Name: Avaliação da Eficácia dos Perácidos Orgânicos na Erradicação de Biofilmes Laticínios Usando uma Abordagem Combinando Métodos Estáticos e Dinâmicos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 47 s
Description: Aprenda a avaliar a eficácia de perácidos orgânicos na erradicação de biofilmes laticínios usando métodos estáticos e dinâmicos com Pseudomonas azotoformans. Este protocolo robusto auxilia pesquisadores no controle de biofilmes.

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Esta pesquisa foi apoiada pelo Consortium de Recherche et Innovations en Bioprocédés Industriels au Québec (CRIBIQ) (2016-049-C22), Agropur, Groupe Sani Marc e pelo Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada (NSERC) (RDCPJ516460-17). Agradecemos a Teresa Paniconi pela revisão crítica do manuscrito.

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Os autores declaram que não têm conflitos de interesse.

O ensaio MBEC (biofilm microplate assay) foi o primeiro método a ser reconhecido como um teste padrão de erradicação de biofilme pela ASTM17. Nosso estudo e outros mostraram que existem duas etapas críticas ao usar este ensaio: a etapa de sonicação (tempo e potência) e o tempo de tratamento desinfetante18. Stewart e Parker também sugeriram outros parâmetros que poderiam influenciar o resultado do ensaio, como a espécie microbiana, a idade do biofilme, a relação área de supe...

A indústria de laticínios é um importante setor industrial em todo o mundo, inclusive no Canadá, onde existem mais de 10.500 fazendas leiteiras produzindo quase 90 milhões de hL de leite a cada ano1. Apesar dos rigorosos requisitos de higiene impostos na indústria de laticínios, inclusive nas plantas de processamento, o leite constitui um ótimo meio de cultura para microrganismos e, portanto, os produtos lácteos provavelmente contêm microrganismos, incluindo deterioração ou microrganismos patogênicos. Esses patógenos podem causar várias doenças; por exemplo, Salmonella sp. e Listeria monocytogenes podem causar gastroenterite e meningite, respectivamente2. Os microrganismos de deterioração podem afetar a qualidade e as propriedades organolépticas dos produtos lácteos, produzindo gases, enzimas extracelulares ou ácidos3. A aparência e a cor do leite também podem ser alteradas, por exemplo, por Pseudomonas spp.4.
Alguns desses microrganismos podem formar biofilmes em diferentes superfícies, incluindo aço inoxidável. Tais biofilmes possibilitam a persistência e multiplicação de microrganismos na superfície do equipamento e, assim, a contaminação dos laticínios5. Os biofilmes também são problemáticos devido à sua capacidade de impedir a transferência de calor e acelerar a corrosão do equipamento, levando à substituição prematura do equipamento e, portanto, a perdas econômicas6.
Os procedimentos de limpeza no local (CIP) permitem que a indústria alimentícia controle o crescimento de microrganismos. Esses procedimentos envolvem o uso sequencial de hidróxido de sódio, ácido nítrico e, por vezes, sanitizantes contendo ácido hipocloroso e ácido peracético 7,8. Embora o ácido hipocloroso seja altamente eficaz contra microrganismos, ele também reage com a matéria orgânica natural, causando a formação de subprodutos tóxicos9. O ácido peracético não gera subprodutos nocivos10; no entanto, sua efetividade contra biofilmes na indústria alimentícia é altamente variável10,11. Recentemente, outros peroxiácidos, incluindo os ácidos perpropiônico e perlático, têm sido estudados por sua atividade antimicrobiana, e parecem ser uma boa alternativa para o controle do crescimento microbiano em biofilmes12,13.
Portanto, este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia de peroxiácidos orgânicos (ácidos peracético, perpropiônico e perlático e um desinfetante à base de ácido peracético) para erradicar biofilmes lácteos usando uma abordagem que combina o ensaio de concentração mínima de erradicação de biofilme (MBEC), um método estático de triagem de alto rendimento e o reator de biofilme do Centro de Controle de Doenças (CDC), um método dinâmico que imita in situ Condições. O ensaio MBEC é doravante referido como "placas de microtitulação de biofilme" no protocolo. O protocolo aqui apresentado e os resultados representativos demonstram a eficácia dos peroxiácidos orgânicos e sua potencial aplicação para o controle de biofilmes microbianos na indústria de laticínios.

<table><tbody><tr><td>0,2 &micro; Filtros M&nbsp;</td><td>Corning</td><td>09-754-28</td><td>diâmetro: 50 mm, PTFE- Membrana</td></tr><tr><td>316 cupom de disco de aço inoxidável</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>RD128-316</td><td></td></tr><tr><td>cupom deslizante de aço inoxidável 316</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>CBR 2128-316</td><td></td></tr><tr><td>placa de 96 microtitulação</td><td>Corning</td><td>07-200-89</td><td>microplaca de fundo plano tratada com cultura de células&nbsp;</td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Sigma Aldrich</td><td>27225</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Pontas de alumínio</td><td>Microscopia Eletrônica Ciência</td><td>75830-10</td><td>32x5mm</td></tr><tr><td>Glutaraldeído aquoso EM Grau 25%</td> <td>Microscopia Eletrônica Ciências</td><td>16220</td><td>loja em -20 &deg; C</td></tr><tr><td>AB204-S/FACT Balança Analítica</td><td>Mettler Toledo</td><td>AB204-S</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de Ventilação Bacteriana (0.45 &micro; m)</td> <td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>BST 02915</td><td></td></tr><tr><td>BioDestroy</td><td>Groupe Sani Marc</td><td>09-10215</td><td>desinfetante comercial à base de ácido peracético, armazenado na RT</td></tr><tr><td>Carboy LDPE 20 L</td><td>Cole Parmer</td><td>06031-52</td><td></td></tr><tr><td>Reator de biofilme CDC</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>CRB 90</td><td>biorreator</td></tr><tr><td>sulfato de cério (IV)</td><td>Thermo Scientific</td><td>35650-K2</td><td>armazena no</td></tr><tr><td>RT Confocal laser scanning microscope&nbsp; LSM 700</td><td>Zeiss</td><td>LSM 700</td><td></td></tr><tr><td>Dey-Engley caldo neutralizante</td><td>Millipore</td><td>D3435-500G</td><td>armazenar em 4 &deg; C</td></tr><tr><td>EMS950x + 350s gold sputter&nbsp;</td><td>Ciências da Microscopia Eletrônica Ciências da Microscopia</td><td></td><td></td></tr><tr>Eletrônica da resina de<td>cola Epoxy</td><td>14121</td><td>com</td><td></td></tr><tr><td>álcool etílico de BDMA 95%, loja</td> global <td>da P016EA95</td> de USP <td>Greenfield</td><td>na</td></tr><tr><td>RT Solução do indicador Sigma</td><td>Aldrich</td><td>318922-100ML</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Enchimento/venting tampão</td><td>Cole Parmer</td><td>RK-06258-00</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Viabilidade de Biofilme FilmTracer LIVE/DEAD</td><td>Invitrogen</td><td>L10316</td><td>kit de viabilidade de células fluorescentes (SYTO 9: mancha fluorescente verde, iodeto de propídio: mancha fluorescente vermelha), armazenar a - 20 &graus; C</td></tr><tr><td>Quebra de fluxo de vidro</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>FB 50</td><td></td></tr><tr><td>Gold com pintura prateada&nbsp;</td><td>Microscopia Eletrônica Sciences</td><td>12684-15</td><td></td></tr><tr><td>Conjunto de placas de aquecimento</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>110V Stir Plate</td><td></td></tr><tr><td>Chave de fenda hexagonal</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>CBR 5497</td><td></td></tr><tr><td>Peróxido de hidrogênio</td><td>Sigma</td><td>216763</td><td>armazenar em 4 &deg; C</td></tr><tr><td>Alças de inoculação</td><td>VWR</td><td>12000-812</td><td>estéreis, 10 &micro; l</td></tr><tr><td>Ácido láctico</td><td>Laboratoire MAT</td><td>LU-0200</td><td>loja em RT</td></tr><tr><td>MASTERFLEX L / S 7557-04 W / 7557-02 com bomba peristáltica EASY-LOAD II e 77200-50 Head</td><td>Cole Parmer</td><td>77200-60</td><td></td></tr><tr><td>MBEC (Concentração Mínima de Erradicação de Biofilme) inoculador de biofilme com base de 96 poços</td><td>Innovotech</td><td>19111</td><td>Placa de microtitulação de biofilme</td></tr><tr><td>Base de ágar Oxford Thermo</td><td>Scientific</td><td>OXCM0856B</td><td>loja em 4 &deg; C</td></tr><tr><td>Porta-cupons de plástico</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>CBR 2203</td><td></td></tr><tr><td>Haste porta-lâminas de plástico</td><td>Biosurface Technologies Corporation</td><td>CBR 2203-GL</td><td></td></tr><tr><td>Iodeto de potássio</td><td>Fisher Chemical</td><td>P410-500</td><td>armazene na RT</td></tr><tr><td>Chave de fenda de precisão (1,5 mm x 40 mm)</td> <td>Wiha</td><td>26015</td><td></td></tr><tr><td>Laboratório de ácido propiônico</td><td> MAT</td><td>PF-0221</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Sartorius BCE822-1S Entris&reg; II Balança de Carregamento Superior Essencial Básico</td><td>Cole Parmer</td><td>&nbsp; UZ-11976-3</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio eletrônico de varredura JSM-6360LV modelo</td><td>JEOL</td><td>JSM-6360LV</td><td>SEM e interface de controle do usuário</td></tr><tr><td>Tubo com tampa de rosca, 15 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.205</td><td>(Lx&Oslash;): 120 x 17 mm, material: PP, base cônica, transparente, HD-PE</td></tr><tr><td>Tubo com tampa de rosca, 50 mL</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.205</td><td>(Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, material: PP, fundo cônico, transparente, HD-PE</td></tr><tr>Ciências de <td>Microscopia Eletrônica</td> <td>Trihidratada de Cacodilato de Sódio</td><td> 12300</td><td>loja em -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Tiossulfato de sódio</td><td>Thermo Scientific</td><td>AC124270010</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Banho de sonicação</td><td>Fisher</td><td>15-336-122</td><td>5,7 L</td></tr><tr><td>Solução de amido</td><td>Anachemia</td><td>AC8615</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Ácido sulfúrico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>258105-500ML</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Ágar de soja tríptica</td><td>BD Bacto</td><td>DF0369-17-6</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Caldo de soja tríptico</td><td>BD Bacto</td><td>DF0370-17-3</td><td>loja na RT</td></tr><tr><td>Tubing Masterflex L/S 16 25'Cole</td> <td>Parmer</td><td>MFX0642416</td><td></td></tr><tr><td>Tubing Masterflex L/S 18 25'Cole</td> <td>Parmer</td><td>MFX0642418</td><td></td></tr><tr><td>Tygon SPT-3350 tubulação de silício&nbsp;</td><td>Saint-Gobain</td><td>ABW18NSF</td><td>IDx OD: 1/4 pol.x 7/16 pol.</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Cole Parmer</td><td>UZ-04724-00</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria&nbsp;</td><td>VWR</td><td>89202-970</td><td></td></tr><tr><td>Zen software</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação da eficácia dos perácidos orgânicos na erradicação de biofilmes laticínios usando uma abordagem combinando métodos estáticos e dinâmicos

Evaluation of the Efficacy of Organic Peroxyacids for Eradicating Dairy Biofilms Using an Approach Combining Static and Dynamic Methods

A presença de biofilmes na indústria de laticínios é de grande preocupação, pois eles podem levar à produção de produtos lácteos inseguros e alterados devido à sua alta resistência à maioria dos procedimentos de limpeza no local (CIP) frequentemente usados em plantas de processamento. Portanto, é imperativo desenvolver novas estratégias de controle de biofilme para a indústria de laticínios. Este protocolo tem como objetivo avaliar a eficácia de peroxiácidos orgânicos (ácidos peracético, perpropiônico e perlático e um desinfetante comercial à base de ácido peracético) para erradicar biofilmes lácteos usando uma combinação de métodos estáticos e dinâmicos. Todos os desinfetantes foram testados nas bactérias produtoras de biofilme mais fortes em um único ou misto biofilme usando o ensaio de concentração mínima de erradicação de biofilme (MBEC), um método estático de triagem de alto rendimento. Um tempo de contacto de 5 minutos com os desinfetantes nas concentrações recomendadas erradicou com sucesso os biofilmes simples e mistos. Estudos estão atualmente em andamento para confirmar essas observações usando o reator de biofilme do Centro de Controle de Doenças (CDC), um método dinâmico para imitar condições in situ . Este tipo de biorreator permite o uso de uma superfície de aço inoxidável, que constitui a maioria dos equipamentos e superfícies industriais. Os resultados preliminares do reator parecem confirmar a eficácia dos peroxiácidos orgânicos contra biofilmes. A abordagem combinada descrita neste estudo pode ser utilizada para desenvolver e testar novas formulações biológicas ou químicas para controle de biofilmes e erradicação de microrganismos.

A análise do MEV mostra a presença de biofilmes produzidos por P. azotoformans PFl1A nas estacas de microplacas de biofilme (Figura 2A). Uma estrutura tridimensional de biofilme pode ser observada. O P. azotoformans PFl1A foi previamente identificado como um forte produtor de biofilme (A570 &gt; 1,5) utilizando placas de microtitulação de 96 poços12.
Além disso, o biofilme PFl1A de P. azotoformans que s...

Este protocolo descreve uma abordagem que combina métodos estáticos e dinâmicos para avaliar a eficácia de peroxiácidos orgânicos para erradicar biofilmes na indústria de laticínios. Esta abordagem também pode ser usada para testar a eficácia de novas formulações biológicas ou químicas para o controle de biofilmes.

Avaliação da Eficácia dos Perácidos Orgânicos na Erradicação de Biofilmes Laticínios Usando uma Abordagem Combinando Métodos Estáticos e Dinâmicos

The presence of biofilms in the dairy industry is of major concern, as they may lead to the production of unsafe and altered dairy products due to their ...

Os microrganismos formadores de biofilme são uma questão importante na indústria alimentícia, incluindo a indústria de laticínios. Devido ao seu impacto negativo na qualidade dos produtos, então é importante desenvolver estratégias de controle de biofilme. Essa abordagem combina um método estático de triagem de alto rendimento e um método dinâmico que imita as condições in situ.Esses dois métodos são complementares para o estudo da eficácia dos desinfetantes contra biofilmes. Essa abordagem pode ser usada para testar novas formulações biológicas ou químicas para controlar biofilmes nos setores alimentício, médico ou ambiental. Comece por vórtice dos tubos de cultura bacteriana de Pseudomonas azotoformans.Transfira assepticamente 100 microlitros da cultura bacteriana para 10 mililitros de caldo de soja tríptico estéril ou meio TSB para atingir a concentração final de aproximadamente duas vezes 10 até a sétima UFC por mililitro. Vórtice o tubo de cultura. Em seguida, usando uma pipeta multicanal, transfira 150 microlitros da cultura bacteriana diluída nos poços de placa de microtitulação de biofilme em triplicado.Carregar 150 microlitros de meio TSB em três novos poços como controle. Em seguida, incube a placa de microtitulação de biofilme a 30 graus Celsius por 24 horas sem agitação. Limpe e seque ao ar as partes do biorreator antes de colocar a lâmina plana dentro do copo de vidro de um litro preso ao suporte por uma barra magnética.Mantenha a configuração na posição vertical usando a barra de plástico presa ao lado interno da tampa do biorreator. Use a chave de fenda para colocar os cupons de aço inoxidável ou slides em suas hastes de polipropileno. Insira cupons ou deslizamentos nos orifícios da tampa sem colocar seus pinos de alinhamento nos entalhes, permitindo que o vapor escape durante a esterilização.Cubra todas as aberturas do biorreator com folha de alumínio e envolva o resto do equipamento, nomeadamente a tubulação tamanho 18 e a tubulação tamanho 16, o freio de fluxo de vidro, as tampas do recipiente, as chaves de fenda, a pinça e os filtros de 0,2 micrômetro com folha de alumínio. Autoclave o biorreator configurado em um ciclo seco a 121 graus Celsius por 20 minutos. Para realizar a primeira etapa da formação do biofilme no biorreator em modo de batela, dentro de um gabinete de segurança biológica, conecte uma extremidade da tubulação tamanho 18 ao bico de saída do biorreator e mantenha a outra extremidade envolta em folha de alumínio.Remova um cupom ou suporte deslizante da tampa do biorreator e coloque-o em um tubo estéril de 50 mililitros. Em seguida, usando uma pipeta sorológica de 50 mililitros, encha o copo do biorreator com 340 mililitros de 300 miligramas por mililitro de meio TSB através do orifício ocupado pela haste. Para inocular o meio de cultura no biorreator, adicione um mililitro de 10 à oitava UFC por mililitro de solução bacteriana de Pseudomonas azotoformans através do orifício usando uma pipeta de cinco mililitros e coloque a haste de volta à sua posição original.Posicione as hastes já colocadas nos orifícios da tampa para que os pinos caibam nos respectivos entalhes. Em seguida, coloque um filtro de purga de ar bacteriano de 0,2 micrômetro no final do tubo de menor diâmetro localizado na tampa do biorreator. O outro tubo do mesmo diâmetro permanece permanentemente entupido com uma tampa de rosca de metal ou um plugue de silicone que se fecha firmemente.Coloque o biorreator por 24 horas sobre a placa de aquecimento ajustada a 30 graus Celsius e mexa a 130 RPM. Após 24 horas, realizar a segunda etapa da formação do biofilme no biorreator em modo de fluxo contínuo. Coloque um garrafão contendo 18 litros de água destilada estéril no armário de biossegurança.Em seguida, adicione dois litros de 1000 miligramas por litro de meio de cultura TSB para obter uma concentração final de 100 miligramas por litro. Cubra o recipiente com sua tampa estéril à qual dois tubos estão conectados. O primeiro é um tubo de silicone fixado na interface da tampa para bombear o meio.O segundo, o tubo de tamanho 16, é conectado à porta externa, permitindo que o líquido flua em direção ao biorreator. Depois de conectar a tubulação de tamanho 16 à extremidade do freio de fluxo de vidro, insira este último no maior tubo na tampa do biorreator por sua outra extremidade e, em seguida, instale a tubulação de tamanho 16 na bomba peristáltica. Use outro garrafão de 20 litros para coletar o efluente do biorreator.Fixar a extremidade do tubo ligado à bica de saída do biorreactor à tampa do recipiente de resíduos. Insira um filtro de 0,2 micrômetro no tubo presente na tampa deste recipiente. Uma vez feito, ligue a bomba peristáltica a uma taxa de fluxo de 11,3 mililitros por minuto e deixe o sistema funcionando por 24 horas.Após 24 horas, desligue a bomba peristáltica e pare de mexer e aquecer o biorreator. Para recuperar o biofilme bacteriano, lave os cupons ou lâminas em 40 mililitros de PBS para eliminar as bactérias planctônicas. Em seguida, solte-os em um tubo cônico estéril de 50 mililitros contendo 40 mililitros de PBS.Após 30 segundos de vórtice, sonicate os tubos a 40 kilohertz por 30 segundos. Repita isso três vezes. Uma vez feito, colete os 40 mililitros de suspensão de biofilme em um tubo cônico estéril de 50 mililitros e enxágue os cupons ou lâminas com dois de solução estéril de PBS.Recupere este líquido de enxágue e adicione-o à suspensão de biofilme já recolhida. Retire a placa de microtitulação de 30 graus Celsius. Adicione 200 microlitros de PBS em três poços de uma microplaca de 96 poços.Para lavar os biofilmes e eliminar as bactérias planctônicas, transfira a tampa da microplaca de biofilme com biofilmes formados nos pinos para a microplaca de 96 poços contendo o PBS por 10 segundos. Prepare os desinfetantes nas concentrações necessárias e adicione 200 microlitros de cada concentração de desinfetante nos poços de uma nova placa de microtitulação de 96 poços em triplicata. Transfira a tampa da placa de microtitulação de biofilme para a placa de microtitulação de 96 poços contendo os desinfetantes e incube a placa à temperatura ambiente durante o tempo de exposição desejado.Em seguida, adicione 200 microlitros de caldo neutralizante Dey-Engley aos poços de uma nova placa de microtitulação de 96 poços. Transfira a tampa da placa de microtitulação de biofilme para a placa de microtitulação de 96 poços contendo o caldo neutralizante. Sele a placa de microtitulação com parafilme e coloque-a no sonicator de banho a 40 kilohertz por 30 minutos.Após 30 minutos, a partir da primeira coluna da placa sonicada, transfira 100 microlitros de biofilmes destacados para a primeira fileira de uma nova placa de microtitulação de 96 poços. Em seguida, adicione 180 microlitros de PBS estéril a uma placa de 96 poços, exceto para a primeira linha. Em seguida, transfira 20 microlitros da solução de biofilme da primeira fileira para os poços na segunda fileira contendo 180 microlitros de PBS para obter a diluição de 10 para a menos um.Em seguida, transfira 20 microlitros da segunda fileira para os poços na próxima linha para obter a diluição de 10 para menos dois. Repita isto para obter diluição entre 10 a menos cinco e 10 a menos sete. Inocular 100 microlitros da diluição desejada em TSA e incubar as placas de acordo com os parâmetros de crescimento da bactéria.Forme os biofilmes de Pseudomonas azotoformans PFLA 1 nos cupons no biorreator, remova a haste que contém os cupons e enxágue a haste dentro de um tubo cônico contendo 30 mililitros de PBS para remover células planctônicas. Solte cada cupom em um tubo cônico estéril de 50 mililitros usando uma chave de fenda. Em seguida, adicione quatro mililitros da solução de peroxiácido orgânico apropriado ou PBS para o controle.Após cinco minutos de incubação, adicione 36 mililitros de caldo neutralizante Dey-Engley. Depois de vórtice do tubo cônico por 30 segundos, sonice-os a 40 kilohertz por 30 segundos. Repita o processo três vezes para obter a suspensão de biofilme.Repita o mesmo procedimento com as outras hastes, prepare delírios em série da suspensão de biofilme e coloque a suspensão em meio TSA, conforme descrito anteriormente. A análise do SCM mostrou a presença do biofilme de Pseudomonas azotoformans PFL1A nos pinos de microplacas de biofilme. O biofilme PFL1A de Pseudomonas azotoformans formado em uma lâmina de aço inoxidável utilizando um biorreator mostrou-se muito denso e apresentou as características morfológicas de um biofilme tridimensional maduro.Os resultados das contagens bacterianas dos biofilmes desenvolvidos por este isolado no sistema dinâmico mostraram densidades celulares significativas correspondentes a 8,74 log UFC por centímetro quadrado em meio de cultura TSB e 7,86 log CFU centímetro quadrado em leite desnatado estéril. Os resultados obtidos com o isolado de B.vesicularis mostraram que o aumento da concentração de nutrientes de 100 para 900 miligramas por litro resultou em um aumento na contagem bacteriana dos biofilmes de 6,11 para 8,71 log CFU centímetros quadrados. Além disso, o crescimento significativo do biofilme foi observado quando a taxa de fluxo foi reduzida para 6,0 mililitros por minuto, indicando que certos fatores poderiam influenciar a formação de biofilme no biorreator.Nenhum dos biofilmes continha células viáveis detectáveis em cinco minutos de tempo de contato em 500 partes por milhão com perácidos orgânicos e 100.000 partes por milhão com concentrações de peróxido de hidrogênio de desinfetantes geralmente aplicados em plantas leiteiras. O SCM mostrou a estrutura tridimensional da concentração mínima de erradicação de biofilme não tratada ou biofilmes MBEC, enquanto os biofilmes MBEC tratados perderam sua conformação tridimensional. É essencial permanecer sob a condição estéril durante a realização deste protocolo.Além disso, o usuário deve lembrar que o resultado gerado está associado a um isolado e desinfetante exclusivo. A combinação de desinfetante com vibração mecânica, ultrassom ou tratamentos enzimáticos pode ser avaliada para melhorar a eficácia da erradicação do biofilme. Essa abordagem usando métodos estáticos e dinâmicos para formar biofilmes abriu o caminho para os pesquisadores rastrearem e estudarem novas formulações anti-biofilme para controlar melhor os biofilmes em vários setores.

evaluation-efficacy-organic-peroxyacids-for-eradicating-dairy

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Tay, S. B., et.al. Perturbação Antivirulenta de Biofilmes Patogênicos usando lactonases modificadas para apagamento do quórum.  J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra o processo de inibição da formação de biofilmes ao introduzir uma enzima que interrompe a sinalização celular bacteriana. A enzima impede que as bactérias produzam substâncias poliméricas extracelulares, reduzindo assim o desenvolvimento de biofilmes em um microprato com fundo de vidro. Por fim, a estrutura do biofilme é...

Avaliação Microscópica da Inibição Mediada por Enzimas na Formação de Biofilmes

Fonte: Bucher, T., et al. Metodologias para Estudo de Biofilmes de B. subtilis como modelo para caracterização de inibidores de biofilmes de pequenas moléculas. J. Vis. Exp. (2016).Este vídeo demonstra como a integridade da matriz de biofilmes influencia a resistência bacteriana ao etanol, comparando unidades formadoras de colônias em biofilmes não tratados e com inibidores interrompidos. A redução das UFCs em amostras tratadas com inibidores demonstra que a matriz extracelular é essencial para...

Ensaio de Resistência ao Etanol para Avaliar a Integridade da Matriz de Biofilme

Este vídeo demonstra um método baseado em fluorescência para quantificar a formação de biofilme induzida por sais biliares. Após a adição de sais biliares na cultura de uma bactéria entérica patogênica, a produção de biofilme é detectada usando uma lectina fluorescente que se liga aos polissacarídeos na matriz de substância polimérica extracelular (EPS) do biofilme.

Um ensaio para estudar a formação de biofilme induzida por sal de bile por meio da detecção de matriz EPS

O vídeo mostra um ensaio de dispersão de biofilme usando uma placa de vários poços. O tampão e o tratamento com glicose desmontam o biofilme, liberando bactérias, enquanto os sais biliares induzem o estresse, retendo as bactérias na substância polimérica extracelular protetora. Maior dispersão com tampão e glicose confirma a desmontagem bem-sucedida do biofilme, estimada pela medição das unidades formadoras de colônias.

Detecção de desmontagem de biofilme por meio de um ensaio de dispersão

Este estudo apresenta o desenvolvimento de metodologias reprodutíveis para estudar inibidores de biofilme e seus efeitos sobre a multicelularidade de Bacillus subtilis.

Metodologias para o estudo<em&gt; B. subtilis</em&gt; Os biofilmes como um modelo para a caracterização de pequena molécula biofilme Inibidores

Este protocolo descreve um novo método para crescer e qualitativamente analisar biofilme bacteriano sobre hifas fúngicas por microscopia confocal e eletrônica.

Um novo método para a análise qualitativa Multi-escala de Bacteriana biofilmes em filamentosa fúngica Colonies Usando Confocal e Microscopia Eletrônica

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Avaliação da Eficácia dos Perácidos Orgânicos na Erradicação de Biofilmes Laticínios Usando uma Abordagem Combinando Métodos Estáticos e Dinâmicos (Vídeo) | JoVE Journal

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