Name: Explorando a estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T14:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 33 s
Description: Aprenda uma estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas por hipóxia. Este método simples e eficiente otimiza aplicações de medicina tradicional chinesa em pesquisas de neurociência.

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Esta pesquisa foi financiada por projetos-chave de P & D do Departamento Provincial de Ciência e Tecnologia de Sichuan (2020YFS0325).

<ol><li>Mendelevich, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+cerebral+ischemia%2C+and+dizziness%5BTitle%5D)+AND+%22Zhurnal+Nevrologii+i+Psikhiatrii+Imeni+SS+Korsakova%22%5BJournal%5D)">Chronic cerebral ischemia, and dizziness.</a> Zhurnal Nevrologii i Psikhiatrii Imeni SS Korsakova. 122 (3), 22-26 (2022).</li>
<li>Gao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expert+consensus+on+the+diagnosis+and+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+integrated+traditional+Chinese+and+western+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Integrated+Traditional+and+Western+Medicine%22%5BJournal%5D)">Expert consensus on the diagnosis and treatment of chronic cerebral ischemia with integrated traditional Chinese and western medicine.</a> Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine. 38 (10), 1161-1167 (2018).</li>
<li>Luyu, S., Heng, L., Dengke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+treatment+of+45+cases+of+cerebral+infarction+with+Astragalus+and+Dengzhan+Xixin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Jilin+Journal+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Combined treatment of 45 cases of cerebral infarction with Astragalus and Dengzhan Xixin injection.</a> Jilin Journal of Traditional Chinese Medicine. 27 (4), 23-24 (2007).</li>
<li>Bei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+study+of+Dengzhanxixin+injection+combined+with+Astragalus+injection+in+the+treatment+of+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Basic+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical study of Dengzhanxixin injection combined with Astragalus injection in the treatment of acute ischemic stroke.</a> Journal of Basic Chinese Medicine. 21 (9), 1123-1127 (2015).</li>
<li>Tian, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+ratio+of+Astragalus+injection+combined+with+Dengzhan+Xixin+injection+against+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+rats+by+baseline+equal-ratio+increase-decrease+design+method%5BTitle%5D)+AND+%22China+Pharmacy%22%5BJournal%5D)">Optimal ratio of Astragalus injection combined with Dengzhan Xixin injection against cerebral ischemia-reperfusion injury in rats by baseline equal-ratio increase-decrease design method.</a> China Pharmacy. 30 (14), 1885-1889 (2019).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+and+mechanism+of+Astragalus+combined+with+Erigeron+breviscapusin+the+best+proportion+on+cerebral+ischemia+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Protective effect and mechanism of Astragalus combined with Erigeron breviscapusin the best proportion on cerebral ischemia rats.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 35 (2), 104-108 (2019).</li>
<li>Yan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+oxidative+damage+of+PC12+cells+with+hypoxia+and+hypoglycemia+based+on+the+combination+of+Astragalus+and+Dengzhan+Asarum+based+on+the+Nrf2%2FHO-1+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Clinics+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Study on the oxidative damage of PC12 cells with hypoxia and hypoglycemia based on the combination of Astragalus and Dengzhan Asarum based on the Nrf2/HO-1 pathway.</a> Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 38 (2), 159-164 (2022).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia, Dengzhan Asarum Granules. Volume I. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=f27dcefa69</a> 924(2020).</li>
<li>Chinese Pharmacopoeia, Astragalus granules. Volume I. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8">https://db.ouryao.com/yd2020/view.php?id=fbcd0a8bf8</a> 1592(2020).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-linoleyltyrosine+protects+PC12+cells+against+oxidative+damage+via+autophagy%3A+Possible+involvement+of+CB1+receptor+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">N-linoleyltyrosine protects PC12 cells against oxidative damage via autophagy: Possible involvement of CB1 receptor regulation.</a> International Journal of Molecular Medicine. 46 (5), 1827-1837 (2020).</li>
<li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gab1+regulates+SDF-1-induced+progression+via+inhibition+of+apoptosis+pathway+induced+by+PI3K%2FAKT%2FBcl-2%2FBAX+pathway+in+human+chondrosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Tumor+Biology%22%5BJournal%5D)">Gab1 regulates SDF-1-induced progression via inhibition of apoptosis pathway induced by PI3K/AKT/Bcl-2/BAX pathway in human chondrosarcoma.</a> Tumor Biology. 37 (1), 1141-1149 (2016).</li>
<li>Meng, M., Zhang, L., Ai, D., Wu, H., Peng, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%CE%B2-Asarone+ameliorates+%CE%B2-Amyloid-induced+neurotoxicity+in+PC12+cells+by+activating+P13K%2FAkt%2FNrf2+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">β-Asarone ameliorates β-Amyloid-induced neurotoxicity in PC12 cells by activating P13K/Akt/Nrf2 signaling pathway.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 659955(2021).</li>
<li>Li, J., Chen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+treatment+of+chronic+cerebral+ischemia+with+traditional+Chinese+and+western+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Xinjiang+Journal+of+Traditional+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Advances in the treatment of chronic cerebral ischemia with traditional Chinese and western medicine.</a> Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine. 39 (3), 115-118 (2021).</li>
<li>Yu, M., Zhan, Q., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discussion+on+the+therapeutic+value+of+traditional+Chinese+medicine+on+cognitive+dysfunction+caused+by+chronic+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medicine+Modern+Distance+Education+of+China%22%5BJournal%5D)">Discussion on the therapeutic value of traditional Chinese medicine on cognitive dysfunction caused by chronic cerebral ischemia.</a> Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 11 (19), 155-157 (2013).</li>
<li>Wang, M., Liu, J., Yao, M., Ren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+research+on+pharmacological+and+neuroprotective+effects+of+traditional+Chinese+medicine+after+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Advances in research on pharmacological and neuroprotective effects of traditional Chinese medicine after cerebral ischemia.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (3), 513-517 (2020).</li>
<li>Wang, N., Sun, H., Ma, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+different+doses+of+astragalus+injection+on+neurological+rehabilitation+of+stroke+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Clinical+Rational+Drug+Use%22%5BJournal%5D)">Effects of different doses of astragalus injection on neurological rehabilitation of stroke patients.</a> Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 9 (13), 67-69 (2016).</li>
<li>Sun, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+astragalus+injection+on+apoptosis+after+cerebral+ischemia-reperfusion+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hebei+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effects of astragalus injection on apoptosis after cerebral ischemia-reperfusion in rats.</a> Hebei Medicine. 22 (7), 1147-1149 (2016).</li>
<li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengzhan+Xixin+injection+derived+from+a+traditional+Chinese+herb+Erigeron+breviscapusameliorates+cerebral+ischemia%2Freperfusion+injury+in+rats+via+modulation+of+mitophagy+and+mitochondrial+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapusameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 288, 114988(2022).</li>
<li>Liao, Y., Ni, X., Zhan, C., Cai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+research+progress+of+Dengzhanhua+preparation+in+prevention+and+treatment+of+ischemic+stroke+and+transient+ischemic+attack%5BTitle%5D)+AND+%22Guangdong+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Clinical research progress of Dengzhanhua preparation in prevention and treatment of ischemic stroke and transient ischemic attack.</a> Guangdong Medical Journal. 41 (9), 963-967 (2020).</li>
<li>Li, C., Li, J., Xu, G., Sun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+chronic+ethanol+consumption+on+apoptosis+and+autophagy+following+transient+focal+cerebral+ischemia+in+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Influence of chronic ethanol consumption on apoptosis and autophagy following transient focal cerebral ischemia in male mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 6164(2020).</li>
<li>El Khashab, I. H., Abdelsalam, R. M., Elbrairy, A. I., Attia, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chrysin+attenuates+global+cerebral+ischemic+reperfusion+injury+via+suppression+of+oxidative+stress%2C+inflammation+and+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicine+Pharmacotherapy%22%5BJournal%5D)">Chrysin attenuates global cerebral ischemic reperfusion injury via suppression of oxidative stress, inflammation and apoptosis.</a> Biomedicine Pharmacotherapy. 112, 108619(2019).</li>
<li>Su, X., He, S., Chen, Z., Xie, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+breviscapine+aglycone+on+PI+3+K%2FAkt+conduction+pathway+in+neonatal+rats+with+hypoxic-ischemic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Armed+Police+Logistics+College+%28Medical+Edition%29%22%5BJournal%5D)">Effect of breviscapine aglycone on PI 3 K/Akt conduction pathway in neonatal rats with hypoxic-ischemic brain injury.</a> Journal of Armed Police Logistics College (Medical Edition). 27 (2), 93-96 (2018).</li>
<li>Wang, X., Shi, C., Pan, H., Meng, X., Ji, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-22+exerts+its+neuroprotective+and+angiogenic+functions+via+regulating+PI3K%2FAkt+signaling+pathway+in+cerebral+ischemia-reperfusion+rats%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neural+Transmission%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-22 exerts its neuroprotective and angiogenic functions via regulating PI3K/Akt signaling pathway in cerebral ischemia-reperfusion rats).</a> Journal of Neural Transmission. 127 (1), 35-44 (2020).</li>
<li>Luca, M., Luca, A., Calandra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+oxidative+damage+in+the+pathogenesis+and+progression+of+alzheimer%27s+disease+and+vascular+dementia%5BTitle%5D)+AND+%22Oxidative+Medicine+and+Cellular+Longevity%22%5BJournal%5D)">The role of oxidative damage in the pathogenesis and progression of alzheimer's disease and vascular dementia.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2015, 504678(2015).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lupeol+alleviates+cerebral+ischemia-reperfusion+injury+in+correlation+with+modulation+of+PI3K%2FAkt+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychiatric+Disease+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Lupeol alleviates cerebral ischemia-reperfusion injury in correlation with modulation of PI3K/Akt pathway.</a> Neuropsychiatric Disease and Treatment. 16 (8), 1381-1390 (2020).</li>
<li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+phosphocreatine+on+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction+induced+apoptosis+in+vitro+and+in+vivo%3A+Involvement+of+dual+PI3K%2FAkt+and+Nrf2%2FHO-1+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Free+Radical+Biology+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of phosphocreatine on oxidative stress and mitochondrial dysfunction induced apoptosis in vitro and in vivo: Involvement of dual PI3K/Akt and Nrf2/HO-1 pathways.</a> Free Radical Biology and Medicine. 120, 228-238 (2018).</li>
<li>Muñoz-Sánchez, J., Chánez-Cárdenas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+cobalt+chloride+as+a+chemical+hypoxia+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">The use of cobalt chloride as a chemical hypoxia model.</a> Journal of Applied Toxicology. 39 (4), 556-570 (2019).</li>
<li>Tang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salidroside+attenuates+CoCl2-simulated+hypoxia+injury+in+PC12+cells+partly+by+mitochondrial+protection%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection.</a> European Journal of Pharmacology. 912 (10), 174617(2021).</li>
<li>Yin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+potency+of+Tofu+bio-processed+using+Actinomucor+elegans+against+hypoxic+injury+induced+by+cobalt+chloride+in+PC12+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective potency of Tofu bio-processed using Actinomucor elegans against hypoxic injury induced by cobalt chloride in PC12 cells.</a> Molecules. 26 (10), 2983(2021).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Ainda há carência de medicamentos ideais para o tratamento da isquemia cerebral na prática clínica moderna2. Sob a orientação da suplementação de qi e ativação do método de circulação sanguínea, Ast, Eri e outras preparações têm sido utilizadas em combinação na prática clínica da MTC e têm alcançado boas vantagens abrangentes13,14,15. Um grande número de estudos tem demonstrado que o Ast pode melhorar a p...

A isquemia cerebral crônica, causada por hipoperfusão cerebral, é uma doença comum em pessoas de meia-idade e idosos1. Como uma doença de isquemia oculta a longo prazo, pode levar a disfunção neurológica progressiva ou persistente. Os principais mecanismos patológicos incluem apoptose celular e dano oxidativo, levando a disfunção neurológica progressiva ou persistente; esta é a base patológica da doença de Alzheimer, demência vascular e outras doenças, e afeta seriamente a qualidade de vida dos pacientes. No entanto, ainda há uma falta de drogas ideais na medicina moderna para tratar a isquemia cerebral crônica2. Ao mesmo tempo, a combinação de Astragalus mongholicus (Ast) e Erigeron breviscapus (Eri) tem sido amplamente utilizada na prática clínica da medicina tradicional chinesa (MTC)4. A estratégia de combinação melhorou notavelmente na promoção da recuperação da função nervosa após isquemia cerebral, que é melhor do que a de uma única droga; no entanto, existem grandes diferenças na razão de dosagem na combinação das duas drogas4. Os componentes efetivos e o mecanismo de ação não estão bem definidos, o que é a questão-chave que restringe sua aplicação clínica.
Estudos anteriores demonstraram o efeito sinérgico da combinação de preparação da injeção de Ast e da injeção de Eri no tratamento da isquemia cerebral em ratos. Pode regular positivamente a expressão da proteína p-Akt e regular negativamente a expressão da proteína promotora de morte associada (TAB)Bcl-2 5,6, que é uma das proteínas da família do linfoblastoma B 2 (Bcl-2) e tem o efeito de promover a apoptose. No entanto, a base material e o mecanismo de seu efeito sinérgico não são claros. Além disso, o modelo de lesão de células PC12 foi estabelecido com o meio combinado livre de glicose CoCl2, e a combinação ótima de componentes em Ast e Eri foi rastreada e definida7.
Neste estudo, as doses efetivas de Ast e Eri são rastreadas usando o modelo de célula PC12 lesionado. A combinação ideal das duas drogas é rastreada usando este modelo combinado com o método de design homogêneo. O modelo celular é usado para avaliar melhor a diferença nos efeitos e mecanismos da combinação de preparação e da combinação de componentes em células PC12 lesadas. Esta estratégia visa explorar o efeito protetor e o mecanismo regulador dos dois tipos de combinações em células PC12 lesadas através da via de sinal PI3K/Akt/Nrf2 para determinar o melhor modo de combinação. Este estudo fornece uma referência para otimizar o melhor modo de aplicação do TCM.

<table><tbody><tr><td>Gabinete de biossegurança classe II da série 1300</td><td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td><td>1374</td><td></td></tr><tr><td>Brometo de 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio</td><td>Guangzhou saiguo biotech Company</td><td>1334GR001</td><td>MTT</td></tr><tr><td>ACEA NovoExpress&nbsp; 1.4.0</td><td>ACEA Biosciences,</td> <td>Inc-Akt</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>10176-2-AP</td><td></td></tr><tr><td>Citometria de fluxo analítica</td><td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td><td>62-2-1810-1027-0</td><td></td></tr><tr><td>Kit de detecção de apoptose Annexin V-FITC</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>C1062L</td><td></td></tr><tr><td>Injeção de astrágalo</td><td>Heilongjiang Zhenbao Island Pharmaceutical Company</td><td>A03190612144</td><td>injeção de Ast</td></tr><tr><td>Astragaloside A</td><td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td><td>84687-43-4</td><td></td></tr><tr><td>Bax</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>60267-1-Ig</td><td></td></tr><tr><td>Kit de quantificação de proteína BCA</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>P0012</td><td></td></tr><tr><td>Bcl-2</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>26593-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Incubadoras de dióxido de carbono</td><td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td><td>0816-2014</td><td></td></tr><tr><td>Caspase-3</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>19677-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorogênico</td><td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td><td>327-97-9</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de cobalto hexahidratado</td><td>Merck Biotechnology, Inc.</td><td>7791-13-1</td><td>CoCl2</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Guangzhou saiguo biotech Company</td><td>2020112701</td><td>DMSO</td></tr><tr><td>Hidrogenofosfato dissódico dodecahidratado</td><td>Chengdu Kolon Chemical Company</td><td>2020090101</td><td></td></tr><tr><td>DMEM alto teor de açúcar médio</td><td>Thermo scientific Hyclone</td><td>2110050</td><td></td></tr><tr><td>DMEM meio sem açúcar</td><td>Beijing Solarbio life sciences Company</td><td></td><td></td>2029548</tr><tr><td>ECL fluido luminoso</td><td>Lianshuo Biological Company</td><td>WBKLS0500</td><td></td></tr><tr><td>Balança eletrônica</td><td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Xangai, China</td><td>FA1204</td><td></td></tr><tr><td>Instrumento de eletroforese</td><td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1658026</td><td></td></tr><tr><td>Erigeron breviscapus cápsula</td><td>Yunnan Biogu Pharmaceutical Company</td><td>Cápsula Z53021671</td><td>Eri</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Instituto de Engenharia Biológica Four Seasons de Engenharia Biológica</td><td>20210402</td><td>FBS</td></tr><tr><td>Microscópio fluorescente</td><td>Olympms Corporation</td><td>IX71-F32PH</td><td></td></tr><tr><td>Gerador de imagens em gel</td><td>Bio-Rad Laboratories (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1708265</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário anti-rato de cabra</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>SA00001-1</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário anti-coelho de cabra</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>SA00001- 2</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS Statistics versão 26.0</td><td></td> <td>International Business Machines Corporation, USA-ImageJ</td><td></td></tr> <tr><td>1.8.0</td><td>National Institutes of Health, USA-software de</td><td></td> <td>imagem</td></tr><tr><td>Immunol&nbsp; fluorescência&nbsp; kit de coloração</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>P0196</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Chengdu Kolon Chemical Company</td><td>2021070901</td><td></td></tr><tr><td>Marcador</td><td>Thermo Fisher Scientific Instruments Company</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas</td><td>Perkin Elmer Corporate Management (Shanghai) Co.</td><td></td><td></td>HH35L2018296</tr><tr><td>Motic microscópio invertido</td><td>Nanda Scientific Instruments Co.</td><td></td><td></td>AE2000LED</tr><tr><td>NaCl</td><td>Chengdu Kolon Chemical Company</td><td>2014081301</td><td></td></tr><tr><td>Leite desnatado</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>P0216</td><td></td></tr><tr><td>Nrf2</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>16396-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>P-Akt</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>66444-1-Ig</td><td></td></tr><tr><td>PC12 células</td> Academia <td>Chinesa de Ciências</td><td></td><td></td>CBP60430</tr><tr><td>Solução de penicilina-estreptomicina</td><td>Thermo scientific Hyclone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Mistura de inibidores de protease de fosfatase</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>P1045</td><td></td></tr><tr><td>Di-hidrogenofosfato de potássio</td><td>Chengdu Kolon Chemical Company</td><td>2015082901</td><td></td></tr><tr><td>Kit de ensaio de espécies reativas de oxigênio</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>Solução de lise S0033S</td><td></td></tr><tr><td>RI-PA</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>P0013B</td><td></td></tr><tr><td>Scutellarin</td><td>Chongqing Gao Ren Biotechnology Company</td><td>27740-01-8</td><td></td></tr><tr><td>Tampão de carregamento de amostras SDS-PAGE, 5x</td><td>Beyotime Biotechnology Company</td><td>P0015L</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de filtro estéreis (0,22 &micro; m)</td> <td>Merck Biotecnologia, Inc.</td><td></td><td></td>SLGP033RB</tr><tr><td>Tris-base</td><td>Guangzhou saiguo biotech Company</td><td>1115GR500&nbsp;</td><td>Tbs</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Thermo científico Hyclone</td><td>J190013</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Chengdu Kolon Chemical Company</td><td>2021051301</td><td></td></tr><tr><td>oscilador de vórtice</td><td>OHAUS International Co., Ltd., Xangai, China</td><td>VXMNAL</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-actina</td><td>Wuhan Three Eagles Proteintech Group, Inc</td><td>66009-1-IG</td><td></td></tr></tbody></table>

explorando a estratégia de combinação de duas ervas para tratar células pc12 lesadas

Exploring the Two Herb Combination Strategy to Treat Injured PC12 Cells

Tendo em vista as vantagens da combinação da medicina tradicional chinesa (MTC) no tratamento da isquemia cerebral, estudamos as diferenças na eficácia e no mecanismo entre a combinação de preparação e a combinação de componentes, a fim de explorar a estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas. O cloreto de cobalto (CoCl2) combinado com um meio livre de glicose foi empregado para induzir danos oxidativos das células PC12. Em seguida, a combinação ideal de Astragalus mongholicus (Ast) e Erigeron breviscapus (Eri) foi selecionada e combinada seguindo métodos de design uniformes após a triagem de sua concentração segura e eficaz em células PC12. Além disso, a combinação de componentes rastreados compreende 10 μM de astragalosídeo A, 40 μM de escutelarina e 75 μM de ácido clorogênico em duas ervas. Em seguida, MTT, anexina V-FITC/PI, imunofluorescência e Western blot foram utilizados para avaliar a eficácia e o mecanismo da combinação de preparação e da combinação de componentes em células PC12 lesadas. Os resultados mostraram que a combinação de preparação ideal para a pró-sobrevivência celular foi a injeção de Ast e a cápsula de Eri com uma concentração de 6:1,8 (μM). A combinação de componentes (10 μM de astragalosídeo A, 40 μM de escutelarina e 75 μM de ácido clorogênico) foi mais eficaz do que a combinação de preparação. Ambas as combinações reduziram notavelmente a taxa apoptótica, a intensidade de fluorescência da caspase-3 e o nível de espécies reativas de oxigênio (EROs) intracelular; enquanto isso, eles regularam positivamente os níveis de expressão de p-Akt/Akt, Bcl-2/Bax e Nrf2. Esses efeitos foram mais evidentes na combinação de componentes. Em conclusão, ambas as combinações podem inibir a lesão induzida pela CoCl2 combinada com um meio livre de glicose nas células PC12, promovendo assim a sobrevivência celular. No entanto, a eficiência da combinação de componentes sobre a combinação de preparação pode ser devida à sua regulação mais forte da via de sinalização PI3K/Akt/Nrf2 relacionada ao estresse oxidativo e à apoptose.

A triagem da combinação ideal de injeção de Ast e cápsula de Eri é mostrada na Figura 1. A taxa de sobrevivência celular da injeção de Ast e da cápsula de Eri nas células PC12 normais é mostrada na Figura 1A. A viabilidade celular foi inferior a 95% com injeção de Ast em concentrações superiores a 12 μM (Figura 1A) e cápsula de Eri em concentrações superiores a 5 μM (Figura 1A), indicando que a concentração máxima não tóxica foi de ...

Este protocolo fornece uma estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas. O protocolo fornece uma referência para otimizar o melhor modo de aplicação da medicina tradicional chinesa (MTC).

Explorando a estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas

In view of the advantages of the combination of traditional Chinese medicine (TCM) in the treatment of cerebral ischemia, we studied the differences in ...

O protocolo neste estudo fornece uma estratégia de combinação de duas ervas para o tratamento de células PC12 danificadas por hipóxia e uma referência para otimizar o melhor modo de combinação de ervas. Esta técnica pode fornecer um método experimental in vitro simples, confiável e eficiente para rastrear a combinação eficaz de ingredientes de ervas contra células hipóxicas. Essa estratégia também pode ser aplicada para rastrear as combinações de componentes contra células hipóxias de outras combinações de preparação de ervas e ilustrar seu mecanismo de proteção.Para começar, sub-cultura das células PC12 a cada dois a três dias a 37 graus Celsius em uma incubadora suplementada com 5% de dióxido de carbono para obter uma passagem de 4 a 8 para todos os experimentos subsequentes. Trate 70 a 80% de células PC12 confluentes com um mililitro de 0,25% de tripsina e observe as células sob um microscópio para descolamento celular. Em seguida, pare a digestão da tripsina adicionando três mililitros do meio completo.Gire as células transferidas em um tubo de centrífuga de 15 mililitros a 840 x g por cinco minutos. Depois de descartar o sobrenadante, ressuscite o pellet celular com o meio com

exploring-two-herb-combination-strategy-to-treat-injured-pc12

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JoVE Journal

Medicine

Medicina

Lesão traumática da medula espinhal interrompe a comunicação com o cérebro. Para restaurar a conectividade perdida nós utilizamos um enxerto de nervo periférico para fornecer um substrato de fibras em regeneração em combinação com fatores neurotróficos e matriz de modulador enzimas para remover moléculas inibidoras para promover o crescimento de longa distância.

Combinando nervos periféricos Enxertia e Modulação Matrix reparar o cabo de Rat feridos Spinal

Plasticidade neuronal é uma característica cada vez mais reconhecida, mas não suficientemente entendido do gastrointestinal (GI). Aqui, no exemplo de desordens pancreáticas humanas, apresentamos um ensaio neuroplasticidade in vitro para o estudo da plasticidade neuronal no tracto gastrointestinal, a nível tanto morfológica e funcional.

Simulando pâncreas Neuroplasticidade:<em&gt; In Vitro</em&gt; Dual-neurônio Plasticidade Assay

A lesão medular é uma condição traumática que causa grave morbidade e mortalidade elevada. Neste trabalho, descrever em detalhes um modelo contusão de lesão medular em ratos, seguido por um transplante de células-tronco neurais.

Neural Stem Cell Transplantation em Experimental contusão Model of Spinal Cord Injury

Em organismos multicelulares, os fatores solúveis secretados provocam respostas de diferentes tipos de células como resultado da sinalização parácrina. Os sistemas de co-cultura de inserção oferecem uma maneira simples de avaliar as mudanças mediadas por fatores solúveis secretados na ausência de contato célula-célula.

Desenvolvimento de um Sistema Insert Co-cultura de dois tipos celulares na ausência de célula-célula Contact

Nós fornecemos os protocolos para avaliação de células-tronco mesenquimais isoladas de polpa dentária e interações de células de câncer de próstata baseadas em métodos diretos e indiretos co-cultura. Médio de condição e membranas de trans-bem são apropriadas analisar a atividade indireta parácrina. Semeando diferencialmente manchado células juntos é um modelo adequado para a interação célula-célula direto.

Isolamento de células-tronco mesenquimais de tecido pulpar e co-cultura com células cancerosas para estudar suas interações

Neste protocolo, podemos demonstrar e elaborar sobre como usar células-tronco pluripotentes induzidas por humanos para diferenciação e purificação de cardiomiócitos, e ainda, sobre como melhorar sua eficiência de transplante com inibidor de proteína quinase associada a Rho pré-tratamento em um modelo de infarto do miocárdio do camundongo.

Melhorar o Engraftment de cardiomiócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por uma inibição transitória da atividade da Rho kinase

Este protocolo demonstra as metodologias para um modelo do rato do ferimento de cérebro traumático do abrir-crânio e a transplantação de pilhas células-derivadas pluripotentes induzidas humanas cultivadas no local da lesão. Os testes comportamentais e histologic dos resultados destes procedimentos são descritos igualmente em breve.

Modelo de impacto cortical controlado da lesão cerebral do rato com transplantação terapêutica de células neurais pluripotentes induzidas humanas da pilha de haste

Aqui, apresentamos um protocolo para aplicação de campo elétrico de pulso de nanossegundos (nsPEF) para estimular células de Schwann in vitro. A capacidade de síntese e secreção de fatores relevantes e alterações no comportamento celular validaram o sucesso da estimulação usando nsPEF. O estudo dá uma visão positiva do método de regeneração de nervos periféricos.

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Neste estudo, foram desenvolvidos e caracterizados hidrogéis compostos miméticos de nervos que podem ser utilizados para investigar e capitalizar o comportamento pró-regenerativo de células-tronco derivadas do tecido adiposo para reparo de lesões medulares.

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Estratégia de genética molecular para encontrar mutações de novo causando doenças comuns, tais como autismo e esquizofrenia.

A estratégia para identificar mutações de novo em Distúrbios comuns, tais como autismo e esquizofrenia

Aprenda uma estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas por hipóxia. Este método simples e eficiente otimiza aplicações de medicina tradicional chinesa em pesquisas de neurociência.

Explorando a estratégia de combinação de duas ervas para tratar células PC12 lesadas

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