Name: Métodos de Cultivo de Espiroquetas do Complexo Borrelia burgdorferi Sensu Lato e Borrelia de Febre Recidivante (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 37 s
Description: Aprenda métodos de cultivo in vitro de espiroquetas Borrelia burgdorferi e Borrelia miyamotoi para diagnóstico de doenças infecciosas. Este protocolo detalha meios de cultura específicos e técnicas para detectar infecções viáveis em ambientes clínicos e de pesquisa.

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Este trabalho foi parcialmente apoiado pelo Natural Science and Engineering Research Council of Canada e pela Canadian Lyme disease Foundation (AB e VL), pelo Swedish Research Council (SB, M-LF e IN), TAČR GAMA 2 project - "Support of application potential verification 2.0 at the Biology Centre CAS" (TP01010022) (MG e NR), e por uma bolsa do Ministério da Saúde da República Tcheca NV19-05-00191 (MG e NR). Agradecemos a S. Vranjes (2021, laboratório Rudenko) pela imagem na Figura 4 e a J. Thomas-Ebbett (2021, laboratório Lloyd) pelas imagens na Figura 5. Agradecemos a todos os pesquisadores que contribuíram com a área e pedimos desculpas àqueles cujos trabalhos não pudemos citar por limitações de espaço.

Não foram declarados conflitos de interesse.

A cultura laboratorial de bactérias é o trampolim para a pesquisa. A profunda vantagem conferida pela capacidade de cultura é exemplificada pela luta, ao longo de mais de um século culminando apenas recentemente em sucesso, para a cultura do Treponema pallidum, a espiroqueta que é o agente etiológico da sífilis44. As espiroquetas de Borrelia também são desafiadoras para a cultura, mas a cultura é possível 23,24,34,44,45,46,47,48,49.<sup class="x...

Borrelia é um gênero de bactérias espiroquetas que engloba três clados principais: o grupo da borreliose de Lyme (LB), o grupo da febre recidivante (FR) e um grupo menos bem caracterizado, aparentemente restrito aos répteis. A taxonomia da borrelia está em mutação com o advento de metodologias moleculares que permitem comparações genômicas e proteômicas, como ocorre com a maioria dos outros grupos taxonômicos1,2,3,4,5,6,7. O grupo LB (também chamado de grupo da doença de Lyme) tem sido tradicionalmente denominado Borrelia burgdorferi sensu lato em homenagem ao seu membro mais bem caracterizado Borrelia burgdorferi sensu stricto. Este trabalho utiliza a terminologia mais utilizada atualmente: NV, FR e grupo associado a répteis, e descreve os protocolos de cultura para os grupos LB e RF.
Como seria esperado para um membro da família Spirochaetaceae, Borrelia pode adotar a forma espiral distintamente longa e fina, tipicamente 20-30 μm de comprimento e 0,2-0,3 μm de largura. No entanto, as células de Borrelia são altamente pleomórficas e podem adotar muitas outras formas tanto em cultura quanto in vivo 1,8 como resultado de sua complexa estrutura celular e genética. Em sua forma espiroquetada, a morfologia planar da onda senoidal resulta da rotação de seus endoflagelos axiais no espaço periplasmático entre as membranas interna e externa. Essa estrutura permite que as células sejam altamente móveis, com a membrana externa contendo proteínas que permitem que a célula interaja com os tecidos do hospedeiro 9,10. A expressão das proteínas da membrana externa é fortemente regulada e afeta não só a invasão do tecido do hospedeiro, mas também a interação com o sistema imune do hospedeiro11. Esta expressão gênica complexa permite que as células de Borrelia transitem entre os ambientes muito diferentes de hospedeiros vertebrados e vetores invertebrados. O genoma da Borrelia é incomum entre os procariontes, consistindo de um cromossomo linear em vez de circular. Além do cromossomo linear, as espécies de Borrelia contêm 7-21 plasmídeos, alguns lineares e outros circulares. Os plasmídeos abrigam a maioria dos genes necessários para a adaptação e virulência do hospedeiro, e acredita-se que os plasmídeos circulares derivados de prófagos sejam responsáveis pela maior parte do fluxo gênico horizontal entre as células espiroquetas12,13. Consistente com um papel na adaptação do hospedeiro, alguns, possivelmente muitos ou todos, membros do grupo da borreliose de Lyme perdem plasmídeos em cultura14. A cepa "adaptada em laboratório" de B. burgdorferi, B31, mais bem estudada, possui apenas sete dos nove plasmídeos encontrados em isolados silvestres dessaespécie15. Da mesma forma, B. garinii perde plasmídeos em cultura16. Alguns estudos têm demonstrado que espécies de RF e B. miyamotoi retêm plasmídeos quando cultivados14,17, mas trabalhos recentes demonstram plasmídeos alterados e infectividade com cultivo in vitro de longa duração18.
Os métodos baseados em cultura continuam sendo o padrão-ouro para a detecção laboratorial de infecções bacterianas, tanto para pesquisa quanto para o trabalho clínico14,17. A cultura de patógenos a partir de fluidos corporais ou tecidos detecta diretamente patógenos replicantes e fornece material de origem para pesquisa14,17. Este protocolo demonstra a metodologia e as receitas necessárias para o cultivo com sucesso das espiroquetas do grupo LB, bem como da RF Borrelia e B. miyamotoi. O meio básico para o cultivo de espiroquetas de Borrelia é o meio Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II ou BSK-H comercialmente disponível), com ou sem antibióticos para reduzir o crescimento de procariontes contaminantes. Este meio foi adaptado de um meio originalmente usado para suportar RF Borrelia19, posteriormente modificado por Stoenner20 e depois por Barbour21. Desde então, muitas modificações foram desenvolvidas, cada uma com efeitos sobre a fisiologia bacteriana que podem afetar o crescimento, a infectividade e a patogenicidade22. Esse meio suporta de forma confiável o crescimento de espiroquetas em culturas estabelecidas e tem sido usado para isolar espiroquetas de amostras clínicas de carrapatos, mamíferos e23. A variação mais recentemente desenvolvida, meio Kelly-Pettenkofer modificado (MKP), pode proporcionar melhor sucesso de isolamento, morfologia e motilidade ao isolar novos isolados de Borrelia de amostras ambientais, quando o número de espiroquetas presentes na amostra disponível para semear a cultura é baixo23,24. Em todos os casos, o sucesso do cultivo depende criticamente do meio recém-preparado e do uso de ingredientes apropriados; Nem todos os ingredientes comerciais produzem meios de alta qualidade. As culturas inoculadas podem ser convenientemente incubadas sem agitação em uma incubadora convencional de 32-34 °C na presença de uma pequena quantidade de oxigênio ambiente residual. As espiroquetas de Borrelia são anaeróbias, mas estão expostas na natureza a flutuações nas concentrações de oxigênio e dióxido de carbono e respondem com alterações na expressão gênica26,27,28,29. Assim, a expressão gênica, o crescimento e outros estudos metabólicos devem controlar os níveis de oxigênio e dióxido de carbono com o uso de uma incubadora ou câmara anaeróbia controlada por oxigênio. Em cultura, as culturas são verificadas semanalmente, ou mais frequentemente, para a presença de espiroquetas com microscopia de campo escuro ou microscopia de contraste de fase. Os esfregaços de cultura podem ser corados com coloração de prata, imunohistoquímica ou pelo uso de cepas fluorescentemente marcadas29,30. A PCR seguida de sequenciamento de DNA é um método sensível e específico para detectar e identificar geneticamente ou confirmar a espécie de Borrelia 30,31,32,33.
Muitas pequenas variações no BSK-II existem, e algumas estão disponíveis comercialmente. O protocolo aqui descrito na seção 1 foi adaptado de Barbour (1984)21. O meio MKP líquido é um meio desenvolvido mais recentemente e é descrito na seção 2. É preparado de acordo com um protocolo previamenterelatado33,34, que, à semelhança do meio BSK, consiste em duas etapas: preparação do meio básico e preparação do meio completo. O meio de cultura de borrelia pode ser preparado com ou sem antibióticos, conforme descrito na seção 3; os antibióticos atuam para reduzir as bactérias contaminantes introduzidas ao inocular com amostras clínicas ou ambientais, conforme descrito na seção 4; se inocular com cultura pura de Borrelia sp., antibióticos podem não ser necessários. A criação de existências de Borrelia a longo prazo é frequentemente importante, e um protocolo para o fazer é descrito na secção 5. A seção 6 descreve o uso desses meios para isolar clones puros de Borrelia sensu lato de amostras clínicas ou ambientais. Há uma série de abordagens possíveis36; abaixo está um encontrado para ser eficaz. O meio de plaqueamento utilizado neste protocolo é uma modificação do meio de plaqueamento BSK-II37 e do meio MKP34 (com soro de coelho aumentado para 10%38).

<table><tbody><tr><td>Tubos de 1,7 mL</td><td>VWR</td><td>87003-294</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>0,2&nbsp; &micro; m Filtro de seringa estéril&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28145-501</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>10 &micro; Ponta de pipeta de barreira L</td><td>Neptune</td><td>BT10XLS3</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>pipetas sorológicas de 10 mL&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229011B</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>1000 &micro; Ponta de pipeta de barreira L</td><td>Neptune</td><td>BT1000.96</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>tubo de 15 mL</td><td>Celltreat</td><td>188261</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>20 &micro; Ponta de pipeta de barreira L</td><td>Neptune</td><td>BT20</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>seringa estéril de 20 mL&nbsp;</td><td>BD</td><td>309661</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>200 &micro; Ponta de pipeta de barreira L</td><td>Neptune</td><td>BT200</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>25 mL de tubos de cultura com tampa de rosca</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-933C</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>pipetas sorológicas de 25 mL</td><td>Celltreat</td><td>229025B</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>3 mL Seringa estéril</td><td>BD</td><td>309657</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>35% BSA&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>A-7409</td><td>A fonte é importante - veja a nota</td></tr><tr><td>Pipetas sorológicas de 5 mL&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229006B</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>tubo de 50 mL</td><td>Celltreat</td><td>229421</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>tubos de vidro MKP de 6,5 ml&nbsp;</td><td>Schott</td><td>Schott Nr. 26 135 115</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Amikacine</td><td>Sigma</td><td>PHR1654</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Sigma</td><td>A9528-100MG</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Bactrim/rimethoprim/sulfamethoxazole</td><td>Sigma</td><td>PHR1126-1G</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>BBL Brucella broth&nbsp;</td><td>BD</td><td>211088</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Gabinete de Biossegurança</td><td>Labconco</td><td>302419100</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Tubos de coleta de sangue (topo amarelo - ACD)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BD&nbsp; Tubos de Coleta de Sangue de Vidro Vacutainer com Citrato Ácido Dextrose (ACD)</td> <td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>BSK-H Médio [w 6% Soro de coelho]&nbsp;</td><td>Darlynn biologicals</td><td>BB83-500</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>centrífuga&nbsp;</td><td>Eppendorf</td><td>modelo 5430</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Ácido cítrico TrissódicoSal-dihidratado</td><td>Sigma</td><td>C-8532 100 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>CMRL</td><td>Gibco BRL</td><td>21540 500 mL</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>CMRL-1066</td><td>Gibco</td><td>21-510-018</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Tubos criogênicos (Nalgene)</td><td>Fisher Scientific</td><td>5000-0020</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Deep Petri com anel de empilhamento 100 mm &times; 25 mm</td><td>Sigma</td><td>P7741</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Incubadora Digital</td><td>VWR</td><td>modelo 1545</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ThermoFisher</td><td>D12345</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Filtros para esterilização de</td> <td>filtrosMillipore 0.22&mu; m Membrana GPExpressPLUS</td><td>SCGPU05RE</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Difco BD</td><td>214340 500 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Tubos de cultura de vidro</td><td>Fisher Scientific</td><td>99449-20</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Sigma</td><td>G-7021 1 kg</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Hemafuge (Hematócrito & Centrífuga de hematologia imunológica )</td><td>Modelo Labwissen</td><td>3220</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>H-3784 100 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>N-acetilglucoseamina</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A-3286 25 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Difco Neopeptona</td><td>&nbsp; BD</td><td>211681 500 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Neubauer Hematocitômetro</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>Z359629</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Microscópio de contraste de fase&nbsp;</td><td>Item padrão Leitz</td><td></td><td>- qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Fosfomicina</td><td>Sigma</td><td>P5396-1G</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Fosfomicina</td><td>Sigma</td><td>P5396</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td></td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Balança padrão de precisão</td><td>OHAUS</td><td>modelo TS200S</td><td>Item padrão - qualquer o fornecedor fará</td></tr><tr><td>Ácido pirúvico (sal Na)</td><td>Sigma</td><td>P-8574 25 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Soro para Coelhos&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>16-120-032</td><td>A fonte é importante&nbsp;</td></tr><tr><td>Soro de Coelho</td><td>Sigma</td><td>R-4505&nbsp; 100 mL</td><td>Fonte é importante&nbsp;</td></tr><tr><td>Rifampicina</td><td>Sigma</td><td>R3501-1G</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Bicarbonato de sódio</td><td>Sigma</td><td>S-5761&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; 500 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Sufametaxazol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>PHR1126</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>TC Yeastolate</td><td>Difco&nbsp; BD</td><td>255752 100 g</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Pipetas de transferência</td><td>VWR</td><td>470225-044</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr><tr><td>Trimetoprim</td><td>Sigma</td><td>PHR1056</td><td>Item padrão - qualquer fornecedor fará</td></tr></tbody></table>

métodos de cultivo de espiroquetas do complexo borrelia burgdorferi sensu lato e borrelia de febre recidivante

Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia

A Borrelia é composta por três grupos de espécies, as do grupo Borreliose de Lyme (LB), também conhecidas como B. burgdorferi sensu lato (s.l.) e recentemente reclassificadas em Borreliella, o grupo da febre recidivante (FR) Borrelia, e um terceiro grupo de espiroquetas associado a répteis. Os métodos baseados em cultura continuam sendo o padrão-ouro para a detecção laboratorial de infecções bacterianas tanto para pesquisa quanto para trabalhos clínicos, pois a cultura de patógenos a partir de fluidos corporais ou tecidos detecta diretamente patógenos replicantes e fornece material de origem para pesquisa. As espiroquetas de Borrelia e Borreliella são fastidiosas e de crescimento lento e, portanto, não são comumente cultivadas para fins clínicos; no entanto, a cultura é necessária para a pesquisa. Este protocolo demonstra a metodologia e as receitas necessárias para cultivar com sucesso espiroquetas LB e RF, incluindo todas as espécies reconhecidas do complexo B. burgdorferi s.l., incluindo B. afzelii, B. americana, B. andersonii, B. bavariensis, B. bissettii/bissettiae, B. burgdorferi sensu stricto (s.s.), B. californiensis, B. carolinensis, B. chilensis, B. finlandensis, B. garinii, B. japonica, B. kurtenbachii, B. lanei, B. lusitaniae, B. maritima, B. mayonii, B. spielmanii, B. tanukii, B. turdi, B. sinica, B. valaisiana, B. yangtzensis eespiroquetas RF, B. anserina, B. coriaceae, B. crocidurae, B. duttonii, B. hermsii, B. hispanica, B. persica, B. recurrentis e B. miyamotoi. O meio básico para o cultivo de espiroquetas LB e RF é o meio Barbour-Stoenner-Kelly (BSK-II ou BSK-H), que suporta de forma confiável o crescimento de espiroquetas em culturas estabelecidas. Para poder cultivar isolados de Borrelia recém-isolados a partir de amostras derivadas de carrapatos ou hospedeiros onde o número inicial de espiroquetas é baixo no inóculo, o meio Kelly-Pettenkofer (MKP) modificado é preferido. Este meio também suporta o crescimento de B. miyamotoi. O sucesso do cultivo de espiroquetas de RF também depende criticamente da qualidade dos ingredientes.

Os meios de cultura Borrelia BSK e MKP, e variantes, são meios de cultura ricos com ingredientes que precisam ser preparados e esterilizados sequencialmente. Quando bem preparado, o meio BSK deve ser vermelho-alaranjado e límpido (Figura 1). Turbidez e precipitação que persistem após o aquecimento indicam ingredientes problemáticos, produção média ou contaminação; Esse meio é melhor descartado. Se for adicionada gelatina à BSK e com MKP, o meio será gelatinoso quando refrigerado; Ao...

O cultivo in vitro é um método de detecção direta da presença de bactérias vivas. Este protocolo descreve métodos para o cultivo de diversas espiroquetas de Borrelia, incluindo as do complexo Borrelia burgdorferi sensu lato, espécies de Borrelia de febre recidivante e Borrelia miyamotoi. Estas espécies são fastidiosas e de crescimento lento, mas podem ser cultivadas.

Métodos de Cultivo de Espiroquetas do Complexo Borrelia burgdorferi Sensu Lato e Borrelia de Febre Recidivante

The Borrelia consists of three groups of species, those of the Lyme borreliosis (LB) group, also known as B. burgdorferi sensu lato (s.l.) and recently ...

Borrelia é um gênero de bactérias espiroquetas que engloba três tipos principais. O grupo Borreliose de Lyme, o grupo Febre Recidivante e o grupo menos bem caracterizado encontrado em répteis. Muitas espécies de Borrelia são patogênicas.A cultura de bactérias é o padrão-ouro para a detecção de infecção. Isso vale tanto para a pesquisa quanto para o trabalho clínico. A cultura de bactérias de fluidos corporais e tecidos confirma que as bactérias são viáveis e replicantes.Este protocolo demonstra a metodologia e as receitas necessárias para cultivar e preservar com sucesso o grupo de espiroquetas Lyme Borreliosis, Borrelia de Febre Recidivante e Borrelia miyamotoi. São fornecidos métodos para o cultivo de espécies e cepas previamente isoladas, bem como novos isolados e isolados monoclonais de fontes ambientais ou de mamíferos. Demonstrando o procedimento estarão Marie-Line Faucillion, pesquisadora de pós-doutorado, e Ingela Nilsson, técnica do Bergstrom Lab, Anne Berthold, pesquisadora associada do Lloyd Lab, e Maryna Golovchenko, pesquisadora associada do Rudenko Lab.Para começar, obtenha os reagentes necessários para preparar um litro de Barbara-Stoner-Kelly, ou meio BSK-II. Comece

cultivation-methods-spirochetes-from-borrelia-burgdorferi-sensu-lato

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Estudos de pesquisa a doença de Lyme muitas vezes exigem a geração de carrapatos infectados com o patógeno Borrelia burgdorferi, um processo que normalmente leva várias semanas. Aqui nós demonstramos uma microinjeção baseado procedimento de infecção do carrapato que pode ser realizado em poucas horas. Nós também demonstramos um método de imunofluorescência para na localização in situ de B. burgdorferi dentro de carrapatos.

Métodos para a transferência rápida e localização de Patógenos Doença de Lyme no intestino Tick

Fonte: Eggers, C. H. Manipulação genética mediada por phage da espiroqueta da doença de Lyme Borrelia burgdorferi. J. Vis. Exp. (2022)Este vídeo demonstra a preparação de uma cultura de Borrelia burgdorferi geneticamente modificada com DNA de bacteriófago dormente carregando um gene de resistência a antibióticos. Após a seleção e incubação de antibióticos, um indutor químico desencadeia danos ao DNA, levando à excisão, replicação e montagem de novos vírions contendo o gene de resistência. Após...

Preparação e Indução de Culturas de Borrelia burgdorferi para Produção de Partículas Virais

Source: Berthold, A., et al. Cultivation Methods of Spirochetes from Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex and Relapsing Fever Borrelia. J. Vis. Exp.(2022)This video demonstrates the cultivation of pathogenic spirochetes from infected skin tissue to model dermal infection. It highlights their localization in the dermis, interaction with the extracellular matrix, and survival during selective culture conditions.

Cultivation of Pathogenic Spirochetes to Investigate Skin Infection

A doença de Lyme é a doença mais comumente relatados transmitidas por vetores na América do Norte. O agente causador, a Borrelia burgdorferi é uma bactéria espiroqueta transmitida por carrapatos ixodídeos. A transmissão e a detecção de infecção em modelos animais é optimizada pela utilização de alimentação de carraça, que aqui descrita.

Alimentação dos Carrapatos em Animais de Transmissão e Xenodiagnóstico em Lyme Disease Research

PCR aninhado é uma técnica simples, sensível e específica que pode ser aplicada a escala que DNA extrai para sondar para Borrelia burgdorferi, o agente causador da doença de Lyme. A experiência inicial da PCR usa primeiras demão gene-específico para gerar amplicons longo, que em seguida tornar-se modelos para uma reação subsequente usando iniciadores internos.

Detectando a doença de Lyme espiroqueta, a Borrelia Burgdorferi, em carrapatos usando PCR aninhado

Ensaios de transcrição in vitro podem decifrar os mecanismos de regulação transcricional em Borreliella burgdorferi. Este protocolo descreve as etapas para purificar a RNA polimerase de B. burgdorferi e realizar reações de transcrição in vitro. Abordagens experimentais usando ensaios de transcrição in vitro requerem purificação e armazenamento confiáveis da RNA polimerase ativa.

Componentes essenciais de ensaios de transcrição in vitro de Borreliella (Borrelia) burgdorferi

A capacidade dos bacteriófagos de mover o DNA entre as células bacterianas os torna ferramentas eficazes para a manipulação genética de seus hospedeiros bacterianos. Apresenta-se aqui uma metodologia para induzir, recuperar e utilizar φBB-1, um bacteriófago de Borrelia burgdorferi, para transduzir DNA heterólogo entre diferentes cepas da espiroqueta da doença de Lyme.

Manipulação Genética Mediada por Fagos da Espiroqueta da Doença de Lyme Borrelia burgdorferi

Um sistema de análise de fluxo de fluorescência de três canais de duplo repórter foi usado para desenvolver um imunoensaio multiplex baseado em esferas que avalia simultaneamente amostras de soro para IgG e IgM eliciadas contra múltiplos antígenos de diferentes espécies de Borrelia que causam borreliose de Lyme na Europa e América do Norte.

Detecção Simultânea de Diferentes Classes de Anticorpos em um Teste Sorológico Multiplexado

Este artigo apresenta a metodologia para exposição humana a larvas de Ixodes scapularis para pesquisa clínica. A técnica é relativamente simples, tolerável pelos voluntários da pesquisa, podendo ser modificada de acordo com as necessidades experimentais. Essa pesquisa envolvendo seres humanos deve ser conduzida de acordo com protocolos de estudos clínicos aprovados pelas autoridades reguladoras apropriadas.

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Desenvolvemos um sistema transwell ex vivo humano capaz de avaliar alterações inflamatórias agudas, infecciosas e estruturais na sinovia.

Um Modelo Pré-Clínico de Sinovite Utilizando Tecido Sinovial Humano Ex Vivo com Função e Arquitetura Preservadas

Aprenda métodos de cultivo in vitro de espiroquetas Borrelia burgdorferi e Borrelia miyamotoi para diagnóstico de doenças infecciosas. Este protocolo detalha meios de cultura específicos e técnicas para detectar infecções viáveis em ambientes clínicos e de pesquisa.

Métodos de Cultivo de Espiroquetas do Complexo Borrelia burgdorferi Sensu Lato e Borrelia de Febre Recidivante

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