Um ensaio de fluorescência de cálcio de "dupla adição" para a triagem de alto rendimento de receptores acoplados à proteína G recombinante

O ensaio de dupla adição de fluorescência de cálcio de triagem de alto rendimento permite a identificação de novos ligantes de moléculas pequenas de um receptor acoplado à proteína G que sinaliza através da cascata de cálcio intracelular. A principal vantagem do ensaio de adição dupla é a detecção de HTS agonista e antagonista em um único ensaio com as mesmas células, desde que o sinal de fluorescência dure dure dois minutos. Este método pode ser aplicado a qualquer GPCR que sinalize através da cascata de cálcio, que inclui a maior parte da família de peptídeos de neurônios artrópodes, um GPCRs.

Para a reprodutibilidade do ensaio, é importante otimizar a densidade celular, a velocidade de injeção e a concentração do agonista conhecido para a segunda edição. A demonstrar o procedimento estará Bianca Henriques-Santos, investigadora associada de pós-doutoramento no meu laboratório. Iniciar o ensaio de fluorescência de cálcio removendo o meio gasto do balão T-75 contendo 70 a 90% de células BMLK confluentes.