Name: Monitoramento Contínuo Simples de Glicose em Camundongos em Movimento Livre (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-24T13:35:00.000+00:00
Duration: 3 min 25 s
Description: Aprenda um método simples de monitoramento contínuo de glicose em camundongos livres, sem cirurgia complexa ou sangramento. Ideal para estudar fenótipos metabólicos em modelos de obesidade e diabetes.

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Agradecemos a Dvir Mintz DVM e ao pessoal veterinário e de criação do biotério, bem como aos membros do nosso grupo, pelas discussões frutíferas. Este estudo foi apoiado por uma bolsa 1541/21 da Israel Science Foundation concedida a D.B.Z. D.B.Z. é uma faculdade de STEM Zuckerman.

Os experimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da Universidade Hebraica.
NOTA: Todas as ferramentas devem ser esterilizadas, e o manuseio da cânula deve ser realizado usando uma técnica estéril. O protocolo abaixo é ajustado para uma CGM específica. O protocolo pode ser adaptado para outras CGMs.
1. Administração de analgésicos antes do procedimento
<ol><li>Administrar dextrose a 5% e solução salina a 0,45% com meloxicam na dose de 5 mg/kg de peso corporal por via subcutânea.</li>
</ol>2. Administração da anestesia
<ol><li>Coloque o rato na câmara de indução, fechando bem a tampa. Ajustar a indução anestésica na câmara de indução com isoflurano a 3% a um fluxo de 500 mL/min.</li>
	<li>Quando o mouse não responder, remova o mouse da câmara e encaixe o cone do nariz no mouse. Confirme o nível de anestesia com uma pinça interdigital. Ajuste a concentração para 1%-1,5% de isoflurano e a taxa de fluxo para 100 mL/min em um camundongo pesando 30 g.</li>
	<li>Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento durante a anestesia.</li>
</ol>3. Preparação do sensor
<ol><li>Monte o sensor no dispositivo de montagem do sensor para expor a fita e o lado da cânula do sensor (Figura 1A). Tenha cuidado, pois a agulha é inserida na cânula e exposta.</li>
	<li>Sutura de dois pontos de conicidade 5-0 na fita em ambos os lados da cânula (Figura 1A).</li>
</ol>4. Depilação e desinfecção
<ol><li>Faça a barba de aproximadamente 4 cm x 4 cm na linha média da parte de trás do mouse.</li>
	<li>Administre um creme depilatório na área raspada para garantir a depilação completa.</li>
	<li>Limpe a pele e desinfete-a com uma solução antisséptica contendo gluconato de clorexidina a 2% e álcool isopropílico a 70%.</li>
</ol>5. Preparo da pele dorsal
<ol><li>Fazer uma incisão de 2 mm no centro da área raspada acima da coluna vertebral com uma tesoura afiada (Figura 1B).</li>
	<li>Resumidamente, insira pequenas pinças com uma borda romba sob a pele para formar uma pequena bolsa subcutânea para que a cânula possa ser inserida facilmente na loja subcutânea (Figura 1B).</li>
	<li>Passar uma sutura do passo 3.2 através da pele de cada lado da incisão (Figura 1C).</li>
</ol>6. Inserção do sensor
<ol><li>Remova completamente o sensor do dispositivo de montagem do sensor (a cânula está vazia da agulha) e segure o sensor com pinça para evitar que a fita circundante grude em si mesma.</li>
	<li>Introduza cuidadosamente a cânula na bolsa subcutânea.</li>
	<li>Puxe as suturas de cada lado, aperte-as e amarre-as para fixar o sensor firmemente no lugar, evitando assim que a cânula escorrege para fora da bolsa subcutânea uma vez que a fita adesiva se solte com o tempo.</li>
</ol>7. Fixação e sutura do sensor
<ol><li>Fixe o sensor firmemente na parte de trás amarrando as suturas internas e usando a fita adesiva ao redor do sensor.</li>
	<li>Realizar oito suturas descontínuas ao redor do sensor, fixando a borda da fita métrica do sensor à pele (Figura 1D).</li>
</ol>8. Ativação do leitor
<ol><li>Depois que o sensor tiver sido inserido, ative o leitor ligando-o, pressionando Start New Sensor e deslizando o sensor de acordo com as instruções do fabricante.</li>
	<li>A primeira leitura só pode ser feita alguns minutos após a instalação do CGM. No caso desta CGM, a primeira leitura pode ser feita após 60 min.</li>
</ol>9. Resultados da leitura
<ol><li>Coloque o leitor perto do mouse (não há necessidade de tocá-lo). Todos os dados armazenados no sensor são transmitidos ao leitor. Observação : diferentes dispositivos CGM podem diferir no período de capacidade de salvamento de dados históricos. No caso desta CGM, um máximo de 8 h pode ser armazenado entre duas leituras.</li>
</ol>10. Removendo o sensor
<ol><li>Anestesiar o rato (ver secção 2).</li>
	<li>Corte as suturas que conectam o sensor à parte de trás do mouse usando uma tesoura afiada.</li>
	<li>Retire e corte as suturas na incisão, removendo suavemente o sensor.</li>
	<li>Se necessário, use uma única sutura para fechar a incisão no dorso do mouse.</li>
</ol>11. Análise dos dados
<ol><li>Download de dados: Faça o download dos dados de acordo com as instruções fornecidas pelo fabricante do CGM. Observação : cada CGM tem um formato diferente, que pode ou não ser facilmente acessível para o usuário. Essa é uma consideração importante na escolha do CGM.</li>
	<li>Para análise com o software fornecido, formate os dados de acordo com as instruções no arquivo readme no Github (https://github.com/mika-littor/CGM-in-Mice-Analysis.git).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64743/64743fig01.jpg"> Figura 1: Fixação do sensor ao mouse . (A) Duas suturas marcadas por setas vermelhas são passadas através da fita do sensor em ambos os lados da cânula na face inferior do sensor CGM, marcada por uma seta branca. (B) Uma pequena incisão de 2 mm é feita no centro da área raspada ao longo da coluna vertebral usando uma tesoura afiada. Pequenas pinças com borda romba são brevemente inseridas sob a pele para formar uma pequena bolsa subcutânea para que a cânula possa ser inserida por via subcutânea. (C) As mesmas suturas de A são passadas subcutaneamente em cada lado da incisão. As setas vermelhas marcam as suturas fixadas ao sensor como em A, as setas azuis marcam o local pelo qual as suturas passaram até a pele na parte de trás do mouse e a seta preta mostra a incisão. (D) Após a inserção da cânula, as suturas internas são apertadas e amarradas próximas à incisão para fixar a CGM. O sensor é então suturado à pele. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64743/64743fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<ol><li>Polonsky, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+past+200+years+in+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The past 200 years in diabetes.</a> New England Journal of Medicine. 367 (14), 1332-1340 (2012).</li>
<li>Rees, D. A., Alcolado, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Animal models of diabetes mellitus.</a> Diabetic Medicine. 22 (4), 359-370 (2005).</li>
<li>Pearson, J. A., Wong, F. S., Wen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+non-obese+diabetic+%28NOD%29+mouse+model+in+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">The importance of the non-obese diabetic (NOD) mouse model in autoimmune diabetes.</a> Journal of Autoimmunity. 66, 76-88 (2016).</li>
<li>Heydemann, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+of+murine+high+fat+diet+as+a+model+for+Type+2+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Diabetes+Research%22%5BJournal%5D)">An overview of murine high fat diet as a model for Type 2 diabetes mellitus.</a> Journal of Diabetes Research. 2016, 2902351(2016).</li>
<li>Kennard, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+mice+in+diabetes+research%3A+The+impact+of+experimental+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetic+Medicine%22%5BJournal%5D)">The use of mice in diabetes research: The impact of experimental protocols.</a> Diabetic Medicine. 38 (12), 14705(2021).</li>
<li>Klueh, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+glucose+monitoring+in+normal+mice+and+mice+with+prediabetes+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Technology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Continuous glucose monitoring in normal mice and mice with prediabetes and diabetes.</a> Diabetes Technology and Therapeutics. 8 (3), 402-412 (2006).</li>
<li>Wuyts, C., Simoens, C., Pinto, S., Philippaert, K., Vennekens, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+glucose+monitoring+during+pregnancy+in+healthy+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Continuous glucose monitoring during pregnancy in healthy mice.</a> Scientific Reports. 11, 4450(2021).</li>
<li>Korstanje, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+glucose+monitoring+in+female+NOD+mice+reveals+daily+rhythms+and+a+negative+correlation+with+body+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Continuous glucose monitoring in female NOD mice reveals daily rhythms and a negative correlation with body temperature.</a> Endocrinology. 158 (9), 2707-2712 (2017).</li>
<li>Han, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+of+glycemic+control+in+the+mouse%3A+Comparisons+of+6-h-and+overnight-fasted+blood+glucoses+to+Hb+A1c%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Endocrinology+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Markers of glycemic control in the mouse: Comparisons of 6-h-and overnight-fasted blood glucoses to Hb A1c.</a> American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 295 (4), 981-986 (2008).</li>
<li>Xie, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+measurement+noise+in+a+continuous+glucose+monitor+by+coating+the+sensor+with+a+zwitterionic+polymer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Reduction of measurement noise in a continuous glucose monitor by coating the sensor with a zwitterionic polymer.</a> Nature Biomedical Engineering. 2 (12), 894-906 (2018).</li>
<li>Van Der Meulen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Urocortin3+mediates+somatostatin-dependent+negative+feedback+control+of+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Urocortin3 mediates somatostatin-dependent negative feedback control of insulin secretion.</a> Nature Medicine. 21 (7), 769-776 (2015).</li>
<li>Peterson, Q. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+generation+of+human+stem+cell-derived+alpha+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A method for the generation of human stem cell-derived alpha cells.</a> Nature Communications. 11, 2241(2020).</li>
<li>Klueh, U., Liu, Z., Feldman, B., Kreutzer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interstitial+fluid+physiology+as+it+relates+to+glucose+monitoring+technologies%3A+Importance+of+Interleukin-1+and+Interleukin-1+receptor+antagonist+in+short-term+glucose+sensor+function+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Diabetes+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Interstitial fluid physiology as it relates to glucose monitoring technologies: Importance of Interleukin-1 and Interleukin-1 receptor antagonist in short-term glucose sensor function in vivo.</a> Journal of Diabetes Science and Technology. 4 (5), 1073(2010).</li>
<li>Klueh, U., Antar, O., Qiao, Y., Kreutzer, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+interleukin-1%2Finterleukin-1+receptor+antagonist+family+of+cytokines+in+long-term+continuous+glucose+monitoring+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Diabetes+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Role of interleukin-1/interleukin-1 receptor antagonist family of cytokines in long-term continuous glucose monitoring in vivo.</a> Journal of Diabetes Science and Technology. 7 (6), 1538(2013).</li>
<li>Klueh, U., Kaur, M., Qiao, Y., Kreutzer, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+of+tissue+mast+cells+in+controlling+long-term+glucose+sensor+function+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Critical role of tissue mast cells in controlling long-term glucose sensor function in vivo.</a> Biomaterials. 31 (16), 4540-4551 (2010).</li>
<li>Kogot-Levin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+metabolic+reprogramming+induced+by+sodium-glucose+cotransporter+2+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Mapping the metabolic reprogramming induced by sodium-glucose cotransporter 2 inhibition.</a> JCI Insight. , 164296(2023).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Este protocolo oferece um método simples e barato para monitorar os níveis de glicose em camundongos que não requer microcirurgia desafiadora e não envolve sangramento ou manuseio dos camundongos. O método é fácil de implementar em todas as instalações e não causa mortalidade, dor ou desconforto excessivo aos camundongos. A etapa mais crítica do protocolo é inserir a cânula do sensor de glicose sob a pele do camundongo. A adição de algumas suturas permite que a cânula permaneça no local por mais tempo. Os sensores são pe...

O diabetes mellitus (DM) é uma doença devastadora caracterizada por níveis elevados de glicose no sangue. O DM tipo 1 pode ser resultado de um ataque autoimune às células beta produtoras de insulina no pâncreas. Já o DM tipo 2 e o DM gestacional são caracterizados pela falha das células beta em secretar insulina suficiente em resposta ao aumento dos níveis glicêmicos1. O camundongo é um organismo modelo comum usado para estudar o DM, uma vez que tem fisiologia semelhante, e seus níveis normais de glicose são próximos aos dos seres humanos. Além disso, linhagens específicas de camundongos podem desenvolver DM devido a mutações em vias de sinalização chave ou após exposição a dietas específicas, o que permite a modelagem da doença 2,3,4.
A glicose no sangue é comumente medida em camundongos usando glicosímetros projetados para pacientes extraindo uma pequena gota de sangue (1-2 μL) da ponta da cauda do camundongo. Esse método causa estresse e requer o manuseio do camundongo, o que afeta os níveis de glicose e proíbe a medição dos níveis de glicose no sangue em camundongos de comportamento livre ou quando o pesquisador não está perto de5. Sangrar os camundongos pode causar estresse em camundongos próximos, particularmente em camundongos da mesma gaiola cuja glicemia ainda não foi medida, afetando os resultados. Os ratos respondem de forma diferente dependendo do manipulador, e a pessoa que mede a glicose pode afetar os níveis de glicose dos camundongos. Essas armadilhas exigem um planejamento experimental cuidadoso e estão na base de algumas inconsistências entre os experimentos.
É possível medir a glicose em camundongos em movimento livre sem sangramento implantando sensores de glicose no arco aórtico dos camundongos usando telemetria de última geração6. As medições resultantes são muito boas e podem ser sustentadas por um longo período, mas é um desafio implantar esses sensores, e o sistema de telemetria é caro, levando a uma adoção moderada dessa metodologia e não adoção em laboratórios não especializados. Sensores de glicose subcutâneos ou outros adaptados às dimensões dos camundongos e sua fisiologia têm sido desenvolvidos nos últimos anos, mas estes novamente requerem especialistas altamente qualificados e, em alguns casos, são dispendiosos 6,7,8,9,10.
Monitores comerciais contínuos de glicose (MCG) que foram originalmente desenvolvidos para monitorar os níveis de glicose de pacientes com DM oferecem outra opção para medir a glicose em camundongos em movimento livre, com menor custo e requisitos de conhecimento técnico do que as sondas implantadas. Tais sondas têm sido utilizadas em pesquisa básica por alguns laboratórios5,11,12,13,14,15, incluindo nossos colegas que utilizaram esseprotocolo16. Esses dispositivos geralmente incluem um sensor, um dispositivo de montagem, um receptor e um aplicativo de software. O sensor tem uma cânula que guia o glicossensor enzimático, fita adesiva, uma fonte de energia, memória de curto prazo e um módulo de comunicação sem fio que armazena e envia os dados para o receptor. O receptor pode mostrar os níveis de glicose atuais e envia os dados para um servidor; Esse receptor pode ser um celular. O aplicativo de software fornece dados para o paciente e a equipe de atendimento médico sobre a glicemia do paciente. Em pacientes, o sensor é acoplado facilmente usando o dispositivo de montagem. A cânula é inserida subcutaneamente pressionando o dispositivo de montagem contra a pele, e o sensor permanece no lugar com a ajuda de fita adesiva.
Este é um protocolo detalhado para adaptar um dispositivo CGM comercial para medir os níveis de glicose em camundongos. Este protocolo descreve como inserir cirurgicamente o sensor de glicose e conectá-lo ao mouse. Scripts para análise básica de dados e visualização de dados são fornecidos. As possíveis armadilhas, solução de problemas e exemplos de resultados padrão são fornecidos. O protocolo abaixo é específico para um determinado CGM, mas pode ser facilmente adaptado a outros tipos de CGMs comerciais à medida que se tornam disponíveis.

<table><tbody><tr><td>2%&nbsp; Gluconato de clorexidina e 70%&nbsp; Álcool Isopropílico</td><td>3M</td><td>ID&nbsp; </td><td></td>7000136290</tr><tr><td>Injeção de Dextrose a 5% e Cloreto de Sódio a 0,45%, Porta-agulhas USP</td><td>Braun</td><td>L6120</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo</td><td>FST</td><td>12061-02</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Bonn Extra Fina</td><td>FST</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>FreeStyle Libre 1 leitor</td><td>Abbott</td><td>ART27543&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sensor FreeStyle Libre</td><td>Abbott</td><td>ART36687</td><td></td></tr><tr><td>Aplicador de sensor FreeStyle Libre</td><td>Abbott</td><td>ART36787</td><td></td></tr><tr><td>Compressas de gaze</td><td>Sion medical</td><td>PC912017</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Fórceps</td><td>FST</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Creme Depilatório</td><td>Veet</td><td>3116523</td><td></td></tr><tr><td>Dieta rica em gordura e rica em sacarose</td><td>Envigo Teklad dietas</td><td>TD.08811</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano, USP Terrell</td><td>Piramal</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>Meloxicam 5 mg / mL</td><td>Chanelle Pharma</td><td>08749/5024</td><td></td></tr><tr><td>MiniARCO Clipper kit</td><td>Moser</td><td>CL8787-KIT</td><td></td></tr><tr><td>PROLENE Polipropileno Sutura 5-0</td><td>Ethicon</td><td>8725H</td><td></td></tr><tr><td>Puralube Pomada Oftálmica</td><td>Perrigo</td><td>574402511</td><td></td></tr><tr><td>Cotonetes&nbsp;</td><td>Sistema</td> de anestesia de baixo fluxo <td>BHW 271676</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO</td><td></td></tr></tbody></table>

monitoramento contínuo simples de glicose em camundongos em movimento livre

Simple Continuous Glucose Monitoring in Freely Moving Mice

Camundongos são um organismo modelo comum usado para estudar doenças metabólicas, como diabetes mellitus. Os níveis de glicose são tipicamente medidos por sangramento de cauda, que requer o manuseio dos camundongos, causa estresse e não fornece dados sobre camundongos que se comportam livremente durante o ciclo escuro. A medição contínua de glicose de última geração em camundongos requer a inserção de uma sonda no arco aórtico do camundongo, bem como um sistema de telemetria especializado. Esse método desafiador e caro não tem sido adotado pela maioria dos laboratórios. Aqui, apresentamos um protocolo simples envolvendo a utilização de monitores contínuos de glicose disponíveis comercialmente usados por milhões de pacientes para medir a glicose continuamente em camundongos como parte da pesquisa básica. A sonda de detecção de glicose é inserida no espaço subcutâneo na parte de trás do mouse através de uma pequena incisão na pele e é mantida firmemente no lugar usando um par de suturas. O dispositivo é suturado à pele do rato para garantir que permanece no lugar. O dispositivo pode medir os níveis de glicose por até 2 semanas e envia os dados para um receptor próximo sem qualquer necessidade de lidar com os ratos. São fornecidos roteiros para a análise dos dados básicos dos níveis glicêmicos registrados. Este método, desde a cirurgia até a análise computacional, é custo-efetivo e potencialmente muito útil na pesquisa metabólica.

Resultado cirúrgico Resultados de oito camundongos HSD:ICR (com 8 semanas de idade) alimentados com uma dieta rica em gordura e sacarose (HFHS) por 18 semanas e cinco camundongos HSD:ICR magros (com idade de 12 semanas) são mostrados. O dispositivo que usamos armazena dados por até 8 h. O acesso ao biotério local foi restrito das 07:00 às 19:00, proibindo a coleta de dados durante o horário tardio da noite, quando os camundongos estão ativos. Os camundongos foram, portanto, colocados em uma sala com i...

Aqui, descrevemos um método simples para implantar um monitor de glicose contínuo comercial projetado para pacientes em camundongos e fornecemos os scripts para analisar os resultados.

Monitoramento Contínuo Simples de Glicose em Camundongos em Movimento Livre

Mice are a common model organism used to study metabolic diseases such as diabetes mellitus. Glucose levels are typically measured by tail-bleeding, which ...

Nosso protocolo oferece um método simples e barato para monitorar os níveis de glicose em camundongos. A principal vantagem dessa técnica é que ela não requer microcirurgia desafiadora, e não envolve sangramento ou manuseio dos camundongos. Este método pode ser usado para identificar fenótipos elusivos de controle glicêmico em modelos murinos de obesidade e diabetes.Durante a tentativa desse protocolo, o passo mais crítico é a inserção da cânula sob a pele e o aperto das suturas internas para manter a cânula no lugar. Para começar, raspe a linha média da parte de trás do rato anestesiado e use um creme depilatório para garantir a depilação completa. Abra e carregue o sensor.Em seguida, monte o sensor no dispositivo de montagem do sensor para expor a fita e o lado da cânula do sensor. A cânula é vazia da agulha. Sutura de dois pontos de conicidade 5-0 na fita em ambos os lados da cânula.Para o preparo da pele dorsal, faça uma incisão de dois milímetros no centro da área raspada acima da coluna usando uma tesoura afiada. Insira brevemente pequenas pinças com uma borda romba sob a pele para formar uma pequena bolsa subcutânea, de modo que a cânula possa ser inserida facilmente na bols

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Research

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Biologia

O grampo hiperinsulinêmico euglicêmico-, ou clamp de insulina, é o padrão ouro para avaliar a ação da...

Hiperinsulinêmico euglicêmico-Clamps em Consciente, Ratos Unrestrained

Este vídeo apresenta como realizar um teste oral de tolerância à glicose em um camundongo de laboratório.

Teste oral de tolerância à glicose (OGTT): medindo o metabolismo da glicose em camundongos

Este vídeo demonstra um procedimento para coletar urina de camundongo e avaliar seus níveis de glicose. Para avaliar o nível de glicose, mergulhe uma tira de teste revestida com enzimas e um corante cromogênico na amostra, iniciando uma mudança de cor que indica os níveis de glicose. Para quantificar os níveis de glicose na urina, introduza uma amostra de urina em uma placa multipoços com concentrações crescentes de glicose, adicione a mistura de reação e incuba. Meça a absorbância para criar...

Ensaios para avaliação qualitativa e quantitativa das concentrações de glicose na urina de camundongos

Este vídeo demonstra o efeito da infusão contínua de drogas no cérebro do camundongo nos níveis de glicose no sangue. O metabolismo da glicose é avaliado coletando sangue da cauda de um camundongo em jejum e medindo os níveis de glicose antes e depois da administração oral de glicose. A tolerância à insulina é avaliada pela injeção de insulina no camundongo, com níveis de glicose registrados em intervalos específicos.

Avaliando o efeito da infusão contínua de drogas no cérebro de camundongos nos níveis periféricos de glicose

O objetivo deste protocolo é avaliar a pressão arterial sistêmica em camundongos conscientes em movimento livre usando dispositivos de radiotelemetria implantáveis.

Longo prazo medição de pressão arterial em ratos movimentando-se livremente utilizar telemetria

Este protocolo estuda o papel do ligante de chemokine (C-C motif) 5 (CCL5) no hipotálamo, entregando um antagonista, MetCCL5, dentro do cérebro de rato usando um sistema de infusão de cérebro de bomba micro-osmótica. Esta inibição transitória de CCL5 atividade interrompida hipotalâmica insulina sinalização, levando à intolerância à glicose e a sensibilidade periférica à insulina sistêmica.

Estudando o sinal de insulina hipotalâmico a intolerância de glicose periférica com um sistema de infusão contínua de drogas dentro do cérebro de rato

O atual artigo descreve a geração e caracterização metabólica de ratos alimentados com dieta de alto teor de gordura como um modelo de obesidade e resistência à insulina induzida pela dieta. Possui ainda mais protocolos detalhados para executar o teste de tolerância à glicose oral e o teste de tolerância à insulina, monitoramento de alterações de todo o organismo de glicose metabolismo na vivo.

Estudo do metabolismo in vivo da glicose em camundongos alimentados com dieta de alto teor em gordura usando o teste oral de tolerância à glicose (OGTT) e o teste de tolerância à insulina (ITT)

Este artigo descreve um protocolo detalhado para aumentar a concentração de glicose no líquido cefalorraquidiano (LCR) de camundongos. Esta abordagem pode ser útil para estudar os efeitos da glicose elevada no LCR sobre a neurodegeneração, cognição e metabolismo periférico da glicose em camundongos.

Implante de Minibomba Osmótica para Aumento da Concentração de Glicose no Líquido Cefalor de Camundongos

Um clamp hiperglicêmico é usado para medir a liberação de insulina com uma concentração de glicose no sangue mais alta mantida. Uma pinça hipoglicemiante serve para medir a produção de glicose induzida por respostas contra-regulatórias. Ambos os métodos utilizam o mesmo procedimento cirúrgico. Apresentamos aqui uma técnica de clamp para avaliar o metabolismo sistêmico da glicose.

Clamp hiperglicêmico e grampo hipoglicêmico em camundongos conscientes

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de camundongo de injeção intracitoplasmática de espermatozóides (ICSI) e transferência de embriões (ET), permitindo-nos observar mudanças relacionadas à idade no metabolismo da glicose que podem ser atribuídas à ICSI, fornecendo informações sobre seus potenciais impactos de longo prazo no desenvolvimento humano.

Monitoramento da glicose no sangue na prole de camundongos após injeção intracitoplasmática de espermatozóides

Aprenda um método simples de monitoramento contínuo de glicose em camundongos livres, sem cirurgia complexa ou sangramento. Ideal para estudar fenótipos metabólicos em modelos de obesidade e diabetes.

Monitoramento Contínuo Simples de Glicose em Camundongos em Movimento Livre

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