de uma pipeta descartável.

Enquanto o aparecimento de uma longa cadeia de líquido indica alta viscosidade, a formação de gotas é indicativa de baixa viscosidade. Observe a amostra através do tubo com luz no fundo para a presença de quaisquer materiais particulados, incluindo fragmentos de tecido ou fibrina. Para determinar a contagem total de leucócitos, retire 0,5 microlitros da amostra do tubo contendo EDTAA usando uma pipeta de Malassez-Potain.

Use a mesma pipeta para extrair 9,5 microlitros de solução de azul de metileno a 0,1%. Misturar a amostra e a solução de azul de metileno na pipeta por inversão suave. Descarte as primeiras gotas antes de despejar a mistura na câmara de contagem de um hemocitômetro.

Agora conte as células em dois quadrados consecutivos de nove e multiplique o número obtido por 100. Expresse a contagem total de glóbulos brancos como o número de leucócitos por milímetro cúbico. Utilizar a amostra de líquido sinovial do tubo sem qualquer aditivo para determinar a contagem diferencial de glóbulos brancos das amostras de líquido sinovial.

Para determinar a contagem diferencial de células usando coloração supravital, pegue uma lâmina pronta para uso pré-revestida com violeta de cristal e azul de metileno e coloque uma pequena gota de amostra no centro da lâmina. Em seguida, cubra a gota de amostra com uma lamínula e coloque uma gota de óleo de imersão do microscópio na lamínula. Para usar a coloração tradicional para estimar a contagem diferencial de células, comece colocando uma pequena gota da amostra no final de uma lâmina limpa.

Agora use um segundo slide ou uma lamínula para espalhar a gota ao longo do slide com um movimento para frente. Deixe a mancha secar ao ar. Examine a lâmina que contém o esfregaço seco ao ar sob a objetiva de imersão em óleo de 1,000X.

Estimar a contagem diferencial de células contando 100 células consecutivas, distinguindo as células polimorfonucleares, os monócitos e os linfócitos uns dos outros. Limpe uma lâmina de vidro com papel óptico ou macio embebido com etanol. Aplicar uma pequena gota da amostra não misturada com qualquer aditivo sobre a lâmina de vidro e cobri-la com uma lamínula antes de colocar a lâmina sob o microscópio.

Focalize a lâmina sob o microscópio usando uma objetiva de ampliação de baixa potência e examine-a cuidadosamente sob um campo brilhante com uma objetiva de 40X. Olhe para dentro e para fora das células para identificar os cristais de acordo com seu tamanho e forma, que podem ser romboida, em forma de agulha ou em forma de haste. Em seguida, insira o filtro polarizador entre a fonte de luz e a amostra.

Para criar um fundo escuro, gire o polarizador até que seu eixo óptico esteja perpendicular ao analisador. Uma vez identificado um cristal birrefringente, insira o compensador entre o polarizador e o espécime e mova-o paralelo ou perpendicularmente ao eixo óptico do cristal. Observe a cor revelada pelo cristal.

Para a coloração de vermelho de alizarina, misturar uma gota da amostra de líquido sinovial com um volume igual de solução de vermelho de alizarina previamente preparada em uma lâmina limpa. Cubra a lâmina com uma lamínula e examine em aumento de 400X sob um microscópio para identificar os cristais. As características macroscópicas das amostras de líquido sinovial indicaram o grau de inflamação.

Uma amostra com cor amarelo pálido e mais clareza geralmente está associada a condições não inflamatórias, como osteoartrite. Por outro lado, uma amostra de coloração amarelo-escura e aspecto turvo indica a presença de células, debris, ácido hialurônico e fragmentos de fibrina que estão associados a derrames inflamatórios. Os leucócitos observados nas amostras de líquido sinovial de pacientes com osteoartrite eram, em sua maioria, monócitos e outras células mononucleares como sinoviócitos.

Cristais de pirofosfato de cálcio foram detectados em amostras do líquido sinovial, indicando níveis relativamente mais elevados de citocinas inflamatórias. Além disso, a coloração positiva para Vermelho de Alizarina revelou a presença de cristais básicos de fosfato de cálcio nas amostras. É muito importante examinar cuidadosamente a lâmina sob luz comum ao procurar cristais.

Lembre-se de que os cristais de pirofosfato são muitas vezes fracamente birrefringentes e podem ser perdidos sob luz polarizada. A presença de cristais de cálcio no líquido sinovial e sua associação com formas mais graves da doença têm levado pesquisadores a explorar novos mecanismos na patogênese e progressão da osteoartrite.