Name: Análise e imagem de osteócitos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-11-29T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: Aprenda a criar modelos 3D de osteócitos a partir de imagens confocal para análise de dinâmica de fluidos computacional. Este método permite avaliar tensões de cisalhamento e compreender a mecanossensação óssea em condições saudáveis e patológicas.

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<meta charset="utf8"></head><body>Modelagem 3D de Osteócitos para Análise CFD para Estudo de Mecanosensação em Osso

<ol><li>Li, M. C. M., Chow, S. K. H., Wong, R. M. Y., Qin, L., Cheung, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+osteocytes-specific+molecular+mechanism+in+regulation+of+mechanotransduction+-+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Translat%22%5BJournal%5D)">The role of osteocytes-specific molecular mechanism in regulation of mechanotransduction - A systematic review.</a> J Orthop Translat. 29, 1-9 (2021).</li>
<li>Fritton, S. P., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+and+solute+transport+in+bone%3A+Flow-induced+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Fluid+Mech%22%5BJournal%5D)">Fluid and solute transport in bone: Flow-induced mechanotransduction.</a> Annu Rev Fluid Mech. 41, 347-374 (2009).</li>
<li>Klein-Nulend, J., Bacabac, R. G., Bakker, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+loading+and+how+it+affects+bone+cells%3A+the+role+of+the+osteocyte+cytoskeleton+in+maintaining+our+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">Mechanical loading and how it affects bone cells: the role of the osteocyte cytoskeleton in maintaining our skeleton.</a> Eur Cell Mater. 24, 278-291 (2012).</li>
<li>Knothe Tate, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%26%2334%3BWhither+flows+the+fluid+in+bone%3F%26%2334%3B+An+osteocyte%27s+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">&#34;Whither flows the fluid in bone?&#34; An osteocyte's perspective.</a> J Biomech. 36 (10), 1409-1424 (2003).</li>
<li>Tiede-Lewis, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Degeneration+of+the+osteocyte+network+in+the+C57BL%2F6+mouse+model+of+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Degeneration of the osteocyte network in the C57BL/6 mouse model of aging.</a> Aging (Albany NY). 9 (10), 2190-2208 (2017).</li>
<li>Lai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dependences+of+osteocyte+network+on+bone+compartment%2C+age%2C+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Res%22%5BJournal%5D)">The dependences of osteocyte network on bone compartment, age, and disease.</a> Bone Res. 3 (1), 15009(2015).</li>
<li>Schurman, C. A., Verbruggen, S. W., Alliston, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupted+osteocyte+connectivity+and+pericellular+fluid+flow+in+bone+with+aging+and+defective+TGF-%CE%B2+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Disrupted osteocyte connectivity and pericellular fluid flow in bone with aging and defective TGF-β signaling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 118 (25), e2023999118(2021).</li>
<li>van Tol, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanoresponse+of+bone+is+closely+related+to+the+osteocyte+lacunocanalicular+network+architecture%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The mechanoresponse of bone is closely related to the osteocyte lacunocanalicular network architecture.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (51), 32251-32259 (2020).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluid+flow+in+the+osteocyte+mechanical+environment%3A+a+fluid-structure+interaction+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech+Model+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Fluid flow in the osteocyte mechanical environment: a fluid-structure interaction approach.</a> Biomech Model Mechanobiol. 13 (1), 85-97 (2014).</li>
<li>Ganesh, T., Laughrey, L. E., Niroobakhsh, M., Lara-Castillo, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiscale+finite+element+modeling+of+mechanical+strains+and+fluid+flow+in+osteocyte+lacunocanalicular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Multiscale finite element modeling of mechanical strains and fluid flow in osteocyte lacunocanalicular system.</a> Bone. 137, 115328(2020).</li>
<li>Schneider, P., Meier, M., Wepf, R., Müller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serial+FIB%2FSEM+imaging+for+quantitative+3D+assessment+of+the+osteocyte+lacuno-canalicular+network%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Serial FIB/SEM imaging for quantitative 3D assessment of the osteocyte lacuno-canalicular network.</a> Bone. 49 (2), 304-311 (2011).</li>
<li>Kamioka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+observing+silver-stained+osteocytes+in+situ+in+3-microm+sections+using+ultra-high+voltage+electron+microscopy+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc+Microanal%22%5BJournal%5D)">A method for observing silver-stained osteocytes in situ in 3-microm sections using ultra-high voltage electron microscopy tomography.</a> Microsc Microanal. 15 (5), 377-383 (2009).</li>
<li>Ciani, C., Doty, S. B., Fritton, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+effective+histological+staining+process+to+visualize+bone+interstitial+fluid+space+using+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">An effective histological staining process to visualize bone interstitial fluid space using confocal microscopy.</a> Bone. 44 (5), 1015-1017 (2009).</li>
<li>Sharma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+osteocyte+lacunar-canalicular+microenvironment+due+to+estrogen+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Alterations in the osteocyte lacunar-canalicular microenvironment due to estrogen deficiency.</a> Bone. 51 (3), 488-497 (2012).</li>
<li>Verbruggen, S. W., Vaughan, T. J., McNamara, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain+amplification+in+bone+mechanobiology%3A+a+computational+investigation+of+the+in+vivo+mechanics+of+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Strain amplification in bone mechanobiology: a computational investigation of the in vivo mechanics of osteocytes.</a> J R Soc Interface. 9 (75), 2735-2744 (2012).</li>
<li>Goggin, P. M., Zygalakis, K. C., Oreffo, R. O., Schneider, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+3D+imaging+of+osteocytes+and+computational+modelling+in+mechanobiology%3A+insights+on+bone+development%2C+ageing%2C+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Cell+Mater%22%5BJournal%5D)">High-resolution 3D imaging of osteocytes and computational modelling in mechanobiology: insights on bone development, ageing, health and disease.</a> Eur Cell Mater. 31, 264-295 (2016).</li>
<li>Kamioka, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscale+fluid+flow+analysis+in+a+human+osteocyte+canaliculus+using+a+realistic+high-resolution+image-based+three-dimensional+model%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscale fluid flow analysis in a human osteocyte canaliculus using a realistic high-resolution image-based three-dimensional model.</a> Integr Biol. 4 (10), 1198-1206 (2012).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+measurement+of+solute+transport+in+the+bone+lacunar-canalicular+system%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">In situ measurement of solute transport in the bone lacunar-canalicular system.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 102 (33), 11911-11916 (2005).</li>
<li>Manfredini, P., Cocchetti, G., Maier, G., Redaelli, A., Montevecchi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poroelastic+finite+element+analysis+of+a+bone+specimen+under+cyclic+loading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">Poroelastic finite element analysis of a bone specimen under cyclic loading.</a> J Biomech. 32 (2), 135-144 (1999).</li>
<li>Steck, R., Niederer, P., Knothe Tate, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+finite+element+analysis+for+the+prediction+of+load-induced+fluid+flow+and+mechanochemical+transduction+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Theor+Biol%22%5BJournal%5D)">A finite element analysis for the prediction of load-induced fluid flow and mechanochemical transduction in bone.</a> J Theor Biol. 220 (2), 249-259 (2003).</li>
<li>You, L., Cowin, S. C., Schaffler, M. B., Weinbaum, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+strain+amplification+in+the+actin+cytoskeleton+of+osteocytes+due+to+fluid+drag+on+pericellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">A model for strain amplification in the actin cytoskeleton of osteocytes due to fluid drag on pericellular matrix.</a> J Biomech. 34 (11), 1375-1386 (2001).</li>
<li>Weinbaum, S., Cowin, S. C., Zeng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+the+excitation+of+osteocytes+by+mechanical+loading-induced+bone+fluid+shear+stresses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomech%22%5BJournal%5D)">A model for the excitation of osteocytes by mechanical loading-induced bone fluid shear stresses.</a> J Biomech. 27 (3), 339-360 (1994).</li>
<li>Niroobakhsh, M., Laughrey, L. E., Dallas, S. L., Johnson, M. L., Ganesh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+modeling+based+on+confocal+imaging+predicts+changes+in+osteocyte+and+dendrite+shear+stress+due+to+canalicular+loss+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomech+Model+Mechanobiol%22%5BJournal%5D)">Computational modeling based on confocal imaging predicts changes in osteocyte and dendrite shear stress due to canalicular loss with aging.</a> Biomech Model Mechanobiol. 23 (1), 129-143 (2024).</li>
<li>Dallas, S. L., Moore, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+confocal+imaging+approaches+to+understand+the+structure+and+function+of+osteocytes+and+the+lacunocanalicular+network%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Using confocal imaging approaches to understand the structure and function of osteocytes and the lacunocanalicular network.</a> Bone. 138, 115463(2020).</li>
<li>Boyde, A., Wolfe, L. A., Maly, M., Jones, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+confocal+microscopy+in+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Scanning%22%5BJournal%5D)">Vital confocal microscopy in bone.</a> Scanning. 17 (2), 72-85 (1995).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Lixa de grão 1.200</td><td>Buehler</td><td>30-5170-012-100</td><td></td></tr><tr><td>Software 3-Matic</td><td>Materialize</td><td>https://www.materialise.com/en/industrial/software/3-matic</td><td>Software de otimização de dados 3D</td></tr><tr><td>Lixa de grão 600</td><td>Buehler</td><td>30-5118-600-100</td><td></td></tr><tr><td>Lixa de grão 800</td><td>Buehler</td><td>30-5170-800-100</td><td></td></tr><tr><td>Software</td> <td>ANSYSANSYS</td><td>https://www.ansys.com/</td> <td>software de simulação</td></tr><tr><td>Isotiocianato de Fluoresceína (FITC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7250</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ software</td><td></td><td>https://imagej.net/ij/</td><td></td></tr> <tr><td>Óleo de Imersão para Microscópios</td><td>Leica Microsystems</td><td>195371-10-9</td><td></td></tr><tr><td>Leica TCS Sp5 II microscópio confocal&nbsp;</td><td>Leica Microsystems</td><td>TCS Sp5 II&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Serra de diamante de furo interno Leitz 1600</td><td>Leica&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software MIMICS Innovation Suite</td><td>Materialize</td><td>https://www.materialise.com/en/healthcare/mimics-innovation-suite</td><td>software de processamento baseado em imagem 3D</td></tr><tr><td>Meio de montagem Permount</td> Kit de Acrílico de Cura Rápida <td>Fisher scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>Sampl-Kwick</td> Agitador de Laboratório de Plataforma Única <td>Buehler</td><td>20-3560</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Confiável científico INC</td><td>Modelo 55S</td><td></td></tr></tbody></table>

análise e imagem de osteócitos

Analysis and Imaging of Osteocytes

Este protocolo descreve como desenvolver modelos de osteócitos derivados de confocal para investigar a quantidade de tensão de cisalhamento de fluxo de fluido a que um osteócito e seus processos dendríticos são submetidos devido à carga mecânica. Um camundongo C57BL6 idoso e um jovem foram selecionados para construir modelos de osteócitos baseados em imagens confocais jovens e envelhecidos. Seis outros modelos de osteócitos simulados foram gerados a partir do mesmo modelo de osteócitos jovens usando a técnica de modificação da geometria para estudar a alteração da morfologia do LCN devido ao envelhecimento ou doença óssea. Os parâmetros modificados pela geometria incluíram a espessura lacunar-canalicular, densidade canalicular e diâmetro. Modelos de osteócitos modificados foram desenvolvidos alterando um parâmetro de cada vez, mantendo os outros parâmetros iguais. Portanto, o efeito de cada um dos parâmetros morfológicos no FFSS é examinado isoladamente. Os resultados revelaram que a quantidade de FFSS experimentada por um osteócito foi diferente nesses modelos de osteócitos, mostrando a dependência do FFSS na morfologia do LCN. Os valores de FFSS foram previstos em várias partes do modelo de osteócitos, como o corpo celular do osteócito ou as membranas dendríticas. Os dendritos em todos os modelos experimentaram maiores valores de FFSS do que a membrana do corpo celular dos osteócitos.
A Figura 5 mostra os contornos FFSS para modelos de osteócitos jovens vs. idosos gerados diretamente a partir de pilhas de imagens FITC confocais e seis outros modelos de osteócitos desenvolvidos a partir do Modelo 1 usando a técnica de modificação de geometria. O FFSS médio em osteócitos e membranas dendríticas no modelo de osteócitos jovens (Modelo 1) foi de 0,42 Pa, o que é mais significativo do que o FFSS médio de 0,13 Pa no modelo de osteócitos envelhecidos (Modelo 2). Os dados obtidos mostram um aumento na FFSS média em osteócitos com maior espaço lacunar-canalicular (Modelo 7 e Modelo 8) e uma diminuição na FFSS em osteócitos com menor densidade canalicular (Modelo 3 e Modelo 4), enquanto a FFSS não mudou significativamente com a mudança do diâmetro dendrítico no Modelo 5 e Modelo 6. O Modelo 2 e o Modelo 4 apresentaram os menores valores de FFSS de 0,19 Pa e 0,13 Pa, respectivamente. A magnitude do FFSS no Modelo 8 é maior do que nos outros modelos de osteócitos. Não apenas a maioria dos dendritos está na cor vermelha no Modelo 8, mas o corpo celular dos osteócitos também experimenta FFSS mais alto do que em outros modelos.
O FFSS experimentado pelos osteócitos também foi apresentado com base no volume do espaço lacunar-canalicular e na área de superfície, que foram obtidos por pós-processamento no ANSYS CFX para descobrir a correlação entre o FFSS e a estrutura alterada do LCN. Também foi possível medir a área de superfície de cada modelo exposto ao FFSS maior que 0,8 Pa, que se acredita ser o nível de FFSS que causa a formação óssea21,22. A modelagem de osteócitos mostrou uma correlação entre o FFSS médio e o volume ou área de superfície do espaço lacunar-canalicular para todos os modelos de osteócitos, conforme mostrado na Tabela 1. O osteócito envelhecido (Modelo 2) e o osteócito simulado de meia-idade (Modelo 4) com a menor densidade canalicular tiveram a menor área de superfície lacunar-canalicular de 1372,7 μm2 e 1122,6 μm2. O Modelo 2 e o Modelo 4 também apresentaram o menor volume do espaço lacunar-canalicular de 229,4 μm3 e 203,5 μm3, respectivamente, o que pode ser correlacionado com suas baixas quantidades de FFSS. O modelo 6, com o maior diâmetro dendrítico, apresentou a maior área de superfície lacunar-canalicular. O modelo 8 apresentou o maior volume do espaço lacunar-canalicular e os maiores valores de FFSS.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig01.jpg"> 
Figura 1: Imagens confocais de plano Z único de uma seção transversal de um fêmur corado com FITC tiradas com objetivas de óleo de 5x, 20x e 100x. A rede lacunar-canalicular é visível na imagem tirada com a objetiva 100x. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig02.jpg"> 
Figura 2: Modelos confocais baseados em imagens de um osteócito jovem (Modelo 1) e um osteócito envelhecido (Modelo 2) gerados a partir do fêmur corado com FITC de camundongo C57BL6 de 4 meses e 22 meses. A imagem ampliada mostra a espessura lacunar-canalicular (LC) para osteócitos jovens e o mesmo para o osteócito envelhecido. A imagem do modelo 1 foi modificada com permissão de Niroobakhsh et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig03.jpg"> 
Figura 3: Seis modelos de osteócitos desenvolvidos a partir do Modelo 1 usando a técnica de modificação da geometria. A densidade canalicular foi reduzida para gerar o Modelo 3 (meia-idade simulada) e o Modelo 4 (envelhecido simulado), enquanto o diâmetro dendrítico e a espessura LC foram os mesmos do Modelo 1. O Modelo 5 e o Modelo 6 foram desenvolvidos com a mesma densidade canalicular e espessura de LC do Modelo 1, enquanto seu diâmetro dendrítico foi duas e quatro vezes maior que o Modelo 1. O Modelo 7 e o Modelo 8 apresentaram espessura lacunar-canalicular duas vezes e quatro vezes maior, respectivamente, enquanto a densidade canalicular e o diâmetro dendrítico permaneceram os mesmos do Modelo 1. A imagem do modelo 1 foi modificada com permissão de Niroobakhsh et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig04.jpg"> 
Figura 4: Modelo de osteócitos jovens baseado em imagem confocal em 3D. Vista 3D da área da seção transversal do modelo de osteócito jovem baseado em imagem confocal representando a modelagem do espaço lacunar-canalicular, que é usado para análise de fluidos ao redor do osteócito e dendritos. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" src="/files/ftp_upload/64699/64699fig05.jpg"> 
Figura 5: A distribuição do FFSS para todos os modelos de osteócitos mostra a dependência da magnitude do FFSS na morfologia dos osteócitos. As regiões vermelhas mostram os valores mais altos de FFSS, especialmente nas membranas dendríticas, e não no corpo celular dos osteócitos. Esta imagem foi modificada com permissão de Niroobakhsh et al.23. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64699/64699fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Modelos</td>
			<td>Área de superfície lacunar-canalicular (μm2)</td>
			<td>Volume do espaço lacunar-canalicular (μm3)</td>
			<td>Ave FFSS (Pa)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="4">Modelos de osteócitos baseados em imagem confocal</td>
			<td>Modelo 1</td>
			<td rowspan="2">2652.9</td>
			<td rowspan="2">261</td>
			<td rowspan="2">0.42</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jovem (4 meses de idade)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modelo 2</td>
			<td rowspan="2">1372.7</td>
			<td rowspan="2">229.4</td>
			<td rowspan="2">0.19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envelhecido (22 meses)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td rowspan="12">Modelos simulados de osteócitos gerados usando a técnica de modificação da geometria</td>
			<td>Modelo 3</td>
			<td rowspan="2">1530.4</td>
			<td rowspan="2">242.6</td>
			<td rowspan="2">0.27</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Simulado de meia-idade)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modelo 4</td>
			<td rowspan="2">1122.6</td>
			<td rowspan="2">203.5</td>
			<td rowspan="2">0.13</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(Simulado envelhecido)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modelo 5</td>
			<td rowspan="2">3724.9</td>
			<td rowspan="2">302.9</td>
			<td rowspan="2">0.49</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x diâmetro do dendrito)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modelo 6</td>
			<td rowspan="2">4791</td>
			<td rowspan="2">337</td>
			<td rowspan="2">0.57</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(4 x diâmetro do dendrito)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modelo 7</td>
			<td rowspan="2">3116.3</td>
			<td rowspan="2">440.6</td>
			<td rowspan="2">1.17</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(2 x LC de espessura)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modelo 8</td>
			<td rowspan="2">3542.2</td>
			<td rowspan="2">658.2</td>
			<td rowspan="2">1.89</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>(4 x LC de espessura)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tabela 1: Comparação dos modelos de osteócitos. Comparação do FFSS médio, volume do espaço lacunar-canalicular e área de superfície em oito modelos distintos de osteócitos, incluindo dois modelos baseados em imagens confocais e seis modelos simulados gerados a partir do Modelo 1 usando a técnica de modificação de geometria.

Análise e imagem de osteócitos

Osteocytes are the bone cells that are thought to respond to mechanical strains and fluid flow shear stress (FFSS) by activating various biological ...

Research

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Urânio é conhecido por afetar o metabolismo ósseo. Aqui, apresentamos um protocolo que visa investigar o efeito da exposição de urânio natural sobre a viabilidade, a diferenciação e a função dos osteoclastos, as células responsável pela reabsorção óssea.

Métodos para analisar os impactos de urânio Natural em In Vitro Osteoclastogenesis

Apresentamos um protocolo para comparar o estado de minerais em vesículas lançadas por duas linhas de células de osso humano: hFOB 1.19 e Saos-2. Seus perfis de mineralização foram analisados por alizarina Red-S (AR-S) coloração, visualização de luz ultravioleta (UV), imagem de microscopia eletrônica (TEM) de transmissão e microanálise de raios-x energia dispersiva (EDX).

Análise de minerais produzidos por hFOB 1.19 e Saos-2 células usando microscopia eletrônica de transmissão com energia dispersiva microanálise de raios-x

Utilizamos um protocolo de amostragem geológica (coring) para obter espécimes de osso cortical de tamanho uniforme para experimentos SRμCT do aspecto anterior da femora humana. Este método é minimamente destrutivo, eficiente, resulta em espécimes cilíndricos que minimizam artefatos de imagem de formas de amostra irregulares e melhora a visualização e análise microarquitetural.

Um guia de processamento de imagens e secção, coring e imagem para aquisição e análise de amostras de ossos cortical de alto rendimento para micro-CT síncrotron

Este protocolo descreve a dissecção neonatal da calvária de camundongos dmp1-topázio e o isolamento de osteócitos expressando a proteína verde fluorescente através da digestão e fracionamento celular, além da preparação de osteócitos para triagem celular ativada por fluorescência (FACS).

Obtenção de osteócitos primários através do fracionamento em calvária murina de osteócitos que expressam GFP

O presente artigo descreve a realização de uma abordagem de imagem intravital para observar a sinalização de cálcio induzida mecanicamente de osteócitos embutidos in vivo em tempo real em resposta à carga mecânica em nível de tecido do terceiro metatarso do camundongo.

Uma abordagem de imagem intravital fluorescente para estudar a dinâmica de sinalização de cálcio induzida por carga em osteócitos de camundongos

Este protocolo apresenta um método econômico e eficiente para avaliação quantitativa da microarquitetura óssea em um modelo de osteoporose em camundongos, combinando técnicas de coloração pela hematoxilina-eosina (HE) e microtomografia computadorizada (Micro-CT).

Avaliação da Microarquitetura Óssea Trabecular em Modelo de Osteoporose em Camundongos

Propomos um protocolo para avaliar a regeneração óssea em vários níveis hierárquicos. Essa abordagem multimodal permite a análise estrutural em diferentes escalas de comprimento, enfrentando efetivamente os desafios na preparação da amostra. Também oferece um fluxo de trabalho confiável para avaliar a eficácia dos biomateriais na promoção da regeneração óssea.

Abordagem Multimodal para Avaliar a Regeneração Óssea e o Desempenho em Andaimes

Aprenda a criar modelos 3D de osteócitos a partir de imagens confocal para análise de dinâmica de fluidos computacional. Este método permite avaliar tensões de cisalhamento e compreender a mecanossensação óssea em condições saudáveis e patológicas.

Análise e imagem de osteócitos

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