Manipulação Genética Mediada por Fagos da Espiroqueta da Doença de Lyme Borrelia burgdorferi

Este protocolo é significativo porque descreve outra ferramenta importante para dissecar a biologia molecular do agente da doença de Lyme Borrelia burgdorferi. A principal vantagem desta técnica é que, ao utilizar a transdução de fagos, ela fornece um método alternativo para a introdução de DNA na Borrelia burgdorferi sem a necessidade da aplicação de um pulso elétrico, como na eletroporação. Este método poderia ser usado para fornecer mais informações sobre os mecanismos moleculares utilizados por Borrelia burgdorferi para persistir em seu ciclo enzoótico e, finalmente, causar a doença de Lyme em humanos.

Para começar, inocular 150 microlitros do clone apropriado de Borrelia burgdorferi em 15 mililitros de BSK em tubos de centrífuga cônica estéreis bem tampados para o protocolo de transdução. Em seguida, complementar o meio com a concentração apropriada de antibióticos ou uma combinação de antibióticos para a seleção e manutenção de DNA heterólogo dentro do clone de Borrelia burgdorferi e incubar a amostra a 33 graus Celsius. Após o crescimento da cultura, centrifugar o volume apropriado de cultura a 6.000 G por 10 minutos.