Name: Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-09T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: Aprenda a realizar a laqueadura da artéria coronária esquerda em camundongos para estudar infarto do miocárdio. Este modelo cirúrgico reprodutível permite investigar a patofisiologia e resposta inflamatória pós-infarto de forma controlada.

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Este trabalho foi apoiado por subsídios do Instituto Nacional de Saúde (R01HL143967, R01HL142629, R01AG069399 e R01DK129339), AHA Transformational Project Award (19TPA34910142), AHA Innovative Project Award (19IPLOI34760566) e ALA Innovation Project Award (IA-629694) (para PD).

O protocolo do presente estudo foi revisado e aprovado pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) da Universidade de Pittsburgh. Oito (sham n = 4 e MI n = 4) fêmeas de 1 ano de idade de camundongos C57BL/6J pesando 24-30 g foram utilizados para esses experimentos. Aproximadamente 100% e pelo menos 80% dos camundongos sobreviveram nos primeiros 24 h e 28 dias, respectivamente.
1. Preparação e intubação endotraqueal dos camundongos
<ol><li>Pré-aqueça um esterilizador de contas (ver Tabela de Materiais) a 250 °C e coloque instrumentos cirúrgicos autoclavados nele por alguns minutos.</li>
	<li>Anestesiar o rato numa câmara de indução com isoflurano a 3% e 1 L/min de oxigénio durante 5 min.</li>
	<li>Garanta a profundidade da anestesia no rato, verificando a resposta a uma beliscão firme do dedo do pé.</li>
	<li>Pesar o rato para estimar a dosagem do medicamento analgésico pré-operatório, buprenorfina (0,1 mg/kg). Injete a droga por via intraperitonial.</li>
	<li>Apare a pele no lado esquerdo do tórax usando uma navalha elétrica.</li>
	<li>Desinfete o local cirúrgico com iodopovidona e etanol a 70% em seguida, três vezes.</li>
	<li>Coloque o rato na posição supina sobre uma prancha inclinada. Prenda a cabeça e os membros do rato usando um elástico preso aos incisivos superiores e fita adesiva, respectivamente. Aplique lubrificante oftálmico estéril nos olhos para evitar a secura durante a anestesia.</li>
	<li>Abra a mandíbula e puxe suavemente a língua para fora da cavidade oral.</li>
	<li>Identifique a abertura da laringe iluminando a orofaringe usando um laringoscópio (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Corte cerca de 0,5 cm de uma agulha de cateter 24 G e insira a agulha contundente no escudo de plástico. Direcione a agulha contundente com o escudo de plástico para a traqueia. Retire a agulha, deixando o escudo de plástico na traqueia.</li>
	<li>Ajuste o ventilador (ver Tabela de Materiais) para uma frequência respiratória de 137 batimentos por minuto (otimizado para os ratos utilizados neste estudo) e volume corrente de 0,18 cc. Conecte os tubos do respirador ao escudo do cateter e confirme a intubação correta procurando um movimento torácico sincronizado com o ventilador.</li>
	<li>Desconecte o tubo do respirador do escudo do cateter e coloque o animal na posição supina em uma placa cirúrgica pré-aquecida com temperatura controlada. Reconecte o mouse ao ventilador.</li>
</ol>2. Ligadura permanente da artéria coronária esquerda
<ol><li>Desinfetar o local cirúrgico com iodopovidona e álcool a 70%. Aplique uma cortina estéril com um orifício de um quarto de tamanho no centro para proteger o local cirúrgico. Levante suavemente a pele usando um par de pinças e faça uma pequena incisão transversal cutânea (1,5-2 cm) ao longo da linha entre os músculos peitoral maior e menor esquerdo usando um par de tesouras cirúrgicas. NOTA: Tesouras foram usadas para fazer a incisão, pois fornece o controle necessário sobre a profundidade e a direção do corte.</li>
	<li>Separe os músculos peitorais subjacentes com fórceps e tesouras dissecadas. Os músculos foram separados por meio de afastadores presos a elásticos.</li>
	<li>Faça uma incisão no terceiro espaço intercostal com um par de micro tesouras seguindo o ângulo natural da caixa torácica. Nesta fase, extrema cautela deve ser exercida para evitar lesões no coração e nos pulmões.</li>
	<li>Estique suavemente as costelas usando afastadores para expor o ventrículo esquerdo. Mova a gordura pericárdica para o lado e localize a ACV, que vai da borda do átrio esquerdo em direção ao ápice do coração.</li>
	<li>Passe um 8-0 sutura de nylon sob a ACV com a ajuda de um suporte de agulha. Ligue a ACV com um nó duplo seguido por um segundo nó (nó de um cirurgião modificado). NOTA: O branqueamento do ventrículo inferior esquerdo confirma uma ligadura LCA bem-sucedida. Além disso, a medição de troponina, a monitorização por ECG (supradesnivelamento do segmento ST), a ressonância nuclear magnética (RNM) eco/in vivo com gma cardíaca ou imagens de microtomografia computadorizada (TC) também são aconselhadas para confirmar as lesões comparáveis do IAM.</li>
	<li>Remova os afastadores e insira uma agulha de cateter 22 G na cavidade torácica. Remova a agulha, deixando a ponta do escudo de plástico na cavidade torácica. Feche a caixa torácica usando uma sutura de nylon 4-0.</li>
	<li>Ligue uma seringa ao escudo de plástico 22 G e remova lentamente o excesso de ar preso na cavidade torácica, pressionando suavemente o peito para estabelecer uma pressão de ar negativa. Remova o escudo de plástico.</li>
	<li>Feche a pele com uma sutura de nylon 4-0.</li>
	<li>Desligue o fornecimento de isoflurano. Nesta fase, o rato está no ventilador que fornece oxigénio.</li>
</ol>3. Cuidados pós-operatórios
<ol><li>Desligue o ventilador assim que a respiração espontânea começar. NOTA: O procedimento leva cerca de 30-35 min por animal desde a preparação dos ratos até esta etapa.</li>
	<li>Mantenha o mouse sob uma lâmpada de calor e monitore-o até que esteja acordado. O animal não deve ser deixado sozinho até que tenha recuperado a consciência suficiente para manter a decúbito esternal.</li>
	<li>Após a cirurgia, coloque o animal em uma gaiola separada e devolva-o à gaiola original com outros animais somente depois de se recuperar totalmente.</li>
	<li>Monitore o mouse diariamente para qualquer sinal de dor ou desconforto.</li>
	<li>Continue a injeção intraperitoneal de buprenorfina (0,1 mg/kg) a cada 6-8 horas por mais 2 dias após a cirurgia.</li>
</ol>4. Avaliação Ecocardiográfica
NOTA: A ecocardiografia foi realizada para avaliar os parâmetros de insuficiência cardíaca no dia 28 após o IM.
<ol><li>Após 28 dias após a cirurgia, anestesiar os ratos com isoflurano a 3% e oxigênio a 1 L/min, aplicar lubrificante oftálmico estéril nos olhos e remover os pelos do peito usando creme de depilação. Desinfete a área do tórax com iodopovidona e etanol a 70% três vezes.</li>
	<li>Fixe os ratos anestesiados sobre a plataforma de imagem (ver Tabela de Materiais) na posição supina e mantenha um nível constante de anestesia durante todo o procedimento usando um cone nasal conectado ao sistema anestésico (1%-2% de isoflurano e 1 L/min de oxigênio).</li>
	<li>Cole as quatro patas aos eléctrodos de ECG com gel de eléctrodos (ver Tabela de Materiais). Monitore a temperatura do animal inserindo uma sonda retal (consulte Tabela de Materiais).</li>
	<li>Aplique o gel de varredura (ver Tabela de Materiais) no peito, coloque o transdutor verticalmente, abaixe-o até a linha paraesternal (paralela ao tórax) e gire 35° no sentido anti-horário para obter a visão do eixo longo paraesternal do ventrículo esquerdo.</li>
	<li>Toque no botão de imagem de modo B no software de imagem (consulte Tabela de materiais) para obter uma visão completa do eixo longo do coração. Ajuste o tamanho e o brilho do portão e salve as imagens usando Save Clip ou Save Frame para medições posteriores16.</li>
	<li>Mude para o modo M (modo de movimento) e coloque o eixo do modo M ao nível do músculo papilar. Ajuste o tamanho do portão e toque no botão Iniciar no modo M. Salve as imagens usando Salvar clipe ou Salvar quadro16,17.</li>
	<li>Como o processo de aquisição de imagens em modo 4D é automatizado, verifique se os sinais de ECG e respiração estão ativos (Figura 1) antes de adquirir os dados.</li>
	<li>Comece a adquirir os dados no modo B. Abra o painel de digitalização 4D e inicie o motor 3D. Defina os parâmetros da imagem no painel de digitalização 4D e toque no botão Digitalizar para iniciar a digitalização. Depois de revisar as imagens na visualização 2D, carregue as imagens no modo 4D usando o botão Carregar em 4D .</li>
</ol>

<ol><li>Virani, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics-2021+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics-2021 update: a report from the American Heart Association.</a> Circulation. 143 (8), 254(2021).</li>
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</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse para divulgar.

O modelo murino de IAM está ganhando popularidade em laboratórios de pesquisa cardiovascular, e este estudo descreve um modelo de IAM reprodutível e clinicamente relevante. Este protocolo melhora o processo de ligadura LCA de várias maneiras. Para começar, evita-se o uso de anestésicos pré-operatórios injetáveis, como xilazina/cetamina ou pentobarbital sódico14,15. Apenas a anestesia com isoflurano foi utilizada, que ajuda a aumentar as taxas de sobrevivência ani...

A doença cardiovascular é uma grande preocupação de saúde pública que ceifa 17,9 milhões de vidas a cada ano, representando 31% da mortalidade global1. O tipo de anomalia cardiovascular mais prevalente é a doença coronariana, sendo o infarto do miocárdio (IM) uma das principais manifestações da doença coronariana2. O IAM geralmente é causado por oclusão trombótica de uma artéria coronária devido à ruptura de uma placa vulnerável3. A isquemia resultante causa profundas alterações iônicas e metabólicas no miocárdio afetado, bem como uma rápida diminuição da função sistólica. O IAM resulta na morte de cardiomiócitos, o que pode levar ainda mais à disfunção ventricular e insuficiência cardíaca4.
A pesquisa sobre IM em pacientes é limitada devido à escassez de tecidos obtidos de pacientes com IM5. Como tal, os modelos murinos de IAM são úteis tanto no estudo dos mecanismos da doença quanto no desenvolvimento de potenciais alvos terapêuticos. Os modelos murinos atualmente disponíveis de IM incluem modelos de isquemia irreversível (LCA e métodos de ablação) e modelos de reperfusão (isquemia/reperfusão, I/R)6. A ligadura permanente da artéria coronária esquerda (ACV) em camundongos é o método mais utilizado, e imita a fisiopatologia e a imunologia do IAM em pacientes 7,8,9. O IAM permanente também pode ser induzido por métodos de ablação, que envolvem danos elétricos ou criolesão. Os métodos de ablação são capazes de gerar infarto de tamanho uniforme no local exato10. Por outro lado, a formação de cicatrizes, a morfologia do infarto e os mecanismos de sinalização molecular podem variar entre os métodos de ablação10,11. O método de I/R murino é outro importante modelo de IM, pois representa o cenário clínico da terapia de reperfusão12. O modelo de I/R está associado a desafios como tamanho variável do infarto, dificuldade em distinguir respostas da lesão inicial e reperfusão6.
Embora amplamente utilizados, os métodos de ligadura LCA estão associados a baixas taxas de sobrevida e dor pós-operatória13. Este protocolo demonstra o modelo de IM cirúrgico murino de ligadura LCA que envolve o preparo e intubação de camundongos, ligadura LCA, cuidados pós-operatórios e validação de IM. Em vez de usar uma traqueostomia invasiva14, este método emprega a intubação endotraqueal. O animal é entubado iluminando a orofaringe com laringoscópio, tornando o procedimento mais fácil, seguro e menos traumático15. O rato é mantido em suporte ventilatório e sob anestesia com isoflurano durante todo o procedimento. Além disso, a ecocardiografia e a coloração tricrômica de Masson são realizadas para avaliar a função cardíaca e a fibrose cardíaca após o infarto do miocárdio, respectivamente. No geral, este método fornece um modelo murino cirúrgico confiável e reprodutível de IAM que pode ser usado para estudar a fisiopatologia e a inflamação após o IAM.

<table><tbody><tr><td>Agulha de cateter 22 G</td><td>Exel INT</td><td>26741</td><td>Toracocentese</td></tr><tr><td>agulha de cateter 24 G</td><td>Exel INT</td><td>26746</td><td>Intubação endotraqueal</td></tr><tr><td>4-0 sutura de nylon</td><td>Covetrus</td><td>29263</td><td>Sutura de músculos e pele</td></tr><tr><td>8-0 sutura de nylon</td><td>S& T</td><td>3192</td><td>Ligadura de</td></tr><tr><td>vaporizadores anestésicos</td> LAD <td>Veterinário equipar</td><td>VE-6047</td><td>Suporte anestésico</td></tr><tr><td>Monitor de fisiologia animal Fujifilm</td><td></td><td>VEVO 3100</td><td>Monitor de frequência cardíaca, frequência respiratória e temperatura corporal</td></tr><tr><td>Solução de betadine PBS</td><td>saúde animal</td><td>11205</td><td>Antispetic</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Covetrus</td><td>55175</td><td>Analgésico</td></tr><tr><td>Microscópio de dissecação</td><td>OMANO</td><td>OM2300S-V7</td><td>Binocular</td></tr><tr><td>Barbeador elétrico</td><td>Wahl</td><td>79300-1001M</td><td>Gel de eletrodo de barbear</td></tr><tr><td></td><td>Parker Laboratories</td><td>W60698L</td><td>Gel eletricamente condutor</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>22-032-601</td> Pinça <td>desinfetante</td></tr><tr><td></td><td>FST</td><td>11065-07</td><td>Aço inoxidável</td></tr><tr><td>Gaze</td><td>Curity</td><td>CAR-6339-PK</td> Lâmpada de calor <td>estéril</td></tr><tr><td></td><td>Satco</td><td>S4998</td><td>Cuidados pós-operatórios</td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>Kent scientific</td><td>Surgi-M</td><td>Controle de temperatura</td></tr><tr><td>Esterilizador de esferas quentes</td><td>Germinador 500</td><td>11503</td><td>Esterilização de instrumento cirúrgico</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>29405</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Masson&rsquo; s kit de coloração tricrômica</td><td>Thermoscientific</td><td>87019</td><td>Medição de fibrose cardíaca</td></tr><tr><td>Micro Agulha Titular</td><td>FST</td><td>12500-12</td><td>Aço inoxidável</td></tr><tr><td>Micro tesoura</td><td>FST</td><td>15000-02</td><td>Aço inoxidável</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica</td><td>Dechra</td><td>Puralube Vet</td><td>Lubrificante ocular estéril</td></tr><tr><td>Gel de varredura</td><td>Parker Laboratories</td><td>Aquasonic 100</td><td>Gel de transmissão de ultrassom aquoso</td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>FST</td><td>14060-11</td> Laringoscópio <td>de Aço Inoxidável</td></tr> para <tr><td>Pequenos Animais</td><td>Modelo Penn-Century</td><td>LS-2-M</td><td>Iluminando a orofaringe</td></tr><tr><td>Ventilador para pequenos animais</td><td>Aparelho Harvard</td><td>557058</td><td>Suporte para ventilador</td></tr><tr><td>Luz cirúrgica</td><td>Cole parmer</td><td>41723</td><td>Iluminador Largura (pol): 7</td></tr><tr><td>Plataforma de imagem pré-clínica Vevo 3100</td><td>Ecocardiografia</td><td>Fujifilm</td><td>VEVO 3100</td></tr><tr><td>Software VevoLAB</td><td>Fujifilm</td><td>VevoLAB 3.2.6</td><td>Análise de dados ecocardiográficos</td></tr></tbody></table>

laqueadura da artéria coronária esquerda: um modelo murino cirúrgico de infarto do miocárdio

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

A doença isquêmica do coração e o subsequente infarto do miocárdio (IM) são uma das principais causas de mortalidade nos Estados Unidos e em todo o mundo. A fim de explorar as alterações fisiopatológicas após o infarto do miocárdio e projetar tratamentos futuros, são necessários modelos de pesquisa de IAM. A ligadura permanente da artéria coronária esquerda (ACL) em camundongos é um modelo popular para investigar a função cardíaca e o remodelamento ventricular pós-IAM. Aqui descrevemos um modelo de IM murino cirúrgico menos invasivo, confiável e reprodutível por ligadura permanente da ACV. Nosso modelo cirúrgico é composto por anestesia geral facilmente reversível, intubação endotraqueal que não requer traqueostomia e toracotomia. A eletrocardiografia e a medição da troponina devem ser realizadas para garantir o IAM. A ecocardiografia no dia 28 após o IM discernirá a função cardíaca e os parâmetros de insuficiência cardíaca. O grau de fibrose cardíaca pode ser avaliado pela coloração tricrômica e ressonância nuclear magnética (RNM) cardíaca. Este modelo de IM é útil para estudar as alterações fisiopatológicas e imunológicas após o IM.

A Figura 1 demonstra os sinais representativos de ECG e respiração durante a avaliação ecocardiográfica de camundongos sham (Figura 1A) e IM (Figura 1B). A verificação dos sinais ativos de ECG e respiração é importante antes de adquirir os dados ecocardiográficos. A Figura 2 mostra a medida ecocardiográfica dos parâmetros funcionais cardíacos após 28 dias após a ligadura da ACV. <stron...

Apresenta-se aqui um procedimento cirúrgico para ligadura permanente da artéria coronária esquerda em camundongos. Este modelo pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia e a resposta inflamatória associada após o infarto do miocárdio.

Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...

O modelo cirúrgico de ligadura permanente da artéria esquerda em camundongos pode ser utilizado para investigar a fisiopatologia e a resposta inflamatória associada após o infarto do miocárdio. Este método fornece um modelo de mouse confiável e produtível de MI, que é fácil, seguro e menos invasivo. Para começar, pré-aqueça um esterilizador de contas a 250 graus Celsius e coloque instrumentos cirúrgicos autoclavados nele por alguns minutos.Garanta a profundidade da anestesia no rato, verificando a resposta a uma beliscão firme do dedo do pé. Pesar o rato para estimar a dosagem da droga analgésica pré-operatória buprenorfina e injetar a droga por via intraperitoneal. Apare a pele no lado esquerdo do tórax usando uma navalha elétrica.Depois de desinfetar o local cirúrgico, coloque o rato na posição supina sobre uma tábua inclinada. Prenda a cabeça e os membros do rato usando um elástico preso aos incisivos superiores e fita adesiva, respectivamente. Aplique lubrificante oftálmico estéril nos olhos para evitar a secura durante a anestesia.Abra a mandíbula e puxe suavemente a língua para fora da cavidade oral. Identifique a abertura da laringe iluminando a faringe oral usando um laring

left-coronary-artery-ligation-surgical-murine-model-myocardial

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra como usar um modelo rápido e confiável para o estudo de processos Pathobiological e fisiopatológicas da isquemia miocárdica.

LAD Ligadura: Um Modelo murino de Infarto do Miocárdio

Numerosas manipulações genéticas e / ou injeções intramiocárdica de genes, proteínas, células e / ou biomateriais são sobrepostos sobre a dimensão do tempo em estudos de lesão de isquemia / reperfusão aguda e crônica em camundongos remodelação. Este vídeo ilustra os procedimentos de microcirurgia para isquemia / reperfusão, ligadura da artéria coronária permanente, e estudos de injeção intramiocárdica.

Ligadura da artéria coronária e injeção intramiocárdica em um modelo murino de infarto

O procedimento cirúrgico utilizado para induzir o enfarte do miocárdio experimental em ratos começa com toracotomia esquerda entre a terceira e quarta das nervuras, a fim de visualizar a superfície anterior do coração e do pulmão esquerdo. A artéria coronária esquerda é ligada, a caixa é fechada e o rato é deixado a recuperar-se espontaneamente.

Técnica modificada para ligação da artéria coronária em ratos

Neste vídeo, descrevemos um procedimento cirúrgico para gerar um modelo de infarto do miocárdio em camundongos ligando permanentemente a artéria coronária descendente anterior.

Gerando Modelo Murino de Infarto do Miocárdio: Um Procedimento Cirúrgico para Ligadura Permanente da Artéria Coronária Descendente Anterior em Modelo de Camundongo

Nós introduzimos um método cirúrgico para induzir experimental de isquemia / reperfusão (I / R) prejuízo para simular o infarto do miocárdio (MI) em modelos de mouse que permite uma maior clareza no posicionamento da ligadura na artéria descendente anterior esquerda (LAD) para aumentar a reprodutibilidade de experimentos MI em camundongos.

Um modelo murino de isquemia-reperfusão, através da ligadura da artéria Descendente Anterior Esquerda

A insuficiência cardíaca é a principal causa de hospitalização e uma das principais causas de mortalidade. Um modelo de ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior em camundongos é aplicado para investigar o remodelamento ventricular e a disfunção cardíaca pós-infarto do miocárdio. A técnica de medidas hemodinâmicas invasivas em camundongos é apresentada.

A ligação permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda em Ratos: Um Modelo de Remodelação pós-infarto do miocárdio e insuficiência cardíaca

Fornecemos um método confiável para ligadura da artéria descendente anterior (DA) em um modelo de camundongo. Este método é comparativamente menos invasivo do que outros métodos, envolvendo intubação endotraqueal, abordagem de toracotomia do lado esquerdo e toracocentese. Este método pode ser usado como modelo para infarto agudo do miocárdio (IM) agudo e crônico.

Murino Descendente Anterior Esquerda (LAD) ligação da artéria coronária: um modelo melhorado e simplificado para Infarto do Miocárdio

Nisto nós descrevemos um procedimento cirúrgico que mostra como conseguir a ligadura permanente da artéria coronária descendente esquerdo-anterior nos ratos. Este modelo é de grande relevância para investigar a fisiopatologia do infarto do miocárdio e os processos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto do miocárdio murino usando ligadura permanente da artéria coronária descendente anterior esquerda

Este protocolo descreve as etapas para induzir o infarto do miocárdio em camundongos, preservando o pericárdio e seu conteúdo.

Um modelo de roedor isquêmico de pericárdio intacto

Descrevemos um método simples e reprodutível que pode induzir infarto do miocárdio ou lesão de isquemia-reperfusão miocárdica em camundongos por ligadura precisa da artéria coronária descendente anterior esquerda através de micromanipulação.

Indução de Infarto do Miocárdio e Lesão de Isquemia-Reperfusão Miocárdica em Camundongos

Aprenda a realizar a laqueadura da artéria coronária esquerda em camundongos para estudar infarto do miocárdio. Este modelo cirúrgico reprodutível permite investigar a patofisiologia e resposta inflamatória pós-infarto de forma controlada.

Laqueadura da Artéria Coronária Esquerda: Um Modelo Murino Cirúrgico de Infarto do Miocárdio

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