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DOI: 10.3791/64804-v
Erin Crawford*1, Heather L. Mentrup*2,3, Elizabeth A. Novak2,3, Kevin P. Mollen2,3
1Division of Pediatric Gastroenterology, Hepatology and Nutrition,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 2Division of Pediatric Surgery,UPMC Children’s Hospital of Pittsburgh, 3Department of Surgery,University of Pittsburgh School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a protocol for isolating murine colonic crypts to develop 3-dimensional colonoids, which can be differentiated to mimic the intestinal epithelium. This approach enables the investigation of intestinal physiology and barrier function in diseased states, particularly inflammatory bowel disease.
Descrevemos um protocolo detalhando o isolamento de criptas colônicas murinas para o desenvolvimento de colonóides tridimensionais. Os colonóides estabelecidos podem então ser terminalmente diferenciados para refletir a composição celular do epitélio do hospedeiro antes de receber um desafio inflamatório ou serem direcionados para estabelecer uma monocamada epitelial.
Através de nossa pesquisa, pretendemos explorar como colonoides murinos podem ser modificados a partir de um sistema convencional de cultura de colonóides, para estudar certos aspectos da fisiologia intestinal e sua alteração na presença de um estado de doença inflamada. O estudo da função de barreira e da fisiologia intestinal em estados patológicos como a doença inflamatória intestinal é limitado quando se usa um sistema tradicional de cultura de colonoides murinos que reflete apenas a fisiologia das células-tronco. Nosso protocolo é vantajoso na medida em que fornece ao leitor múltiplas técnicas para estudar como mediadores inflamatórios afetam o epitélio intestinal, seja diferenciando-os terminalmente, seja criando um sistema de monocamada 2D.
No futuro, nosso laboratório se concentrará em compreender como o sistema de cultura do colonóide humano pode ser alterado para investigar diferentes aspectos da fisiologia intestinal e doenças, particularmente a doença inflamatória intestinal.
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