Desenvolvimento de um modelo de lesão crônica do manguito rotador de coelhos para estudo de fibrose e degeneração gordurosa muscular

Este protocolo demonstra uma técnica cirúrgica complexa para induzir uma lesão crônica do manguito rotador em coelhos, sendo útil no estudo da patogênese do manguito rotador e no desenvolvimento de terapias regenerativas. Os coelhos são modelos animais de médio a grande porte, fáceis de alojar logisticamente, manipulados cirurgicamente e apresentarem altos níveis de degeneração gordurosa do músculo do manguito rotador quando lesionados, semelhante aos humanos. O modelo de lesão subescapular mostrado aqui é anatomicamente análogo ao complexo muscular do tendão ósseo do supraespinal, uma das unidades do manguito rotador mais frequentemente lesadas.

Para começar, prepare a janela cirúrgica raspando o local de incisão pretendido de um coelho anestesiado. Usando cotonetes, limpe a área com três aplicações alternadas de Betadine e álcool 70% em movimentos circulares. Administrar 20 miligramas por quilograma de cefalexina por via intramuscular como agente anti-infeccioso profilático.

Faça uma incisão cutânea de três a quatro centímetros inferior à clavícula, divida o intervalo deltopeitoral com uma tesoura e retraia para ter acesso ao ombro. Para localizar a unidade tendínea do músculo subescapular, primeiro identifique o músculo coracobraquial. Em seguida, identifique o tendão subescapular e insira uma pinça de ângulo reto para expor todo o tendão em sua inserção na tuberosidade menor do úmero.

Isolar o tendão do músculo subescapular. Após a administração de analgésico pré-cirúrgico localmente próximo ao local da transecção, envolva a unidade tendínea do músculo subescapular em tubo penrose à base de silicone para evitar a fixação indesejada aos tecidos circundantes e auxiliar a recuperação subsequente do tecido. Para induzir a lesão, crie uma transecção de espessura total na junção do tendão muscular usando um bisturi cirúrgico número 11.

Quando necessário, pare de sangrar aplicando pressão com um pedaço de gaze e use soro fisiológico para irrigar a ferida conforme necessário. Para fechar a ferida, utilizar sutura com ácido poliglicólico 4-0 para reaproximar o tecido muscular deltoide e fio de náilon ou seda 4-0 para fechar a ferida cutânea, seguida de limpeza da ferida. Administrar 0,03 miligramas por quilograma de buprenorfina por via subcutânea como analgésico uma vez imediatamente após a cirurgia e duas vezes ao dia nas próximas 48 horas.

A análise histológica do modelo de lesão crônica do manguito rotador com quatro semanas é mostrada nesta figura. A coloração de H&E confirmou a perda da celularidade e organização muscular, que foi substituída por grande número de adipócitos nos músculos subescapulares lesados em relação ao grupo controle. A quantificação do percentual de acúmulo de gordura muscular lesada é apresentada nesta figura.

A coloração tricrômico de Masson também confirmou atrofia muscular e desorganização dos arranjos das fibras colágenas nos músculos subescapulares lesados em relação ao grupo controle. A quantificação da proporção de tecido muscular e fibrótico é mostrada nesta figura. A avaliação mostrou redução da celularidade muscular dos músculos subescapulares lesados em relação ao grupo controle.

Um alto grau de fibrose também foi observado nos músculos subescapulares lesados. A identificação do tendão subescapular e o envolvimento da unidade tendínea do músculo subescapular na tubulação penrose são as etapas mais importantes desse procedimento. Após este procedimento, uma intervenção terapêutica pode ser aplicada.

Nesse caso, as análises aqui descritas, juntamente com miografia adicional ou análise da marcha, podem ser usadas para avaliar o resultado da intervenção. Esta técnica é crucial para auxiliar os pesquisadores no estudo da fisiopatologia do manguito rotador, bem como facilitar o desenvolvimento de novas terapêuticas para o reparo e regeneração do tendão muscular.