Name: Coleta Dinâmica em Tempo Real de Fluido Extracelular do Hipocampo de Ratos Conscientes Usando um Sistema de Microdiálise (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: Aprenda a coletar fluido extracelular do hipocampo em ratos conscientes usando microdiálise cerebral. Esta técnica permite monitorar dinamicamente marcadores de doenças do sistema nervoso central em tempo real.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82104533), pelo Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (2021YJ0175) e pela Fundação de Ciência Pós-Doutoral da China (2020M683273). Os autores gostariam de agradecer ao Sr. Yuncheng Hong, engenheiro de equipamentos sênior da Tri-Angels D&ampH Trading Pte. Ltd. (Singapura) pela prestação de serviços técnicos para a técnica de microdiálise.

O protocolo experimental foi conduzido de acordo com os requisitos do Comitê de Uso de Animais de Laboratório e Cuidados e Uso de Animais Institucionais da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Número de registro: 2021-11). Ratos machos da raça Sprague Dawley (SD) (280 ± 20 g, 6-8 semanas de idade) foram utilizados para o presente estudo.
1. Cirurgia de implante de sonda de microdiálise cerebral
<ol><li>Utilizar isoflurano a 3% e 1,5% para indução e manutenção da anestesia em ratos, respectivamente, utilizando um sistema de anestesia animal em mistura ar-oxigênio a 0,6 L/min. Certifique-se de que os ratos estão profundamente anestesiados sem um reflexo de dor e um reflexo de córnea. Use pomada veterinária nos olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia.</li>
	<li>Remova o pelo do crânio do rato anestesiado com um barbeador elétrico na área de preparação. Em seguida, fixe o rato anestesiado em um localizador cerebral estereotáxico. Desinfetar o sítio cirúrgico antes da operação aplicando iodopovidona e etanol 3x na região da cirurgia com um algodão estéril. Aplicar bupivacaína topicamente para analgesia local. NOTA: Todo o processo de aquisição da amostra de HECF baseado em microdiálise está ilustrado na Figura 1.</li>
	<li>Fazer uma incisão craniofacial de 1,5 cm ao meio com tesoura cirúrgica e retirar o periósteo com tesoura cirúrgica e pinça oftálmica.</li>
	<li>Considerar o bregma como a posição basal e perfurar o endocrânio para perfurar uma abertura de 2 mm na posição anteroposterior (AP) (-2 mm), na posição médio-lateral (ML) (-3,5 mm) e na posição dorsoventral (DV) (-3,5 mm) (região CA1 do hipocampo) usando uma broca craniana.</li>
	<li>Fixar o estilete do cateter na garra de um localizador cerebral estereotáxico e ajustar a posição do invólucro de microdiálise nas posições AP (-2 mm), ML (-3,5 mm) e DV (0 mm). Ajuste o valor de DV do localizador estéreo cerebral e implante o invólucro de microdiálise na região CA1 a uma profundidade de 3,5 mm. NOTA: Manter a temperatura do animal em 37 °C durante a operação utilizando um mantenedor de temperatura animal.</li>
	<li>Perfure mais três aberturas com um diâmetro de 2 mm de tal forma que as três aberturas formem um triângulo no qual a abertura da sonda está localizada centralmente. Parafusos de implante nas aberturas a uma profundidade de 1 mm.</li>
	<li>Fixar o cateter sonda com cimento dentário e utilizar sutura cirúrgica 4-0 para fechamento da pele. Consulte a Figura 2 para o posicionamento da sonda.</li>
	<li>Coloque o rato em gaiolas por 7 dias para se recuperar. Infiltrar-se localmente bupivacaína (1,5 mg/kg) uma vez ao dia após a cirurgia.  Fornecer comida e água ad libitum. Use colírios de hialuronato de sódio 3x ao dia para evitar o ressecamento após a operação. OBS: Realizar todos os procedimentos em sala cirúrgica estéril. Não deixe o animal sozinho até que ele tenha recuperado a consciência suficiente para manter a decúbito esternal sob uma condição de 37 °C. Não devolva o animal que passou por cirurgia para a companhia de outros animais até que esteja totalmente recuperado.</li>
</ol>2. Conexão do sistema de microdiálise e verificação da sonda
<ol><li>Conecte a bomba de microdiálise, a microseringa, o dispositivo de atividade acordada e o coletor de amostras criogênicas de acordo com as instruções do fabricante. Instale a microseringa com ACSF na bomba de microdiálise e ajuste a bomba de microdiálise para uma taxa de 1 μL/min para descarregar o ar na tubulação.</li>
	<li>Conecte a tubulação e a sonda de microdiálise cerebral (membrana: PAES; comprimento da membrana: 4 mm; OD da membrana: 0,5 mm; ponto de corte: 20 kDa; comprimento do eixo: 14 mm). Operar a bomba de microdiálise a uma taxa de 1 μL/min para injetar ACSF na sonda até que a superfície da sonda esteja ligeiramente úmida. Imergir a sonda em solução de injeção de heparina sódica para uso subsequente. NOTA: Se uma grande corrente da ACSF cair da membrana semipermeável da sonda, como visto a olho nu sob gravidade, substitua a sonda por uma nova.</li>
</ol>3. Coleta de HECF do rato acordado
<ol><li>Insira a sonda de microdiálise cerebral no cateter de sonda e coloque o rato em uma câmara (altura: 360 mm; diâmetro: 400 mm) com acolchoamento para garantir que os ratos estejam livres para se movimentar.</li>
	<li>Conecte a tubulação, a bomba de microseringa e a sonda de microdiálise cerebral. Aproveite o rato através do orifício na parte superior do dispositivo de retenção do rato e dos giros de aço inoxidável.</li>
	<li>Ligue o controlador giratório multicanal para evitar o entrelaçamento das tubulações de microdiálise durante o movimento livre do rato. Ligue a bomba de microseringa e bombeie a ACSF a uma taxa de 1 μL/min. Coletar HECF periodicamente após um equilíbrio de 60 min do sistema de coleta de HECF de microdiálise.</li>
	<li>Certifique-se de que o caudal das amostras HECF no coletor de fracção refrigerado é consistente com a perfusão ACSF. Recolher 20 μL de HECF e mudar automaticamente para o próximo tubo de amostragem. Tome cuidado para verificar se a membrana da sonda está danificada ao inserir a sonda.</li>
</ol>4. Medida da pressão osmótica para o HECF
<ol><li>Ligue o osmômetro e faça login no sistema de detecção. Clique no botão Cal na tela sensível ao toque e clique no botão Res na página para limpar a memória de calibração anterior.</li>
	<li>Instale um tubo de 1,5 mL contendo 100 μL de água pura sem bolhas na cabeça de medição. Puxe a cabeça de medição para o fundo do recipiente de hidrazina frio.</li>
	<li>Digite o número de amostra 0 na tela sensível ao toque e confirme para testar. Mergulhe rapidamente a agulha de diodo no tubo de amostra e, em seguida, retire-a rapidamente para induzir a cristalização da amostra a uma temperatura de -6,2 °C.</li>
	<li>Aguarde a tela exibir: Empurre a cabeça da medida para cima e clique em Cal e Cal 0 por sua vez para calibrar. Efectuar medições com uma solução de calibração de 300 mOsm e medir a pressão osmótica das amostras de HECF conforme descrito acima. NOTA: Limpe a cabeça de medição com uma toalha de papel macio após a calibração ou medição. As amostras de HECF sem bolhas devem ser bem misturadas.</li>
</ol>5. Manutenção do sistema de microdiálise e dos dispositivos após a amostragem
<ol><li>Retire a sonda de microdiálise cerebral do cateter de sonda após o término da amostragem. Imergir a sonda em água deionizada e lavar com água deionizada por 12 h para remover deposições de sal encalhado da tubulação e da sonda.</li>
	<li>Retire a sonda para colocar numa solução de tripsina a 0,05% a 4 °C. Secar as tubulações em estufa seca ao ar a 25 °C e armazená-las à temperatura ambiente. NOTA: As sondas de microdiálise são caras e esta etapa pode aumentar a reutilização das sondas. As proteínas que aderem à superfície da sonda podem ser digeridas pela solução de tripsina para evitar que a membrana da sonda seja bloqueada por proteínas, e a tripsina não teve efeito sobre o material da sonda.</li>
</ol>6. Tratamento dos animais após a colheita de amostras
<ol><li>Após a amostragem, eutanasiar os ratos sem dor, fazendo-os inalar isoflurano a 1,5%, seguido de uma overdose de isoflurano a 5%, de acordo com a ética animal.</li>
</ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

A patogênese das doenças do SNC ainda não é totalmente compreendida, o que dificulta o desenvolvimento de novas terapias e fármacos. Estudos têm demonstrado que a maioria das doenças do SNC está intimamente relacionada às lesões hipocampais20,21,22. A técnica de microdiálise cerebral proposta pode ter como alvo regiões específicas do cérebro, especialmente o hipocampo, o que a diferencia da abordagem tradicional de coleta de HEC...

Doenças do sistema nervoso central (SNC) com alta morbidade, como doenças neurodegenerativas, traumatismo cranioencefálico, lesão cerebral induzida por hipóxia de altitude e acidente vascular cerebral isquêmico, são causas cruciais da crescente mortalidade em todo o mundo 1,2,3. O monitoramento em tempo real de citocinas e alterações proteicas em regiões específicas do cérebro contribui para a precisão diagnóstica de doenças do SNC e estudos farmacocinéticos cerebrais após medicação. A investigação científica tradicional utiliza homogeneizado de tecido cerebral ou uma recolha manual de fluido cerebral intersticial animal para a detecção de substâncias específicas e para estudos farmacocinéticos. No entanto, isso apresenta algumas deficiências, como o tamanho limitado da amostra, a incapacidade de observar dinamicamente as mudanças dos indicadores ea qualidade desigual da amostragem4,5,6. O líquido cefalorraquidiano, um líquido intersticial, protege o cérebro e a medula espinhal de danos mecânicos. Sua composição é diferente da do soro devido à existência da barreira hematoencefálica (BHE)7. A análise direta de amostras de líquido cefalorraquidiano é mais propícia para revelar o mecanismo das lesões do SNC e a descoberta de drogas. Inevitavelmente, as amostras de líquido cefalorraquidiano, obtidas manualmente diretamente da cisterna magna e ventrículos cerebrais através de uma seringa, apresentam desvantagens de contaminação sanguínea, chance aleatória de coleta de amostras, incerteza da quantidade e quase nenhuma possibilidade de recuperação múltipla 8,9. Mais notavelmente, os métodos convencionais de amostragem de fluido cerebral intersticial não podem obter amostras de regiões cerebrais lesadas, o que dificulta a exploração da patogênese de doenças do SNC em regiões específicas do cérebro e a avaliação da eficácia de terapias etnomedicinais direcionadas 9,10.
A microdiálise cerebral é uma técnica de amostragem de fluido cerebral intersticial em animais acordados11. O sistema de microdiálise imita a permeabilidade vascular com a ajuda de uma sonda implantada no cérebro. A sonda de microdiálise é armada com uma membrana semipermeável e é implantada em regiões específicas do cérebro. Após a perfusão com líquido cefalorraquidiano artificial isotônico (LCA), o líquido cerebral intersticial dialisado pode ser obtido favoravelmente com os benefícios de amostras pequenas, amostragem contínua e observação dinâmica12,13. Em termos de localização, sondas de microdiálise cerebral podem ser implantadas seletivamente em estruturas cerebrais ou cisternas cranianas de interesse14. A observação de níveis anormais de uma substância endógena no líquido extracelular hipocampal (HCE) sugere a ocorrência de doenças do SNC ou a patogênese da doença. Vários estudos têm demonstrado que os biomarcadores para doenças do SNC, como os aminoácidos-D na esquizofrenia, as proteínas β-amiloide e tau na doença de Alzheimer, as cadeias leves dos neurofilamentos no traumatismo cranioencefálico e a ubiquitina carboxi-terminal hidrolase L1s na encefalopatia hipóxico-isquêmica, podem ser analisados no líquido cefalorraquidiano15,16,17 . Um método de análise química baseado na técnica de amostragem por microdiálise cerebral pode ser utilizado para monitorar mudanças dinâmicas de compostos exógenos, como princípios ativos da etnomedicina, que se difundem e se distribuem em regiões específicas docérebro14.
Este artigo apresenta o processo específico de aquisição dinâmica do HECF em ratos acordados e mede sua pressão osmótica para garantir a qualidade da amostra.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; Forno de secagem ao ar</td><td>Suzhou Great Electronic Equipment Co., Ltd</td><td>GHG-9240A</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de anestesia animal</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>Mantenedor da temperatura animal</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>Líquido cefalorraquidiano artificial</td><td>Pequim leagene biotech. Co., Ltd</td><td>CZ0522</td><td></td></tr><tr><td>Sonda</td> <td>de microdiálise cerebral&nbsp; Cateter CMA Microdialysis AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td></td><td>&nbsp; Harness de infusão CMA Microdialysis AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>Covance</td><td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>CIH95</td><td></td></tr><tr><td>Resinas à base de dentadura</td><td>Shanghai Eryi Zhang Jiang Biomaterials Co., Ltd</td><td>190732</td><td></td></tr><tr><td>Broca craniana elétrica</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>78001</td><td></td></tr><tr><td>Barbeador elétrico</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Tanque de movimento livre para animais</td><td>&nbsp; CMA Microdiálise AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>Injeção de heparina sódica</td><td>Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>H51021208</td><td></td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Sichuan Lekang Pharmaceutical Accessories Co., Ltd</td><td>202201</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Cateter de microdiálise estilete</td><td>; Tubo de coleta de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>8011205</td><td></td></tr><tr><td></td><td> Coletor de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td></td><td> Tubulação de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>fep</td><td>&nbsp; CMA Microdialysis AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>Microdiálise in vitro stand</td><td>&nbsp; Bomba de microinjeção de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td></td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>Seringa para microdiálise (1,0 mL)</td><td>&nbsp; Adaptador de tubo de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td></td><td> CMA Microdiálise AB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>Suturas cirúrgicas não absorvíveis</td><td>Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>Pinça oftálmica</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>Osmômetro</td><td>L&ouml; ser</td><td>OM 807</td><td></td></tr><tr><td>Colírio de hialuronato de sódio</td><td>URSAPHARM Arzneimittel GmbH</td><td>H20150150</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de estereotaxia</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>68025</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica</td><td>Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de seringa</td><td>&nbsp; CMA Microdiálise AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>Solução de tripsina</td><td>Boster Biological Technology, Ltd.</td><td></td><td></td>PYG0107</tr><tr><td>Limpador ultrassônico</td><td>Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd</td><td>KMH1-240W8101</td><td></td></tr></tbody></table>

coleta dinâmica em tempo real de fluido extracelular do hipocampo de ratos conscientes usando um sistema de microdiálise

Real-Time Dynamic Collection of Hippocampal Extracellular Fluid from Conscious Rats Using a Microdialysis System

Uma variedade de doenças do sistema nervoso central (SNC) está associada a alterações na composição do líquido extracelular hipocampal (HCEC). No entanto, a dificuldade em obter o HECF em tempo real de ratos conscientes tem restringido por muito tempo a avaliação da progressão da doença do SNC e a eficácia da terapia etnomédica. Encorajadoramente, uma técnica de microdiálise cerebral pode ser usada para amostragem contínua com as vantagens de observação dinâmica, análise quantitativa e um pequeno tamanho de amostragem. Isso permite o monitoramento de mudanças no conteúdo de fluido extracelular para compostos de ervas tradicionais e seus metabólitos no cérebro de animais vivos. O objetivo deste estudo foi, portanto, implantar com precisão uma sonda de microdiálise do líquido cefalorraquidiano na região hipocampal de ratos Sprague Dawley (SD) com um aparelho estereotáxico cerebral tridimensional, cortando pesos moleculares superiores a 20 kDa. O HECF de alta qualidade foi então obtido de ratos conscientes usando um sistema de controle de amostragem de microdiálise com uma taxa de amostragem ajustável de 2,87 nL/min - 2,98 mL/min. Em conclusão, nosso protocolo fornece um método eficiente, rápido e dinâmico para a obtenção do HECF em ratos acordados com a ajuda da tecnologia de microdiálise, o que nos fornece possibilidades ilimitadas para explorar melhor a patogênese das doenças relacionadas ao SNC e avaliar a eficácia das drogas.

Seguindo o protocolo experimental acima e os parâmetros de amostragem estabelecidos na Tabela 1, o HECF de rato semelhante à água, incolor e transparente foi obtido na taxa de amostragem estabelecida (Figura 1K). A pressão osmótica do HECF de rato obtido foi de 290-310 mOsm/L, o que pode indiretamente garantir a qualidade das amostras18,19.
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O protocolo aqui fornece uma amostragem dinâmica detalhada em tempo real do fluido extracelular do hipocampo de ratos acordados usando um sistema de microdiálise.

Coleta Dinâmica em Tempo Real de Fluido Extracelular do Hipocampo de Ratos Conscientes Usando um Sistema de Microdiálise

A variety of central nervous system (CNS) diseases are associated with changes in the composition of hippocampal extracellular fluid (HECF). However, ...

O fluido extracelular hipocampal e a lotação pela técnica de microdiálise cerebral contribuem para monitorar a micro doença específica das doenças do sistema nervoso central. A técnica de microdiálise cerebral alcança a dinâmica e a contínua inquisição de fluido cerebral intersticial em regiões específicas do cérebro de ratos não anestesiados. Comece fixando o rato anestesiado em um localizador cerebral estereotáxico e limpe a área cirúrgica raspada com um cotonete de iodopovidona e etanol três vezes antes da operação.Em seguida, faça uma incisão cranial facial de 1,5 centímetro até o meio com tesoura cirúrgica e remova o periósteo com tesoura cirúrgica e pinça oftálmica. Considerando o bregma como posição basal, usando uma broca craniana perfura o endocrânio para perfurar uma abertura de dois milímetros na região CA1 do hipocampo. Agora fixe a estileta do cateter na garra de um localizador cerebral estereotáxico e ajuste a posição do invólucro de microdiálise nas posições anteroposterior, médio-lateral e ventral dorsal.Ajustar a válvula dorsoventral do localizador estéreo cerebral e implantar o invólucro de microdiálise na região CA1 a uma profundidade de 3,5 milímetros. Perfure mais três aberturas com um diâmetro de dois milímetros de tal forma que as três aberturas formem um triângulo no qual a abertura da sonda está localizada centralmente. Parafusos de implante nas aberturas a uma profundidade de um milímetro e fixar o cateter sonda com cimento dental.Em seguida, use uma sutura cirúrgica de 4-O para fechar a pele. Conecte a microseringa da bomba de microdiálise com o dispositivo de atividade acordada ACSF e o coletor de amostras criogênicas de acordo com as instruções do fabricante. Em seguida, para descarregar o ar na tubulação, ajuste a bomba de microdiálise a uma taxa de um microlitro por minuto.Em seguida, conecte a tubulação e a sonda de microdiálise cerebral e opere a bomba de microdiálise a uma taxa de um microlitro por minuto para injetar ACSF na sonda até que a superfície da sonda esteja levemente úmida. Imergir a sonda em uma solução de injeção de heparina sódica para uso subsequente. Para coletar o HECF do rato acordado, insira a sonda de microdiálise cerebral no cateter de sonda e coloque o rato em uma câmara com acolchoamento para garantir que os ratos estejam livres para se movimentar.Ligue o controlador giratório multicanal para evitar o entrelaçamento das tubulações de microdiálise durante o movimento livre do rato. Em seguida, ligue a bomba de microseringa e bombeie o ACSF a uma taxa de um microlitro por minuto. Após um equilíbrio de 60 minutos do sistema de coleta de HECF de microdiálise, coletar o HECF periodicamente.Após o término da amostragem, retire a sonda de microdiálise cerebral do cateter de sonda. Imergir a sonda em água deionizada e lavar com água deionizada por 12 horas para remover deposições de sal encalhado da tubulação e da sonda. Retire a sonda e coloque-a em uma solução de 0,05% a quatro graus Celsius.O líquido extracelular hipocampal adquirido pela técnica de microdiálise cerebral é semelhante à água, incolor e transparente na taxa de amostragem definida. Os procedimentos mais importantes são implantar a microdiálise cuidadosamente na região CA1 e inserir a sonda no cateter pop. A técnica de microdiálise simples permite auxiliar a mudança dinâmica de marcadores de doenças em regiões específicas do cérebro, a substância da eficácia da droga e o catabolismo tecidual dos componentes da droga.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O acompanhamento dos níveis de neurotransmissores extracelular em regiões distintas do cérebro de animais que circulam livremente oferece insights sobre a relação entre a liberação do neurotransmissor e comportamento. Em microdiálise in vivo juntamente com detecção eletroquímica fornece anatômicas excelentes e resolução de química; e informações sobre como a neurotransmissão basal é alterada por manipulações farmacológicas ou fisiológicas.

Cirurgia estereotáxica sobrevivência em Roedores

Modulação da hippocampally dependente de memória espacial de trabalho por microinjeção intrahippocampal direta, acompanhado e seguido...

Microinjeção insulina hipocampal e<em&gt; Em vivo</em&gt; Microdiálise Durante um teste de memória espacial

O vídeo demonstra o processo de uso de uma sonda de microdiálise para coletar proteínas extracelulares do fluido intersticial (ISF) do cérebro de um camundongo. Uma sonda de microdiálise, equipada com uma membrana semipermeável de corte de alto peso molecular, é inserida no cérebro de um camundongo anestesiado por meio de uma cânula guia implantada. A sonda, conectada a bombas, permite que um tampão fisiológico perfunda o tecido cerebral e se misture com o ISF. As proteínas do FSI se difundem...

Microdiálise de fluido intersticial de um cérebro de camundongo para isolar proteínas extracelulares

Aqui, apresentamos um protocolo para a gravação da teta de rede neuronal rítmica e das oscilações gama de uma preparação isolada do hipocampo inteiro. Descrevemos os passos experimentais da extração do hipocampo para detalhes de gravações de grampos de campo, unidade e toda célula, bem como a estimulação optogenética do ritmo de theta.

Tuning na banda Theta do hipocampo<em&gt; In Vitro</em&gt;: Metodologias para gravação a partir do Circuito de Septohippocampal de Roedores Isolado

Este protocolo descreve a gravação dos potenciais de campo local com haste multi sondas de silicone linear. Conversão de sinais usando análise de densidade atual fonte permite a reconstrução do local atividade elétrica no hipocampo do mouse. Com esta técnica, oscilações espacialmente restrita do cérebro podem ser estudadas em ratos movimentando-se livremente.

Gravação espacialmente restrita oscilações no hipocampo de ratos de comportar-se

Na vivo microdialysis permitiu a coleção de moléculas presentes no líquido intersticial do cérebro (ISF) de animais acordados, se comportando livremente. Para analisar moléculas relativamente grandes no ISF, o atual artigo enfoca especificamente o protocolo microdialysis usando sondas com alto peso molecular, cortar as membranas.

Na Vivo Microdialysis método para coletar grandes proteínas Extracellular do cérebro líquido intersticial com corte de alto peso molecular Probes

Aqui, descrevemos um método na vivo microdialysis analisar a liberação de aspartato e glutamato no hipocampo ventral de ratos epilépticos e não-epiléptica, em combinação com gravações de EEG. Concentrações extracelulares de aspartato e glutamato podem ser correlacionadas com as diferentes fases da doença.

Microdialysis de aminoácidos excitatórios durante as gravações de EEG em ratos movimentando-se livremente

A alteração do neurotransmissor é um mecanismo de disfunção neural que ocorre após concussão e contribui para as conseqüências de longo prazo, às vezes catastróficas. Este modelo de rato combina microdiálise, permitindo a quantificação do neurotransmissor in vivo, com uma técnica de queda de peso que exerce rápida aceleração e desaceleração da cabeça e tronco, um fator importante do trauma craniocerebral humano.

Um romance e modelo de rato translacional de concussão combinando força e rotação com Microdiálise cerebral in vivo

O presente protocolo descreve um método simples e eficiente para a coleta dinâmica e em tempo real de sangue de coração de ratos utilizando a técnica de microdiálise.

Extração Contínua Dinâmica de Sangue do Coração de Rato via Técnica de Microdiálise Não Invasiva

Este protocolo descreve o uso de um dispositivo de gravação personalizado e eletrodos para registrar potenciais de campo locais e investigar o fluxo de informações no hipocampo e no córtex pré-frontal do camundongo.

Gravações extracelulares duplas no hipocampo de camundongos e córtex pré-frontal

Aprenda a coletar fluido extracelular do hipocampo em ratos conscientes usando microdiálise cerebral. Esta técnica permite monitorar dinamicamente marcadores de doenças do sistema nervoso central em tempo real.

Coleta Dinâmica em Tempo Real de Fluido Extracelular do Hipocampo de Ratos Conscientes Usando um Sistema de Microdiálise

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