Análise de Amostras de Cyperi Rhizoma Cru e Processadas Usando Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massas em Tandem em Ratos com Dismenorreia Primária

Metabonomics mede as respostas metabólicas globais e dinâmicas e é consistente com a determinação da eficácia geral da medicina tradicional chinesa. Alterações nos componentes da droga devido à resposta metabólica do corpo podem ser determinadas com os metabólicos. O escopo da triagem dos ingredientes ativos da MTC pode ser reduzido com a utilização dessa técnica.

A unilateralidade pode ser evitada estudando os constituintes individuais. Este método pode ser simultâneo, determinar os metabólitos endógenos e constituintes exógenos absorvidos no sangue. A metabinômica tem sido amplamente utilizada em estudos sobre MTC, toxicologia de drogas, gestão da saúde, esportes, alimentos e outros campos.

Para começar, determine o extrato necessário de Cyperi rhizoma, ou CR, ou Cyperi rhizoma processado com vinagre, ou CRV, para tratar um grupo de seis ratos Sprague Dawley por três dias. Calcular o volume de RC ou CRV a ser aplicado por rato usando esta equação. Para processar o CRV, misture bem 100 gramas de CR e 20 gramas de vinagre, que tem mais de 5,5 gramas de ácido acético por 100 mililitros, e incube por 12 horas.

Após a incubação, mexa a mistura em uma panela de ferro por 10 minutos a 110 a 120 graus Celsius. Em seguida, retire a mistura e deixe esfriar em temperatura ambiente. Para preparar o extrato de CR, mergulhe o CR por duas horas com água pura 10 vezes a quantidade de CR ingerida, certificando-se de que os materiais medicinais estejam abaixo do nível líquido.

Em seguida, leve a mistura de água e remédio para ferver em fogo alto e mantenha fervendo em fogo baixo por 20 minutos. Em seguida, filtre o conteúdo através de um pano filtrante de malha 100 e colete o filtrado. Em seguida, concentre o filtrado coletado em um extrato com um evaporador rotativo para um grama por mililitro.

Para preparar o extrato de CRV, execute as etapas de imersão, fervura e concentração, conforme demonstrado para a extração de CR. Para testar os extratos CR e CRV, pipetar 500 microlitros do extrato para 500 microlitros de metanol em tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitro e vórtice por 30 segundos para misturar. Centrifugar as amostras durante 15 minutos a 16, 500 g a quatro graus Celsius.

Em seguida, remova o sobrenadante e transfira-o para o frasco para amostras para teste. Após testar as amostras, realize a análise de componentes principais, ou PCA, e a modelagem utilizando o software de análise. Importe os dados padronizados dos metabólitos para o software e use o Autofit para criar o modelo de análise.

Finalmente, use os escores para obter o gráfico de dispersão da ACP. Para realizar a análise discriminante ortogonal de mínimos quadrados parciais, ou OPLS-DA, importe os dados padronizados dos metabólitos e dos grupos CR e CRV para o software. Em seguida, importe os dados CR e CRV para seus respectivos grupos criados.

Em seguida, use Autofit para construir o modelo de análise e use a pontuação para obter o gráfico de dispersão de pontuação do OPLS-DA. Por fim, utilizar o VIP para obter a variável significância na projeção ou o valor VIP no OPLS-DA. Para identificar os metabólitos potencialmente diferenciais, selecione os metabólitos com valores de VIP maiores que um.

Em seguida, utilizar o software estatístico para calcular o valor de P dos metabólitos triados pelo teste t de student. Em seguida, para identificar os metabólitos diferenciais, use os metabólitos anotados e selecione os metabólitos diferenciais a serem combinados no banco de dados KEGG. Mostrar as mudanças nos metabólitos diferenciais nos grupos CR e CRV desenhando um mapa de calor.

Para examinar as vias metabólicas potenciais, vá para o banco de dados MetaboAnalyst. Use a Análise de Caminhos para carregar os diferentes metabólitos para obter as vias metabólicas potenciais. Carregue os diferentes metabólitos no banco de dados KEGG para analisar as vias metabólicas potenciais.

O experimento do modelo de dismenorreia analisado mostrou diferenças significativas nos níveis de prostaglandinas. Os ratos dos grupos modelo CR e CRV apresentaram reações de contorção substanciais após a injeção de ocitocina. Os resultados da análise de ACP demonstraram que os agrupamentos de RC e CRV comparados aos grupos modelo foram significativamente separados nos modos íons positivo e negativo.

O OPLS-AD foi utilizado para rastrear diferenças metabólicas, e os resultados do gráfico de dispersão demonstraram que os grupos RC e CRV foram separados. Análises estatísticas univariadas foram realizadas para identificar variações metabólicas. Um gráfico de vulcão é mostrado, em que cada ponto corresponde a um metabólito diferente.

Foram observadas alterações significativas em 63 metabólitos no modo positivo e 30 no modo negativo. Os metabólitos diferenciais foram determinados usando os bancos de dados KEGG e HDMB, e os compostos combinados com precisão foram listados. Os valores quantitativos dos metabólitos diferenciais entre os grupos RC e CRV foram calculados e agrupados.

As manchas coloridas indicam como cada metabólito é expresso em relação aos outros. Em comparação com o grupo RC, os níveis de quatro metabólitos diferenciais no grupo CRV aumentaram, enquanto 11 metabólitos diminuíram no modo íon positivo. No caso do modo iônico negativo, quatro metabólitos diferenciais aumentaram e sete metabólitos diminuíram.

Os resultados da análise da via de KEGG mostraram que os metabólitos diferenciais foram associados com nove vias nos modos positivo e negativo. Quanto mais metabólitos diferenciais, melhores os resultados, de modo que vias metabólicas suficientes podem ser ligadas e as principais vias metabólicas rastreadas serão mais precisas.