Name: Técnica cirúrgica para ganglionectomia cervical superior em modelo murino (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 30 s
Description: Aprenda a técnica de ganglionectomia cervical superior em camundongos para estudar a ablação adrenérgica unilateral. Este método minimiza efeitos colaterais e evita dissecção da artéria carótida em pesquisas sobre sistema nervoso simpático e câncer.

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Q. W. foi apoiado pelo NIH T32CA009685. R. J. W. foi apoiado pelo NIH R01CA219534. As instalações centrais do Memorial Sloan Kettering Cancer Center foram apoiadas pelo NIH P30CA008748.

Os procedimentos com animais aqui descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Memorial Sloan Kettering Cancer Center. Camundongos NSG machos e fêmeas com oito semanas de idade foram usados aqui. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Os instrumentos são esterilizados, a superfície de trabalho cirúrgica é desinfetada, a superfície da pele do animal é desinfetada e o cirurgião usa luvas estéreis durante todo o procedimento.
1. Preparo dos camundongos e posicionamento pré-operatório
<ol><li>Na véspera da cirurgia, anestesiar o camundongo com isoflurano a 2% em câmara de indução (3,75 de largura x 9 de profundidade x 3,75 de altura, ver Tabela de Materiais). NOTA: Um plano cirúrgico de anestesia é geralmente alcançado em 3-5 min, dependendo do animal individual. Avaliar a adequação da anestesia por pinça dos dedos dos pés e aumentar a porcentagem de isoflurano conforme apropriado.<ol><li>Faça a barba no aspecto ventral do pescoço ou use um agente químico de depilação de acordo com as instruções do fabricante (consulte a Tabela de Materiais).</li>
	</ol></li>
	<li>No dia da cirurgia, anestesiar o camundongo com isoflurano a 2% em câmara de indução. Avaliar a adequação da anestesia por pinça dos dedos dos pés e aumentar a porcentagem de isoflurano conforme apropriado.</li>
	<li>Administrar 2 mg/kg de meloxicam por via subcutânea para analgesia sistêmica preemptiva. Aplique pomada oftálmica tópica (ver Tabela de Materiais) para evitar lesões oculares e ressecamento sob anestesia.</li>
	<li>Coloque o camundongo sob um microscópio dissecante em seu lado dorsal e forneça suporte térmico. Manter anestesia inalatória com isoflurano a 2%-2,5% com vaporizador de precisão e cone nasal. Fixe suavemente ambos os membros anteriores com fita hipoalergénica (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Limpe o aspecto ventral raspado do pescoço com iodopovidona e, em seguida, limpe com álcool a 70%. Repita esse processo mais duas vezes. Certifique-se de que o local cirúrgico esteja livre de qualquer cabelo solto. NOTA: Um par de pinças curvas curtas também pode ser usado. Certifique-se de usar um par de pinças finas ou oftálmicas para trabalhar adequadamente neste espaço confinado. Ajustes pré-operatórios adicionais podem ser incluídos de acordo com as diretrizes institucionais.</li>
</ol>2. Dissecção
<ol><li>Faça uma incisão cutânea mediana de 1,5 cm na face ventral do pescoço com uma pequena tesoura de aproximadamente 2 mm abaixo do queixo até 2 mm acima da fúrcula esternal.</li>
	<li>Retrair as bordas da pele lateralmente com pinça para expor a fáscia subjacente e as glândulas salivares submandibulares. Separe a pele da fáscia subjacente inserindo tesouras pontiagudas sob a pele de cada lado e espalhando. Puxe as glândulas submandibulares caudalmente com pinça para revelar os músculos subjacentes.</li>
	<li>Localiza-se a junção do ventre posterior do músculo digástrico com o músculo omo-hioideo (Figura 1A, círculo preto). A veia jugular anterior é vista correndo longitudinalmente e lateralmente ao músculo omo-hioideo. OBS: O músculo omo-hioideo recobre longitudinalmente a traqueia, enquanto o digástrico situa-se transversalmente na face cranial da traqueia (Figura 1C).<ol><li>Inserir a ponta da pinça angulada de 45° nessa junção, lateral à veia jugular anterior, para perfurar e espalhar uma abertura na fáscia cervical profunda sobrejacente.</li>
	</ol></li>
	<li>Mantenha esta janela criada na etapa 2.3.1 aberta com a pinça angulada de 45°. Expanda essa abertura mais largamente realizando manobras de espalhamento com um par de pinças curvas na outra mão.</li>
</ol>3. Identificação e ressecção do gânglio
<ol><li>Localizar o gânglio cervical superior (GCS) na parede lateral do espaço revelado. Aparece como um tecido redondo e perolado. NOTA: Se o SCG não for identificado, os tecidos neste espaço precisam ser examinados mais lateral e superiormente. O GCE pode ser facilmente confundido com a gordura, que muitas vezes está presente nessa região. A gordura tem uma coloração levemente amarelada, enquanto em contraste, o SCG aparece branco pérola.</li>
	<li>Enquanto mantém a abertura com pinça com a outra mão, segure suavemente o SCG com pinças e puxe-o para fora da abertura para trazê-lo para melhor visualização.</li>
	<li>Uma vez que o GCE esteja em vista, segure a base lateral do GCS, onde ele ainda está aderido aos tecidos circundantes. Com a outra mão, retrair lenta e suavemente o GCE no sentido ventral e caudal.<ol><li>Retrair o SCG várias vezes para gradualmente avular o gânglio pouco a pouco. Mantenha o gânglio intacto durante esta manobra para garantir que nenhum remanescente de gânglio residual seja deixado para trás. NOTA: Puxe o gânglio suavemente, pois pode ocorrer sangramento durante esta etapa. Se ocorrer um pequeno sangramento, use celulose regenerada oxidada ou uma pequena tira de gaze estéril para manter a pressão sobre a abertura por 30 s a 1 min. Em seguida, levante lentamente a gaze e reavalie. Repita o processo de manter a pressão sobre a abertura, conforme necessário, até que o sangramento tenha parado.</li>
	</ol></li>
	<li>Solte lentamente a outra pinça que segura a base do gânglio. Verifique se há sangramento procurando acúmulo de sangue. NOTA: Ligeira exsudação neste momento é normal. Monitore e certifique-se de que não há sangramento persistente ou significativo antes de fechar e terminar o procedimento. Se tal ocorrer, manter a pressão sobre a abertura, conforme descrito no passo 3.3.1.</li>
	<li>Mover as glândulas salivares de volta para suas posições anatômicas normais. Aproximar e fechar a pele usando pontos de náilon 5-0 simples interrompidos (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Coloque o rato numa gaiola limpa por si só para permitir a recuperação total da anestesia. NOTA: Pode levar 5-15 minutos para o rato acordar totalmente da anestesia. Não deixe o rato sozinho até que ele tenha recuperado a consciência suficiente para manter a decúbito esternal. Não coloque o rato numa gaiola com outros ratinhos até que esteja totalmente recuperado. Avaliar o camundongo para recuperação pós-cirúrgica pelo menos uma vez a cada 24 h por 72 h.</li>
</ol>

<ol><li>Magnon, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autonomic+nerve+development+contributes+to+prostate+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Autonomic nerve development contributes to prostate cancer progression.</a> Science. 341 (6142), 1236361(2013).</li>
<li>Zhao, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Denervation+suppresses+gastric+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Denervation suppresses gastric tumorigenesis.</a> Science Translational Medicine. 6 (250), 115(2014).</li>
<li>Zahalka, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+nerves+activate+an+angio-metabolic+switch+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Adrenergic nerves activate an angio-metabolic switch in prostate cancer.</a> Science. 358 (6361), 321-326 (2017).</li>
<li>Amit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+p53+drives+neuron+reprogramming+in+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Loss of p53 drives neuron reprogramming in head and neck cancer.</a> Nature. 578 (7795), 449-454 (2020).</li>
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<li>Lucido, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innervation+of+cervical+carcinoma+is+mediated+by+cancer-derived+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecologic+Oncology%22%5BJournal%5D)">Innervation of cervical carcinoma is mediated by cancer-derived exosomes.</a> Gynecologic Oncology. 154 (1), 228-235 (2019).</li>
<li>Peterson, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basal+cell+carcinoma+preferentially+arises+from+stem+cells+within+hair+follicle+and+mechanosensory+niches%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Basal cell carcinoma preferentially arises from stem cells within hair follicle and mechanosensory niches.</a> Cell Stem Cell. 16 (4), 400-412 (2015).</li>
<li>Maronde, E., Stehle, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mammalian+pineal+gland%3A+Known+facts%2C+unknown+facets%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Endocrinology+%26+Metabolism%22%5BJournal%5D)">The mammalian pineal gland: Known facts, unknown facets.</a> Trends in Endocrinology & Metabolism. 18 (4), 142-149 (2007).</li>
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<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melatonin+protects+the+retina+from+experimental+nonexudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pineal+Research%22%5BJournal%5D)">Melatonin protects the retina from experimental nonexudative age-related macular degeneration in mice.</a> Journal of Pineal Research. 68 (4), 12643(2020).</li>
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<li>Grisanti, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prior+%CE%B2-blocker+treatment+decreases+leukocyte+responsiveness+to+injury%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Prior β-blocker treatment decreases leukocyte responsiveness to injury.</a> JCI Insight. 5 (9), 99485(2019).</li>
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<li>Savastano, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+standardized+surgical+technique+for+rat+superior+cervical+ganglionectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A standardized surgical technique for rat superior cervical ganglionectomy.</a> Journal of Neuroscience Methods. 192 (1), 22-33 (2010).</li>
<li>Garcia, J. B., Romeo, H. E., Basabe, J. C., Cardinali, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+superior+cervical+ganglionectomy+on+insulin+release+by+murine+pancreas+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Autonomic+Nervous+System%22%5BJournal%5D)">Effect of superior cervical ganglionectomy on insulin release by murine pancreas slices.</a> Journal of the Autonomic Nervous System. 22 (2), 159-165 (1988).</li>
<li>Ziegler, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+sympathetic+denervation+attenuates+myocardial+inflammation+and+improves+cardiac+function+after+myocardial+infarction+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Local sympathetic denervation attenuates myocardial inflammation and improves cardiac function after myocardial infarction in mice.</a> Cardiovascular Research. 114 (2), 291-299 (2017).</li>
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<li>Dieguez, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+cervical+gangliectomy+induces+non-exudative+age-related+macular+degeneration+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Superior cervical gangliectomy induces non-exudative age-related macular degeneration in mice.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031641(2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivation+of+sympathetic+nerves+drives+depletion+of+melanocyte+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Hyperactivation of sympathetic nerves drives depletion of melanocyte stem cells.</a> Nature. 577 (7792), 676-681 (2020).</li>
<li>Pirzgalska, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sympathetic+neuron-associated+macrophages+contribute+to+obesity+by+importing+and+metabolizing+norepinephrine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sympathetic neuron-associated macrophages contribute to obesity by importing and metabolizing norepinephrine.</a> Nature Medicine. 23 (11), 1309-1318 (2017).</li>
<li>Kajimura, D., Paone, R., Mann, J. J., Karsenty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxo1+regulates+Dbh+expression+and+the+activity+of+the+sympathetic+nervous+system+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Foxo1 regulates Dbh expression and the activity of the sympathetic nervous system in vivo.</a> Molecular Metabolism. 3 (7), 770-777 (2014).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este protocolo descreve um modelo de camundongo para ablação unilateral cirúrgica da entrada do SCG. Esta técnica permite estudar os efeitos da inervação adrenérgica em vários contextos. Além disso, o gânglio simpático ressecado também pode ser cultivado em cultura matrigel3D para experimentos in vitro30.
Estudos envolvendo GCSx têm sido realizados principalmente em ratos, pois sua anatomia maior permite fácil visualização anatômica e dissecção. Enquanto a GCSx...

Vários estudos têm relatado que os nervos no microambiente tumoral desempenham um papel ativo no suporte à progressão tumoral. Demonstrou-se que a ablação dos nervos simpáticos adrenérgicos prejudica o desenvolvimento e a disseminação tumoral no câncer de próstata e gástrico in vivo 1,2,3, enquanto o bloqueio farmacológico dos receptores adrenérgicos inibe o crescimento tumoral no câncer de cabeça epescoço4. O envolvimento simpático neural também tem sido descrito na progressão dos carcinomas pancreáticos, cervicais e basocelulares5,6,7.
Dentro do sistema nervoso simpático, o gânglio cervical superior (GCS) é o único gânglio do tronco simpático que inerva a cabeça. O GCE regula várias funções fisiológicas, como secreção salivar e ritmo circadiano, e inerva diretamente os linfonodos cervicais 8,9,10. A GCE também tem sido implicada em processos patológicos como a degeneração macular11 e a progressão da dissecção aórtica12. Além disso, foi relatado que a ressecção da GCE agrava a lesão renal aguda induzida por isquemia e reperfusão13 e também altera a microbiota intestinal em ratos14.
A ablação completa do SCG em um modelo de camundongo representaria uma técnica experimental valiosa para viabilizar a pesquisa do câncer e do sistema nervoso autônomo. Enquanto muitos estudos têm utilizado o bloqueio farmacológico dos receptores adrenérgicos como ablação adrenérgica 15,16,17,18,19,20, a ressecção cirúrgica permite a ablação adrenérgica completa e unilateral, evitando a necessidade de repetidas intervenções farmacológicas e os efeitos colaterais associados 21,22,23.
A ressecção cirúrgica do GCE tem sido descrita emratos24, e a maioria dos relatos estudando o efeito da ganglionectomia cervical superior (GCSx) tem empregado o modelo de ratos. Em comparação com o modelo de rato, SCGx é tecnicamente mais desafiador em camundongos devido ao pequeno tamanho do SCG. No entanto, os camundongos são comparativamente mais fáceis de manusear, mais econômicos e mais passíveis de manipulação genética. Garcia e col. foram um dos primeiros a relatar a SCGx em camundongos, e descobriu-se que ela afeta a liberação de insulina25. Mais recentemente, Ziegler e col. descreveram a SCGx em camundongos com base na técnica publicada descrita pararatos24,26. Este e outros artigos descrevem um método no qual a artéria carótida comum (ACC) é primeiramente identificada e dissecada, e o GCS é posteriormente removido da bifurcação da ACC21,22,27,28. Neste artigo, uma técnica menos invasiva e segura é descrita em camundongos que evita a dissecção da ACC, minimizando assim a complicação mais grave desse procedimento – o sangramento de uma lesão na ACC.

<table><tbody><tr><td>Anticorpo anti-tirosina hidroxilase</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td></td></tr><tr><td>Lágrimas artificiais Lubrificante Pomada oftálmica</td><td>Akorn</td><td>59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Curity 2 x 2 polegadas Esponja de gaze 8 camadas, Estéril</td><td>Covidien</td><td>1806</td><td></td></tr><tr><td>Derf Agulha Titular</td><td>Thomas Scientific</td><td>1177K00</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio</td><td></td><td></td><td></td> de dissecação</tr><tr><td>Dumont #5/45 Fórceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #7b Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11270-20</td><td></td></tr><tr><td>ETHILON Nylon Sutura</td><td>Ethicon</td><td>698H</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Fina - ToughCut</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td></td></tr><tr><td>Fita Cirúrgica Hipoalergênica</td><td>3M Blenderm</td><td>70200419342</td><td></td></tr><tr><td>Indução Câmara, 2 litros</td><td>VetEquip</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Baxter</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td>Church & Dwight Co., Inc</td><td>40002957</td><td>agente químico de depilação</td></tr><tr><td>PESQUISA DE NORADRENALINA ELISA</td><td>Diagnóstico de Trabalho Nord (Rocky Mountain Diagnostics)</td> <td>BA E-5200</td><td></td></tr><tr><td>NSG Mouse</td><td>Jackson Laboratory</td><td>JAX: 005557</td><td></td></tr><tr><td>Cotonete de iodo-povidona</td><td>PDI</td><td>S41350</td><td></td></tr><tr><td>Webcol Alcohol Preps</td><td>Covidien</td><td>5110</td><td></td></tr></tbody></table>

técnica cirúrgica para ganglionectomia cervical superior em modelo murino

Surgical Technique for Superior Cervical Ganglionectomy in a Murine Model

Evidências crescentes sugerem que o sistema nervoso simpático desempenha um papel importante na progressão do câncer. A inervação adrenérgica regula a secreção das glândulas salivares, o ritmo circadiano, a degeneração macular, a função imune e a fisiologia cardíaca. A simpatectomia cirúrgica murina é um método para estudar os efeitos da inervação adrenérgica, permitindo a ablação adrenérgica completa e unilateral, evitando a necessidade de intervenção farmacológica repetida e os efeitos colaterais associados. No entanto, a simpatectomia cirúrgica em camundongos é tecnicamente desafiadora devido ao pequeno tamanho do gânglio cervical superior. Este estudo descreve uma técnica cirúrgica para identificar e ressecar de forma confiável o gânglio cervical superior para abater o sistema nervoso simpático. A identificação e remoção bem-sucedidas do gânglio são validadas por imagem dos gânglios simpáticos fluorescentes usando um camundongo transgênico, identificando a síndrome de Horner pós-ressecção, marcando para marcadores adrenérgicos nos gânglios ressecados e observando imunofluorescência adrenérgica diminuída nos órgãos-alvo após simpatectomia. Este modelo possibilita estudos futuros da progressão do câncer, bem como de outros processos fisiológicos regulados pelo sistema nervoso simpático.

Este protocolo descreve a remoção cirúrgica do GCE em um modelo de camundongo. A Figura 2 ilustra os pontos anatômicos, incluindo a ACC, a veia jugular anterior e o GCE. Com a dissecção (Figura 2A), observa-se a veia jugular anterior direita cursando ao longo da borda lateral da traqueia. Por localizar-se mais profundamente que a veia jugular anterior, a ACC esquerda e sua bifurcação na artéria carótida interna (ACI) e na artéria carótida externa (ECA) são vista...

O presente protocolo descreve um modelo murino de ablação de inervação adrenérgica através da identificação e ressecção do gânglio cervical superior.

Técnica cirúrgica para ganglionectomia cervical superior em modelo murino

Growing evidence suggests that the sympathetic nervous system plays an important role in cancer progression. Adrenergic innervation regulates salivary ...

O sistema nervoso simpático desempenha um papel importante na progressão do câncer e de outras doenças. A simpatectomia cirúrgica é um método valioso para o estudo desses processos, induzindo ablação adrenérgica unilateral completa. Essa técnica evita os efeitos colaterais associados à inibição farmacológica do sistema nervoso simpático.Além disso, é menos invasivo do que os métodos descritos anteriormente, pois evita a dissecção da artéria carótida. Ao realizar essa técnica, pode ser difícil entrar no espaço certo onde reside o gânglio e diferenciá-lo da gordura. Identificar o marco e a prática é, portanto, essencial.A anatomia parece ligeiramente diferente quando em movimento e não dissecada, então a demonstração visual fornece um melhor guia sobre como identificar o marco anatômico que é fundamental para esta técnica. Comece aplicando pomada oftálmica tópica no camundongo anestesiado para evitar lesões oculares e ressecamento. Coloque o camundongo sob um microscópio dissecante em seu lado dorsal e mantenha a anestesia inalatória usando um vaporizador de precisão e um cone nasal.Fixar ambos os membros anteriores com fita hipoalergênica. Limpe o aspecto ventral raspado do pescoço com iodopovidona e, em seguida, limpe com álcool a 70%. Após repetir o processo de limpeza mais duas vezes, coloque um pano estéril sobre o local cirúrgico.Em seguida, use uma tesoura pequena e faça uma incisão de pele mediana de 1,5 centímetro na face ventral do pescoço de aproximadamente dois milímetros abaixo do queixo até dois milímetros acima da fúrcula esternal. Separe a pele da fáscia subjacente inserindo tesouras pontiagudas sob a pele de cada lado e espalhando. Em seguida, retrair as bordas da pele lateralmente com pinça para expor a fáscia subjacente e as glândulas salivares submandibulares.Puxe as glândulas submandibulares caudalmente com pinça para revelar os músculos subjacentes. Em seguida, localize a junção do ventre posterior do músculo digástrico e do músculo omo-hioideo. Inserir a ponta da pinça angulada de 45 graus nessa junção lateral à veia jugular anterior para perfurar e abrir uma abertura na fáscia cervical profunda sobrejacente.Mantenha esta janela aberta com a pinça angulada de 45 graus e expanda essa abertura mais larga realizando manobras de espalhamento com um par de pinças curvas na outra mão. Localizar o gânglio cervical superior ou GCE na parede lateral do espaço revelado. Enquanto mantém a abertura com pinça com a outra mão, segure suavemente o SCG com pinças e puxe-o para fora da abertura para trazê-lo para melhor visualização.Uma vez que o GCE esteja em vista, segure a base lateral do GCE onde ele ainda está aderido aos tecidos circundantes. Com a outra mão, retrair lenta e suavemente o GCE no sentido ventral e caudal várias vezes para avular gradualmente o gânglio pouco a pouco. Mantenha o gânglio intacto durante esta manobra para garantir que nenhum remanescente de gânglio residual seja deixado para trás.Solte lentamente a base do gânglio e verifique se há sangramento procurando acúmulo de sangue. Uma vez feito, mova as glândulas salivares de volta às suas posições anatômicas normais. Aproximar e fechar a pele com pontos de náilon 5-0 simples interrompidos.Durante a dissecção, a veia jugular anterior direita percorria ao lado da borda lateral da traqueia. Quando camundongos transgênicos P0 tdTomato com neurônios fluorescentes vermelhos foram examinados em microscópio fluorescente, observou-se nervo vago fluorescente cursando lateralmente à artéria carótida comum e GSC fluorescente na bifurcação da artéria carótida comum lateral à veia jugular anterior. A GSC ressecada em camundongo transgênico foi confirmada por sua fluorescência vermelha em comparação com o controle de SCG não fluorescente.A coloração imunofluorescente confirmou tirosina hidroxilase, um marcador para nervos adrenérgicos. Após ganglionectomia cervical superior, observou-se ptose, ou seja, queda da pálpebra, sinal de síndrome de Horner. A coloração por imunofluorescência para tirosina hidroxilase na glândula salivar submandibular direita após ganglionectomia cervical superior direita confirmou o sucesso da ablação da sinalização adrenérgica com ausência de coloração do nervo tirosina hidroxilase.Em contraste, a glândula submandibular de controle esquerdo manteve seu aporte adrenérgico e intacta a coloração do nervo tirosina hidroxilase, o que também foi confirmado pela quantificação. A quantificação ELISA de noradrenalina na glândula salivar confirmou uma redução significativa na expressão de noradrenalina na glândula submandibular no lado da ganglionectomia cervical superior em contraste com o lado da cirurgia sham controle. Seja paciente e gentil ao remover o SCG.Avulse-o lentamente de forma fragmentada. Caso contrário, a artéria carótida conectada ao GCE pode ser facilmente lesada, resultando em sangramento.

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Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

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