Name: Extração Contínua Dinâmica de Sangue do Coração de Rato via Técnica de Microdiálise Não Invasiva (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: Aprenda a técnica de microdiálise não invasiva para coleta contínua de sangue do coração de ratos em tempo real. Este método permite analisar biomarcadores sanguíneos de doenças cardiovasculares sem procedimentos invasivos tradicionais.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82104533), pela Fundação de Ciência Pós-Doutoral da China (2020M683273), pelo Departamento de Ciência e Tecnologia da província de Sichuan (2021YJ0175) e pelo projeto de P&D chave do Plano Provincial de Ciência e Tecnologia de Sichuan (2022YFS0438). Enquanto isso, os autores gostariam de agradecer ao Sr. Yuncheng Hong, engenheiro de equipamentos sênior da TRI-ANGELS D&H TRADING PTE. (cidade de Cingapura, Cingapura), para prestação de serviços técnicos para técnicas de microdiálise.

O protocolo animal foi aprovado pelo Comitê Administrativo da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Número de registro: 2021-11). Ratos Sprague Dawley (SD) machos livres de patógenos especificados (8-10 semanas, 260-300 g) foram criados em gaiolas de ventilação independente, mantendo o ambiente de laboratório a 22 °C e 65% de umidade relativa, e foram utilizados para o presente estudo. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Todos os ratos foram habituados à alimentação adaptativa por 1 semana com água livre e dieta durante o período.
1. Preparação experimental
<ol><li>Montar os equipamentos envolvidos na microdiálise da coleta de sangue (vide Tabela de Materiais), conforme Figura 1.</li>
	<li>Preparar solução anticoagulante citrato dextrose (ACDs), contendo 3,50 mmol/L de citrato, 7,50 mmol/L de citrato de sódio e 13,60 mmol/L de glicose, como fluido de perfusão para coleta de sangue de microdiálise (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Antes de usar, filtre as ACDs com uma unidade de filtração por membrana de 0,22 μm e remova as bolhas ultrassonicamente. Manter as DACs a 37 °C para reduzir a estimulação para ratos SD.</li>
</ol>2. Inspeção de perviedade do sistema de tubulação de microdiálise
<ol><li>Conecte a entrada da sonda da unidade de diálise com a agulha da seringa, o adaptador de tubulação e a tubulação fep (consulte a Tabela de Materiais). NOTA: A extremidade azul da sonda de microdiálise é para o influxo de fluido, e a extremidade transparente é para a saída de fluido.</li>
	<li>Verifique a patência do sistema de tubulação de microdiálise perfundindo ACDs18 no sistema de tubulação a uma velocidade de 2 μL/min. NOTA: Se as ACDs fluírem do local de coleta da amostra, o sistema de microdiálise desimpedido pode ser usado para coleta adicional de sangue cardíaco. Caso contrário, a sonda de sangue deve ser verificada se há vazamentos quebrados ou se a junta tubular foi selada.</li>
</ol>3. Implante de sonda de microdiálise
<ol><li>Anestesiar os ratos com isoflurano a 2% em uma mistura ar-oxigênio de 0,6 L/min, prender os ratos completamente inconscientes na mesa de operação e manter a temperatura corporal em 37 °C usando um mantenedor de temperatura animal (ver Tabela de Materiais).</li>
	<li>Retire o pelo do pescoço com um barbeador elétrico e desinfete o local cirúrgico com três rodadas alternadas de betadina e álcool 70%. Injetar bupivacaína (1,5 mg/kg) no rato. Expor a veia jugular direita por dissecção romba de partes moles e fáscia perivascular através de uma incisão de 1,5 cm ao longo da linha média do pescoço. OBS: Todos os instrumentos e ferramentas cirúrgicas utilizados no experimento devem ser previamente esterilizados por autoclavagem. Use luvas estéreis e campos cirúrgicos. Toda a operação experimental deve ser realizada em um ambiente estéril. Siga as diretrizes de uso local de animais para o regime de anestesia e analgesia.</li>
	<li>Faça um slipknot destacável usando uma sutura cirúrgica 4-0 na veia jugular direita na extremidade distal do coração para bloquear temporariamente o fluxo sanguíneo e faça uma incisão de 1,5 cm na veia jugular direita perto do coração.</li>
	<li>Inserir um estilete de cateter em forma de agulha (comprimento 25 mm, diâmetro 0,7 mm, ver Tabela de Materiais) na veia jugular direita em direção à extremidade proximal do coração do rato, inserir a sonda de microdiálise sanguínea (comprimento total da sonda 24 mm, comprimento da membrana 10 mm) em um cateter e implantar a sonda com pinça oftálmica ao longo da incisão oblíqua do estilete do cateter19.</li>
	<li>Remova o estilete do cateter guiado e mergulhe totalmente a membrana semipermeável da sonda (comprimento da membrana 10 mm, diâmetro da membrana 0,5 mm) na veia jugular direita. Desvende o slipknot destacável na extremidade distal do coração para restaurar o fluxo sanguíneo na veia jugular direita.</li>
	<li>Ligadura da sonda com a veia jugular direita com suturas cirúrgicas 4-0 e rosqueamento subcutâneo do tubo caudal da sonda através da parte posterior do pescoço. Consulte a Figura 2 para obter as etapas específicas de implantação da sonda. NOTA: O ponto de corte molecular pela sonda de microdiálise sanguínea utilizada neste estudo é de >20 kD. As amostras de sangue coletadas contêm substâncias com peso molecular inferior a 20 kD.</li>
</ol>4. Amostragem de microdiálise
<ol><li>Uma semana após o implante da sonda de microdiálise, os ratos que se recuperam de trauma cirúrgico são submetidos à amostragem de microdiálise. Coloque o rato acordado em um tanque de movimento livre (consulte a Tabela de Materiais) e conecte a sonda ao sistema de microdiálise. Equilibrar a membrana de diálise da sonda irrigando as DACs com uma taxa de 2 μL/min por 1 h.</li>
	<li>Coletar amostras de sangue de microdiálise a uma taxa de fluxo de 2 μL/min e mantê-las temporariamente em um recipiente fracionado de 4 °C. NOTA: As amostras de sangue obtidas podem ser testadas diretamente por centrifugação a 20.000 x g por 10 min à temperatura ambiente. Ou pode ser armazenado a -80 °C para os testes seguintes. Na coleta de amostras, é importante sempre observar se a sonda prolapsa e/ou vazamento.</li>
</ol>5. Operação pós-amostragem
<ol><li>Anestesiar os ratos SD com isoflurano a 2% em uma mistura ar-oxigênio a 0,6 L/min.</li>
	<li>Dissecção para confirmar novamente que a sonda está na veia jugular direita. Retire a sonda de microdiálise da veia jugular direita e coloque-a em água ultrapura.</li>
	<li>Finalmente, eutanasiar os ratos por inalação de isoflurano a 5%.</li>
	<li>Conecte a sonda à tubulação e enxágue durante a noite a uma taxa de 2 μL/min com água ultrapura para lavar completamente o sal residual no tubo e na sonda.</li>
	<li>Retire a sonda e mergulhe-a em água ultrapura. Conservar a 4 °C para evitar que a membrana de diálise da sonda se contraia. NOTA: Se o volume de líquido de diálise for inconsistente com o volume de fluido de perfusão, a sonda pode ser bloqueada pelo sangue coagulado. A sonda pode ser colocada na solução de proteína pancreática até que a substância visível se desfaça da ponta da membrana da sonda.</li>
</ol>

<ol><li>van Rensburg, W. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-mortem+evidence+of+a+diverse+distribution+pattern+of+atherosclerosis+in+the+South+African+population%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population.</a> Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).</li>
<li>Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+prevention+and+management+of+pre-existent+cardiovascular+disease+in+a+cohort+of+prostate+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Survivorship%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease prevention and management of pre-existent cardiovascular disease in a cohort of prostate cancer survivors.</a> Journal of Cancer Survivorship. , (2022).</li>
<li>Rødevand, L., Tesli, M., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+in+people+with+severe+mental+disorders%3A+an+update+and+call+for+action%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk in people with severe mental disorders: an update and call for action.</a> Current Opinion in Psychiatry. 35 (4), 277-284 (2022).</li>
<li>Izumi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+circulating+cathepsin+K+on+the+coronary+calcification+and+the+clinical+outcome+in+chronic+kidney+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+and+Vessels%22%5BJournal%5D)">Impact of circulating cathepsin K on the coronary calcification and the clinical outcome in chronic kidney disease patients.</a> Heart and Vessels. 31 (1), 6-14 (2016).</li>
<li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whey+protein+hydrolysate+alleviated+atherosclerosis+and+hepatic+steatosis+by+regulating+lipid+metabolism+in+apoE-%2F-+mice+fed+a+Western+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Whey protein hydrolysate alleviated atherosclerosis and hepatic steatosis by regulating lipid metabolism in apoE-/- mice fed a Western diet.</a> Food Research International. 157, 111419(2022).</li>
<li>Angelone, T., Rocca, C., Pasqua, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nesfatin-1+in+cardiovascular+orchestration%3A+From+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Nesfatin-1 in cardiovascular orchestration: From bench to bedside.</a> Pharmacological Research. 156, 104766(2020).</li>
<li>Bernardi, P. M., Barreto, F., Dalla Costa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+LC-MS%2FMS+method+for+evaluating+lung+penetration+of+tobramycin+in+rats+by+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Application of a LC-MS/MS method for evaluating lung penetration of tobramycin in rats by microdialysis.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 134, 340-345 (2017).</li>
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<li>Joukhadar, C., Müller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis%3A+current+applications+in+clinical+pharmacokinetic+studies+and+its+potential+role+in+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Microdialysis: current applications in clinical pharmacokinetic studies and its potential role in the future.</a> Clinical Pharmacokinetics. 44 (9), 895-913 (2005).</li>
<li>Stangler, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+and+microperfusion+electrodes+in+neurologic+disease+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+and+Barriers+of+the+CNS%22%5BJournal%5D)">Microdialysis and microperfusion electrodes in neurologic disease monitoring.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 18 (1), 52(2021).</li>
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<li>O'Connell, M. T., Krejci, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+techniques+and+microdialysis-based+patient-near+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microdialysis techniques and microdialysis-based patient-near diagnostics.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 414 (10), 3165-3175 (2022).</li>
<li>Hammarlund-Udenaes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+as+an+important+technique+in+systems+pharmacology-a+historical+and+methodological+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis as an important technique in systems pharmacology-a historical and methodological review.</a> The AAPS Journal. 19 (5), 1294-1303 (2017).</li>
<li>Stahl, M., Bouw, R., Jackson, A., Pay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Human microdialysis.</a> Current Pharmaceutical Biotechnology. 3 (2), 165-178 (2002).</li>
<li>Pierce, C. F., Kwasnicki, A., Lakka, S. S., Engelhard, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microdialysis+as+a+tool+for+assessing+the+delivery+of+chemotherapy+in+brain+tumor+patients%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Cerebral microdialysis as a tool for assessing the delivery of chemotherapy in brain tumor patients.</a> World Neurosurgery. 145, 187-196 (2021).</li>
<li>Sørensen, M., Jacobsen, S., Petersen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+in+equine+research%3A+a+review+of+clinical+and+experimental+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis in equine research: a review of clinical and experimental findings.</a> Veterinary Journal. 197 (3), 553-559 (2013).</li>
<li>Dmitrieva, N., Rodríguez-Malaver, A. J., Pérez, J., Hernández, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+release+of+neurotransmitters+from+superficial+and+deep+layers+of+the+dorsal+horn+in+response+to+acute+noxious+stimulation+and+inflammation+of+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Differential release of neurotransmitters from superficial and deep layers of the dorsal horn in response to acute noxious stimulation and inflammation of the rat paw.</a> European Journal of Pain. 8 (3), 245-252 (2004).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+sampling+and+HPLC-MS%2FMS+quantification+of+sinomenine%2C+ligustrazine%2C+gabapentin%2C+paracetamol%2C+pregabalin+and+amitriptyline+in+rat+blood+and+brain+extracellular+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Microdialysis sampling and HPLC-MS/MS quantification of sinomenine, ligustrazine, gabapentin, paracetamol, pregabalin and amitriptyline in rat blood and brain extracellular fluid.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 55 (9), 2198-2206 (2020).</li>
<li>Chauzy, A., Lamarche, I., Adier, C., Couet, W., Marchand, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+study+of+Aztreonam-Avibactam+distribution+in+peritoneal+fluid+and+muscle+of+rats+with+or+without+experimental+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Microdialysis study of Aztreonam-Avibactam distribution in peritoneal fluid and muscle of rats with or without experimental peritonitis.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 62 (10), 01228(2018).</li>
<li>Fang, X. X., Ardehali, H., Min, J. X., Wang, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+metabolic+landscape+of+iron+and+ferroptosis+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The molecular and metabolic landscape of iron and ferroptosis in cardiovascular disease.</a> Nature Reviews. Cardiology. , 1-17 (2022).</li>
<li>Samson, R., Ennezat, P. V., Le Jemtel, T. H., Oparil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+reduction+and+body+mass+index%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Hypertension+Reports%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk reduction and body mass index.</a> Current Hypertension Reports. , (2022).</li>
<li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((School+racial+segregation+and+long-term+cardiovascular+health+among+Black+adults+in+the+US%3A+A+quasi-experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">School racial segregation and long-term cardiovascular health among Black adults in the US: A quasi-experimental study.</a> PLoS Medicine. 19 (6), 1004031(2022).</li>
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<li>Brunner, M., Langer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+versus+other+techniques+for+the+clinical+assessment+of+in+vivo+tissue+drug+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis versus other techniques for the clinical assessment of in vivo tissue drug distribution.</a> The AAPS Journal. 8 (2), 263-271 (2006).</li>
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<li>Dhanani, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+rates+of+combination+antibiotic+therapy+using+in+vitro+microdialysis+simulating+in+vivo+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Recovery rates of combination antibiotic therapy using in vitro microdialysis simulating in vivo conditions.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 8 (6), 407-412 (2018).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

As DCV são uma doença crônica comum nas clínicas, com incidência gradativamente crescente na China, e a idade de início tende a ser mais jovem, causando preocupação e pânico na maioria dospacientes20,21. Sendo a principal causa de morte no mundo, as DCV podem induzir infarto cerebral e outras doenças de alta mortalidade, ameaçando seriamente a vida saudável dos pacientes22. As DCV, incluindo cardiopatia isquêmica, cardiomiopatia, ateroscle...

Com a aceleração do ritmo de vida e o aumento da pressão psicológica, as doenças cardiovasculares (DCV) tendem a ocorrer em jovens, pessoas de meia-idade e idosos 1,2. A morbidade e a mortalidade das DCV são elevadas, com características de início agudo, rápida progressão e longo curso da doença, o que afeta seriamente a segurança dospacientes3. A ocorrência de DCV pode estar intimamente relacionada às alterações em alguns componentes sanguíneos, como colesterol, lipídios séricos, glicemia, enzimas miocárdicas e proteína quinase K 4,5,6. A situação relevante do paciente pode ser gerenciada mais rapidamente analisando itens de exame de sangue de rotina. Assim, a qualidade das amostras de sangue determina a precisão dos resultados dos testes. No entanto, os métodos convencionais de coleta de sangue apresentam algumas desvantagens inevitáveis, que afetam seriamente os resultados experimentais, tais como grande área de trauma, pequeno volume de coleta de sangue, alta exigência para operadores, incapacidade de refletir mudanças de drogas em tempo real, pré-tratamento pesado de amostras de sangue, grande consumo de animais experimentais e falha em atender aos requisitos éticos dosanimais7,8,9 . Com os avanços contínuos na tecnologia médica, a qualidade da coleta de sangue também impôs exigências mais altas. Portanto, é urgente desenvolver uma nova tecnologia de coleta de sangue para superar as deficiências acima.
A microdiálise é uma técnica de amostragem in vivo baseada nos princípios da diálise10. Em condições de não-equilíbrio, os compostos a serem medidos são difundidos e perfundidos do tecido ao longo do gradiente de concentração para a sonda de microdiálise embebida no tecido no dialisato, que é continuamente removido juntamente com o dialisato, alcançando o objetivo de amostragem do tecido vivo11,12. Comparada aos métodos tradicionais de amostragem, a técnica de microdiálise apresenta vantagens esplêndidas nos seguintes aspectos13,14,15: rastreamento contínuo em tempo real das alterações de vários compostos no sangue; a amostragem não requer pré-processamento tedioso e pode realmente representar a concentração do composto alvo no local de amostragem; sondas podem ser implantadas em diferentes partes do corpo para investigar a absorção, distribuição, metabolismo, excreção e toxicidade dos compostos alvo; a amostra adquirida não contém macromoléculas biológicas (>20 kD). Portanto, as amostras de sangue de maior qualidade garantem uma melhor interpretação das DCV e do mecanismo tratado pela medicina étnica.
Os sistemas de amostragem de microdiálise geralmente consistem em bombas de microinjeção, tubos de conexão, tanques de livre circulação de animais, sondas de microdiálise e coletores de amostras16. Como parte mais crítica do dispositivo do sistema de microdiálise, as sondas comuns de microdiálise compreendem sondas concêntricas, sondas flexíveis, sondas lineares e sonda shunt17. Dentre estas, as sondas flexíveis são sondas macias e não metálicas, utilizadas principalmente para coletar amostras de vasos sanguíneos e tecidos periféricos como coração, músculo, pele e gordura de animais acordados e em movimento livre ou anestesiados13. Quando em contato com vasos sanguíneos ou tecidos, a sonda pode ser flexivelmente dobrada, evitando assim danos irreversíveis à sonda ou ao local de amostragem. Com o desenvolvimento contínuo da tecnologia de sonda, a aplicação da tecnologia de microdiálise em vários campos também está se aprofundando. Neste trabalho, o sangue do coração de ratos foi adquirido de forma dinâmica e contínua pela tecnologia de microdiálise não invasiva através da sonda flexível projetada para coleta de sangue.

<table><tbody><tr><td>Sistema de anestesia animal</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>Mantenedor de temperatura animal</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de microdiálise sanguínea</td><td> Cateter CMA Microdialysis AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td></td><td>  CMA Microdiálise AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>Citrato</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>Barbeador elétrico</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Tubulação Fep</td><td>  Tanque de Livre Circulação CMA Microdialysis AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>para animais</td><td>  CMA Microdiálise AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>Glicose</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>Pinça hemostática</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F21020-16</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Micro tesoura</td><td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td><td>FS221</td><td></td></tr><tr><td>Microdiálise tubo de coleta</td><td>  Coletor de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td></td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>Microdiálise in vitro stand</td><td>  Bomba de microinjeção de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td></td><td> CMA Microdialysis AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>Seringa para microdiálise (1,0 mL)</td><td>  Adaptador de tubo de microdiálise CMA Microdialysis AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td></td><td> CMA Microdiálise AB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>Membrana filtrante microporosa</td><td>Merck Millipore Ltd.</td><td></td><td></td>R0DB36622</tr><tr><td>Suturas cirúrgicas não absorvíveis</td><td>Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>Mesa de operação</td><td>Yuyan Scientific Instrument Co., Ltd</td><td>30153</td><td></td></tr><tr><td>Pinça oftálmica</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>Citrato de sódio</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1613859</td><td></td></tr><tr><td>Sprague Dawley  (SD) ratos</td><td>Chengdu Dossy Experimental Animals Co., Ltd</td><td>SYXK(<img alt="Equação 1" src="/files/ftp_upload/64531/64531eq01.jpg" style="margin: auto; ">)2019-049</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica</td><td>Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de seringa</td><td>  Líquido</td><td></td> de limpeza ultrassônico Guangdong <td></td></tr><tr><td>Goote ultrassônico Co. de Guangdong Goote</td> da microdiálise de CMA, Ltd <td>KMH1-240W8101</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

extração contínua dinâmica de sangue do coração de rato via técnica de microdiálise não invasiva

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

A análise dinâmica dos hemocomponentes é de grande importância na compreensão das doenças cardiovasculares e suas doenças relacionadas, como infarto do miocárdio, arritmia, aterosclerose, edema pulmonar cardiogênico, embolia pulmonar e embolia cerebral. Ao mesmo tempo, é urgente romper a técnica de amostragem contínua de sangue cardíaco em ratos vivos para avaliar a eficácia da terapia de medicina étnica distinta. Neste estudo, uma sonda de microdiálise sanguínea foi implantada na veia jugular direita de ratos em um procedimento cirúrgico preciso e não invasivo. Amostras de sangue cardíaco foram então coletadas a uma taxa de 2,87 nL/min a 2,98 mL/min conectando-se a um sistema on-line de coleta de amostras de microdiálise. Ainda mais momentaneamente, as amostras de sangue adquiridas podem ser temporariamente armazenadas em recipientes de microdiálise a 4 °C. O programa on-line de coleta contínua de sangue de coração de rato baseado em microdiálise tem garantido sobremaneira a qualidade das amostras de sangue, avançando e revigorando a racionalidade científica das pesquisas sobre doenças cardiovasculares sistêmicas e avaliando a terapia etnomédica sob a perspectiva da hematologia.

O presente protocolo permitiu a obtenção do sangue cardíaco de ratos conscientes de acordo com parâmetros de amostragem estabelecidos no equipamento de microdiálise. As amostras de sangue normais devem ser vermelhas brilhantes, enquanto os animais com hipóxia, potenciais coágulos sanguíneos ou doença anêmica podem ter roxo escuro ou vermelho escuro. As amostras obtidas pela técnica de microdiálise sanguínea são incolores, claras e transparentes, podendo ser utilizadas para analisar os marcadores séricos de diferentes doe...

O presente protocolo descreve um método simples e eficiente para a coleta dinâmica e em tempo real de sangue de coração de ratos utilizando a técnica de microdiálise.

Extração Contínua Dinâmica de Sangue do Coração de Rato via Técnica de Microdiálise Não Invasiva

Dynamic analysis of blood components is of great importance in understanding cardiovascular diseases and their related diseases, such as myocardial ...

Nossa técnica dinâmica de coleta contínua de sangue de um coração de rato é muito importante para analisar os componentes sanguíneos, contribuindo para a compreensão da doença cardiovascular e sua doença relacionada. Em comparação com os métodos tradicionais de amostragem, esta técnica tem as vantagens de in vivo, em tempo real, dinâmica e não invasiva, sem micromoleculares biológicos e pré-processo de titulação de amostra para um teste estranho. Esta técnica não é apenas aplicável a doenças cardiovasculares, mas também deve funcionar para o diagnóstico e tratamento de doenças, detectando biomarcadores sanguíneos combinados com cromatografia líquida de alta fase e espectrometria de massa.Esse método pode ser utilizado na investigação de doenças cardiovasculares como infarto do miocárdio, apneia e aterosclerose. Além disso, também se aplica ao edema pulmonar cardiogênico e embolia pulmonar e cerebral. Depois de fazer o preparo experimental, conecte a entrada da sonda da unidade de diálise com a agulha da seringa, o adaptador de tubulação e a tubulação de FEP.Verifique a patência do sistema de tubulação de microdiálise perfundindo solução anticoagulante citrato dextrose no sistema de tubulação. Fazer uma incisão para expor a veia jugular direita por dissecção romba de tecidos moles e fáscia perivascular. Usando uma sutura cirúrgica 4-0, faça um nó de deslizamento destacável na veia jugular direita na extremidade distal do coração para bloquear o fluxo sanguíneo temporariamente.Em seguida, faça uma incisão na veia jugular direita perto do coração. Insira um estilete de cateter em forma de agulha na veia jugular direita em direção à extremidade proximal do coração do rato. Inserir a sonda de microdiálise sanguínea em um cateter e implantá-la com pinça oftálmica ao longo da incisão oblíqua do estilete do cateter.Remova o estilete do cateter guiado e mergulhe totalmente a membrana semipermeável da sonda na veia jugular direita. Desvende o nó deslizante destacável na extremidade distal do coração para restaurar o fluxo sanguíneo na veia jugular direita. Em seguida, utilizar suturas cirúrgicas 4-0 para ligar a sonda com a veia jugular direita.Coloque o rato acordado em um tanque de movimento livre e conecte a sonda ao sistema de microdiálise. Em seguida, irrigar a solução anticoagulante citrato dextrose a uma taxa de dois microlitros por minuto durante uma hora para equilibrar a membrana de diálise da sonda. Coletar amostras de sangue de microdiálise e mantê-las temporariamente em um recipiente fracionado de quatro graus Celsius.Para reconfirmar que a sonda está na veia jugular direita, disseque o rato. Retire a sonda de microdiálise da veia jugular direita e coloque-a em água ultrapura. Conecte a sonda à tubulação e enxágue durante a noite com água ultrapura para lavar completamente o sal residual na tubulação e na sonda.As amostras de sangue normais apareceram em vermelho vivo, enquanto potenciais coágulos sanguíneos foram observados em amostras hipóxicas. As amostras obtidas pela técnica de microdiálise sanguínea eram incolores, límpidas e transparentes. Para evitar a destruição da membrana e a sonda de deslizamento ou deslocamento, devemos prestar atenção quando estamos colocando e imergindo a sonda na veia jugular do rato.As amostras de sangue obtidas através da técnica de microdiálise podem ser utilizadas para analisar os biomarcadores de diferentes doenças e a distribuição sanguínea de fármacos e metabólitos raros.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este protocolo descreve um método para coletar fluido intersticial cardíaco a partir do coração de rato perfundido e isolado. Para separar fisicamente o transudado intersticial do perfusado de efluente venoso coronário, o coração perfundido de Langendorff é invertido e o transudado (fluido intersticial) formado na superfície cardíaca é coletado usando um tampão de látex macio.

O modelo do coração invertido para a coleta de transudados intersticiais do coração de rato isolado

Aqui, descrevemos um método na vivo microdialysis analisar a liberação de aspartato e glutamato no hipocampo ventral de ratos epilépticos e não-epiléptica, em combinação com gravações de EEG. Concentrações extracelulares de aspartato e glutamato podem ser correlacionadas com as diferentes fases da doença.

Microdialysis de aminoácidos excitatórios durante as gravações de EEG em ratos movimentando-se livremente

Aqui, descrevemos uma configuração para gravação simultânea do eletrocardiograma e pressão intra-arterial (BP) em ratos experimentais, que podem ser feitos com equipamento padrão em instalações de animais e podem ser aplicados a fisiológicos ou farmacológicos estudos para investigar os mecanismos de patogenicidade ou terapêuticos em medicina cardiovascular.

Gravação simultânea de eletrocardiografia e sangue invasiva pressão medida em ratos

Este artigo apresenta um método eficiente para realizar isquemia miocárdica e subsequente reperfusão crônica em ratos usando uma abordagem minimamente invasiva. Além disso, a função hemodinâmica ventricular esquerda dos ratos é avaliada por ecocardiografia e métodos cardíacos de trabalho isolados.

Método invasivo semi-mínimo para induzir infarto do miocárdio em ratos e a avaliação da função cardíaca por um sistema cardíaco de trabalho isolado

O padrão-ouro em cardiologia para experimentos funcionais celulares e moleculares são os cardiomiócitos. Este artigo descreve adaptações à técnica não-Langendorff para isolar cardiomiócitos de camundongos.

Um Método Simples e Eficaz para Isolar Consistentemente Cardiomiócitos de Camundongos

O presente protocolo descreve a canonização aórtica e a perfusão retrógrada do coração murino neonatal ex-vivo .  Uma estratégia de duas pessoas, usando um microscópio de dissecação e uma agulha de bitola pequena, permite a cannulação confiável. A quantificação da tensão contítil longitudinal é alcançada usando um transdutor de força conectado ao ápice do ventrículo esquerdo.

Técnica modificada para o uso de corações murinos neonatais na preparação de Langendorff

O protocolo aqui fornece uma amostragem dinâmica detalhada em tempo real do fluido extracelular do hipocampo de ratos acordados usando um sistema de microdiálise.

Coleta Dinâmica em Tempo Real de Fluido Extracelular do Hipocampo de Ratos Conscientes Usando um Sistema de Microdiálise

O protocolo mostra repetidas coletas de líquido cefalorraquidiano e sangue de ratos epilépticos realizadas em paralelo com a monitorização contínua por vídeo-eletroencefalograma (EEG). Estes são instrumentais para explorar possíveis ligações entre alterações em várias moléculas de fluido corporal e atividade convulsiva.

Amostragem de líquido cefalorraquidiano e sangue da veia lateral da cauda em ratos durante registros de EEG

Este protocolo descreve um método de medida da pressão e volume do ventrículo esquerdo utilizando a técnica de condutância pressão-volume. Este método permite o monitoramento contínuo em tempo real dos efeitos das drogas sobre o coração.

Detecção em Tempo Real dos Efeitos do Ácido Ferúlico no Ventrículo Esquerdo de Rato Usando Cateter de Condutividade Pressão-Volume

Este protocolo descreve a fabricação avançada de materiais e métodos ex vivo de coração de rato para biointerface bidirecional óptica e elétrica, permitindo estimulação cardíaca precisa, gravação e modelagem de infarto para pesquisa em bioeletrônica.

Interfaces elétricas e optoeletrônicas bidirecionais em corações de ratos ex vivo saudáveis e isquêmicos

Aprenda a técnica de microdiálise não invasiva para coleta contínua de sangue do coração de ratos em tempo real. Este método permite analisar biomarcadores sanguíneos de doenças cardiovasculares sem procedimentos invasivos tradicionais.

Extração Contínua Dinâmica de Sangue do Coração de Rato via Técnica de Microdiálise Não Invasiva

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