Name: Transplante Intra-Peritoneal na Geração de Leucemia Mielóide Aguda em Camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 2 s
Description: Aprenda a estabelecer leucemia mieloide aguda em camundongos por injeção intraperitoneal de células leucêmicas. Este método oferece uma alternativa mais conveniente e econômica aos protocolos convencionais de transplante.

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Os autores agradecem ao Flow Cytometry Core Facility do Instituto Huck e ao Histopathology Core Facility do Animal Diagnostic Laboratory, Department of Veterinary and Biomedical Sciences, The Pennsylvania State University, por fornecer suporte técnico oportuno. Este trabalho foi apoiado por subsídios do American Institute for Cancer Research (KSP), Penn State College of Agricultural Sciences, Penn State Cancer Institute, USDA-NIFA project 4771, número de adesão 00000005 ao K.S.P. e R.F.P.

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</ol>

Os autores declaram a inexistência de conflitos de interesse.

Esses estudos descritos acima fornecem evidências de suporte de que o transplante de células Lin- é comparável às células LSK na geração de 1° de LMA murina. Além disso, os dados atuais também mostram que a injeção i.p. é um método eficiente e conveniente para estabelecer LMA murina em comparação com a injeção intravenosa (ou r.o.).
Além das células LSK, outras populações, como o progenitor de granulócitos monócitos (GMP), o progenitor linfoide comum (CLP) e o progenitor mieloide co...

A leucemia mieloide aguda (LMA) é um tipo de neoplasia hematológica de etiologia diversa e de mau prognóstico1. A geração de modelos animais de LMA estabelece as bases para a compreensão de suas complexas variações e patobiologia em um esforço para descobrir novas terapias2. A leucemogênese em camundongos envolve o transplante de células doadoras expressando oncoproteínas de fusão, incluindo fusões envolvendo o gene da leucemia de linhagem mista (MLL) para induzir potentemente a LMA, para mimetizar a doença em humanos3. Várias origens celulares de células de doadores têm sido relatadas no transplante de LMA4 associada ao gene MLL, sendo pouco conhecido sobre as células responsáveis pela origem da doença.
Múltiplas vias têm sido desenvolvidas para transplante em camundongos; em vez de uma injeção intrafemoral, que introduz diretamente células doadoras mutantes na medulaóssea5, uma injeção intravenosa que utiliza o plexo sinusal venoso, a veia caudal e a veia jugular tem sido amplamente utilizada para gerar modelos murinos de LMA 6,7,8,9. No caso da injeção retro-orbitária (r.o.), várias desvantagens inerentes, como limitação de volume, alta demanda técnica, poucas chances de tentativas repetidas ou erro e possíveis lesões oculares, têm sido grandes obstáculos com alternativas limitadas ou inviáveis7. A injeção da veia caudal pode ter problemas semelhantes, além de lesões locais; Para facilitar o procedimento, os camundongos muitas vezes precisam ser aquecidos para dilatar as veias da cauda10. Também é difícil localizar a veia da cauda sem uma fonte de luz adicional, particularmente na linhagem C57BL/6 de camundongos. Para a injeção da veia jugular, o pessoal da pesquisa requer treinamento suficiente para localizar a veia e limitar possíveis complicações. Além disso, tanto as injeções do seio venoso quanto da veia jugular precisam ser realizadas sob anestesia, o que acrescenta outro nível de complexidade. Assim, é tentador explorar novas rotas de transplante para facilitar o estabelecimento de modelos murinos de LMA.
A injeção intraperitoneal (i.p.) é comumente utilizada para administração de fármacos, corantes e anestésicos 11,12,13,14,15; Também tem sido utilizada na introdução de células hematopoéticas para hematopoese ectópica16 e no transplante de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea em vários modelos murinos 17,18,19,20,21. No entanto, tem sido pouco utilizada para estabelecer neoplasias hematopoéticas em camundongos, particularmente para estudar a progressão da doença da LMA.
O presente estudo descreve a viabilidade da injeção i.p. na geração de modelos de LMA em camundongos, além de comparar a eficiência do transplante de populações de linhagem negativa (Lin-) e Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) como células doadoras. Esses achados fornecem uma maneira simples e eficiente de gerar modelos experimentais de LMA e leucemias mieloides relacionadas. Tal método tem o potencial de aprofundar nossa compreensão dos mecanismos da doença, bem como fornecer um modelo relativamente fácil para testar terapias experimentais.

<table><tbody><tr><td>a-Selecione células competentes&nbsp;</td><td>Bioline</td><td>BIO-85027</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de amônio (NH4Cl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A-9434</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# A0797</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino (BSA), fração V&mdash; Bioprodutos Gemini de grau de baixa endotoxina</td><td></td><td>Cat# 700-102P</td><td></td></tr><tr><td>Ciprofloxacina HCl</td><td>GoldBio.com</td><td>Cat# C-861-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, glicose alta, sem glutamina</td><td>Gibco</td><td>Cat# 11960-044</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td> <td>Corning</td><td>Cat# 21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, sal dissódico (EDTA-2Na), di-hidratado, grau de biologia molecular</td><td>Calbiochem</td><td>Cat# 324503</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino - Premium Select</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>Cat# S11550</td><td></td></tr><tr><td>Holo-transferrina, bovino</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T1283</td><td></td></tr><tr><td>Solução de insulina humana</td><td>Sigma</td><td>Cat# I-9278</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Dulbecco Modificado de Iscove (IMDM)</td><td>Gibco</td><td>Cat# 12440-053</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina 200 mM (100&vezes;) solução</td><td>HyClone, Gelifesciences</td><td>Cat# SH30034.01</td><td></td></tr><tr><td>LB caldo, Lennox</td><td>NEOGEN</td><td>Cat #: 7290A</td><td></td></tr><tr><td>LB Caldo com ágar (Miller)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# L-3147</td><td></td></tr><tr><td>Mouse anti-mouse CD45.1 (FITC)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Cat# 130-124-211</td><td></td></tr><tr><td>Interleucina-3 de camundongo (IL-3)</td><td>Bioprodutos de gêmeos</td><td>Cat# 300-324P</td><td></td></tr><tr><td>Interleucina-6 de camundongo (IL-6)</td><td>Bioprodutos de gêmeos</td><td>Cat# 300-327P</td><td></td></tr><tr><td>Fator de células-tronco de camundongo (SCF)</td><td>Bioprodutos de gêmeos</td><td>Cat# 300-348P</td><td></td></tr><tr><td>Solução de penicilina-estreptomicina, 100x</td><td>Corning</td><td>Cat# 30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Phenix-Eco (pECO) células</td><td>ATCC</td><td>CRL-3214</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato de Potássio (KHCO3), Granular</td><td>JT. Baker</td><td>Cat# 2940-01</td><td></td></tr><tr><td>Rato anti-rato CD117 (c-kit) (APC)</td><td>BioLegend&nbsp;</td><td>Cat # 105812</td><td></td></tr><tr><td>Rato anti-rato Ly-6A/E (Sca-1) (PE-Cy7)</td><td>BD Pharmingen</td><td>Cat# 558162</td><td></td></tr><tr><td>Recombinante Murine Flt3-Ligand</td><td>Pepro Tech, INC.</td><td>Cat# 250-31L</td><td></td></tr><tr><td>RetroNectin Fragmento de Fibronectina Humana Recombinante</td><td>TaKaRa</td><td>Cat# T100A</td><td></td></tr><tr><td>TransIT-293 Reagente</td><td>MirusBio</td><td>Cat# MIR 2705</td><td></td></tr><tr><td>TRI Reagente</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# T9424</td><td></td></tr><tr><td>Solução Azul de Tripano, 0,4%</td> <td>Gibco</td><td>Cat # 15250061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%), vermelho</td> <td>de fenolGibco</td><td>Cat# 25200-056</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoetanol (BME)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Cat# M3148</td><td></td></tr><tr><td>Ensaios Comerciais&nbsp; </td>EasySep Kit de <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isolamento de Células Progenitoras Hematopoiéticas de Camundongo&nbsp;</td>Kit de Transcrição Reversa de cDNA de Alta Capacidade <td>Cat# 19856A</td><td></td>da <td>StemCell technologies</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Thermo Fisher&nbsp;</td><td>Cat# 4368813</td><td></td></tr><tr><td>PerfeCTa qPCR SuperMix</td><td>Quanta Bio</td><td>Cat# 95051-500</td><td></td></tr><tr><td>Plasmid Maxi Kit (25)</td><td>Qiagen</td><td>Cat#:12163</td><td></td></tr><tr><td>Animals</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ai14TdTomato mice</td><td>Jackson</td><td>Laboratory Cepa # 007914</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 C57BL6/J camundongos& nbsp;</td><td>Cepa de laboratório Jackson</td><td># 002014</td><td></td></tr><tr><td>camundongos CD45.2 C57BL6/J&nbsp;</td><td>Cepa de Laboratório Jackson</td><td># 000664</td><td></td></tr><tr><td>Instrumentos e Softwares</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adobe illustrator&nbsp;</td><td>Versão 25.2.3</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD accuri C6 citômetro de fluxo</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FlowJo 10.8.0</td><td>BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GeneSys programa de software&nbsp;</td><td>Versão 1.5.7.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism versão 6:</td><td>GraphPad</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hemavet 950FS&nbsp;</td><td>Drew Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>7300 Sistema de PCR em tempo real</td><td>Applied Biosystems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Syngene G: BOX Chemi XR5 Quimioluminescência Fluorescência Imaging</td><td>G: Box Chemi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

transplante intra-peritoneal na geração de leucemia mielóide aguda em camundongos

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

Há uma necessidade não atendida de novas terapias para tratar a leucemia mieloide aguda (LMA) e a recaída associada que envolve células-tronco de leucemia persistente (LSCs). Um modelo experimental de roedores com LMA para testar terapias baseadas no transplante bem-sucedido dessas células via injeções retroorbitais em camundongos receptores é repleto de desafios. O objetivo deste estudo foi desenvolver um método fácil, confiável e consistente para gerar um modelo murino robusto de LMA usando uma via intraperitoneal. No presente protocolo, células da medula óssea foram transduzidas com um retrovírus expressando oncoproteína de fusão MLL-AF9 humana. A eficiência de populações de linhagem negativa (Lin-) e Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) como LSCs doadoras no desenvolvimento de LMA primária foi testada, e a injeção intraperitoneal foi adotada como um novo método para gerar LMA. A comparação entre as injeções intraperitoneais e retro-orbitárias foi feita em transplantes seriados para comparar e contrastar os dois métodos. As células de Lin e LSK transduzidas com o vírus MLL-AF9 humano enxertado bem na medula óssea e no baço dos receptores, levando a uma LMA completa. A injeção intraperitoneal de células doadoras estabeleceu LMA em receptores após transplante seriado, e a infiltração de células de LMA foi detectada no sangue, medula óssea, baço e fígado dos receptores por citometria de fluxo, qPCR e análises histológicas. Assim, a injeção intraperitoneal é um método eficiente de indução de LMA utilizando transplante seriado de células leucêmicas de doadores.

Comparação da eficiência do transplante de células murinas de LMA utilizando as vias de transplante r.o. e i.p. Previamente, o estabelecimento de 1° AML foi relatado em camundongos receptores transplantados retroorbitalmente com células LSK transduzidas por MLL-AF9, e a transplantabilidade de 1° de células AML foi demonstrada por transplante seriado30. O presente estudo é o primeiro a avaliar a possibilidade de utilização de células de Lin- da medula óssea para a rea...

Aqui, a injeção intraperitoneal de células leucêmicas é utilizada para estabelecer e propagar a leucemia mieloide aguda (LMA) em camundongos. Este novo método é eficaz no transplante seriado de células da LMA e pode servir como uma alternativa para aqueles que podem experimentar dificuldades e inconsistências com a injeção intravenosa em camundongos.

Transplante Intra-Peritoneal na Geração de Leucemia Mielóide Aguda em Camundongos

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

Esse protocolo é significativo porque células lin-negativas e células SK isoladas do mesmo camundongo doador não tiveram diferença aparente na geração de LMA-MLL-AF9. Além disso, a injeção IP de células leucêmicas pode desenvolver com sucesso um modelo de LMA em camundongos. Comparada aos métodos convencionais de transplante, essa técnica é mais conveniente e menos dispendiosa.Para começar, esterilize o camundongo fêmea C57BL/6J CD45.1 de 8 a 10 semanas de idade com etanol 70%. Coloque o mouse em uma almofada cirúrgica estéril em uma placa de isopor e fixe as pernas através das almofadas da pata do rato. Corte a pele acima da cavidade abdominal na linha média e amplie o espaço subcutâneo em direção às patas traseiras com uma tesoura estéril afiada.Estender a incisão da linha média abdominal até os tornozelos e ampliar o espaço subcutâneo abaixo das patas traseiras com as lâminas de tesoura afiada. Corte o tendão de Aquiles com uma tesoura afiada. Segure o tendão usando pinças com dentes e corte a outra extremidade presa ao fêmur para remover o músculo gastrocnêmio.Corte o tendão do quadríceps preso ao joelho com uma tesoura afiada. Segure o tendão e corte a cabeça do músculo preso ao fêmur para remover o músculo gastrocnêmio. Corte os outros músculos ao redor do fêmur na extremidade presa à tíbia.Em seguida, corte o tornozelo com uma tesoura afiada, garantindo que a tíbia permaneça intacta. Segure a extremidade distal do fêmur e corte a articulação do quadril com uma tesoura afiada, garantindo que a cabeça femoral permaneça intacta. Transfira as tíbias e fêmures para um tampão de fluxo em um tubo de 15 mililitros.Separe a tíbia e o fêmur quebrando o joelho com a mão. Remova a patela, cartilagem e côndilos femorais para expor o platô tibial e o fêmur distal. Retire os músculos usando gaze estéril e mergulhe os ossos em um tampão de fluxo.Corte o colo femoral e lave as células da medula óssea com tampão de fluxo de ambas as extremidades do fêmur usando uma seringa de 10 mililitros com uma agulha de calibre 23. Em seguida, corte o maléolo tibial e lave as células da medula óssea com tampão de fluxo de ambas as extremidades da tíbia. Disperse as células pipetando para cima e para baixo usando uma seringa de 10 mililitros com uma agulha calibre 18.Centrifugar a suspensão de célula única a quatro graus Celsius e 400 G durante três minutos. Descarte o sobrenadante e ressuspenda as células em cinco mililitros de tampão de lise de hemácias, ou hemácias, para lisar as hemácias por três minutos. Adicione cinco mililitros de tampão de fluxo para parar a lise.Em seguida, centrifugar a suspensão celular e ressuspender o pellet em cinco mililitros de tampão de fluxo. Coloque um filtro de células de 70 mícrons em um tubo de 50 mililitros e passe a suspensão pelo filtro para coletar as células. Ajuste a concentração celular com tampão de fluxo para uma vez 10 a oito por mililitro em tubos de polipropileno de fundo redondo.Selecione células negativas de linhagem usando um kit de isolamento de células hematopoiéticas de camundongo de acordo com as instruções do fabricante. Uma vez feito, centrifugar as células-tronco hematopoéticas selecionadas e as células negativas de linhagem não selecionadas e ressuspender em três mililitros de 2X de citocinas, meios IMDM e três mililitros de sobrenadante viral em uma placa revestida retro-redutora. Incube o prato em uma incubadora umidificada de dióxido de carbono a 5% a 37 graus Celsius por 6 ou 24 horas.Após a transdução, colher as células por centrifugação. Se necessário, use tripsina para coletar as células ligadas ao fundo do prato. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet em PBS pré-aquecido.Injetar células no camundongo receptor primário retro-orbital ou intraperitonealmente com uma meia agulha de calibre 27. Monitore o mouse diariamente. Após um mês, coletar sangue semanalmente por sangramento retro-orbital para monitorar a leucocitose avaliando o hemograma completo em um HEMAVET.Proponha o olho com o polegar e o indicador e, em seguida, penetre no plexo do seio venoso com um tubo capilar de hematócrito estéril através do canto interno. Colete de 20 a 25 microlitros de sangue em um tubo de coleta de sangue EDTA e feche as pálpebras para parar o sangramento. Aplique uma gota de solução oftálmica de sulfato de gentamicina no olho.Quando os glóbulos brancos atingirem quatro vezes 10 a quatro células por microlitro, isole as células da medula óssea lavando os fêmures e tíbias com tampão de fluxo, seguido de lise eritrocitária, como descrito anteriormente. Em seguida, para colher os esplenócitos, coloque o mouse em uma almofada cirúrgica estéril em uma placa de isopor e fixe as pernas através das almofadas da pata do rato. Esterilizar o rato com etanol a 70%.Corte a pele e o músculo na linha média para expor a cavidade abdominal com uma tesoura estéril afiada. Isole o baço e coloque-o em um tampão de fluxo em um tubo de 15 mililitros. Malha o baço através de um filtro de 70 mícrons em um prato de seis centímetros com três mililitros de tampão de fluxo.Transfira as células da placa para um tubo de 15 mililitros, centrifugar a suspensão de célula única, descartar o sobrenadante e ressuspender o pellet em cinco mililitros de tampão de lise de hemácias por três minutos. Adicione cinco mililitros de tampão de fluxo para parar a lise e centrifugar a suspensão celular. Ressuspenda o pellet em cinco mililitros de tampão de fluxo, misture e passe através de um filtro de células de 70 mícrons para coletar células em um tubo de 50 mililitros.Identificar células primárias de leucemia mieloide aguda, ou LMA, corando os esplenócitos e as células da medula óssea com o anticorpo anti-camundongo CD45.1 conjugado FITC e detectando em um citômetro de fluxo. As células são primeiramente acopladas em FSC-A FSC-H e FSC-A SSC-A para adquirir singletes. A população CD45.1 positiva é limitada na parcela FL1 comparando-a com células não coradas.Para transplante secundário, ressuspenda as células esplênicas CD45.1 da LMA de receptores retroorbitários primários em PBS e injete-as retroorbitalmente em camundongos machos CD45.2. A presença de leucocitose aberrante e o aumento da infiltração de células leucêmicas na medula óssea e no baço apoiam a viabilidade do uso de células negativas para linhagem da medula óssea para gerar LMA primária. Não foram observadas diferenças significativas em receptores primários traduzidos com LSK ou células negativas para linhagem.As células AML disseminaram-se na cavidade abdominal dos receptores primários por leucemia de linhagem mista ou células transduzidas de linhagem MLL-AF9 negativas. Esses resultados também confirmaram o estabelecimento da LMA primária via injeção intraperitoneal de células negativas para linhagem da medula óssea transduzidas por MLL-AF9 na forma de leucocitose e a presença de células de LMA na medula óssea e no baço de camundongos receptores. No entanto, o transplante primário por injeção intraperitoneal levou mais tempo para desenvolver LMA do que por injeção retroorbitária, apesar do igual número de células doadoras.Os receptores secundários apresentaram leucocitose e hepatoesplenomegalia significativa em menos de um mês pós-transplante. As células da LMA também foram detectadas no sangue periférico, medula óssea e baço, bem como na cavidade peritoneal. A injeção intraperitoneal de oito vezes 10 para as cinco células de LMA obteve enxertia comparável à injeção retro-orbitária de oito vezes 10 para as cinco LMA.Os camundongos receptores terciários exibiram agudamente sinais de LMA, incluindo leucocitose e hepatoesplenomegalia, presença de células leucêmicas no sangue, medula óssea e baço, observação histológica do fêmur e baço demonstrou ainda a infiltração de células leucêmicas. Comparado aos transplantes secundário e terciário, o transplante terciário progrediu muito mais rápido que o transplante secundário. Para o modelo atual, a classificação de células LSK é desnecessária.As células lin-negativas podem ser transduzidas com o vírus da LMA por 6 horas ou 24 horas. Isso não afetará a eficiência do estabelecimento do modelo.

intra-peritoneal-transplantation-for-generating-acute-myeloid

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Neste vídeo, realizamos uma injeção intraperitoneal de suspensão de células de câncer de ovário em um modelo de camundongo para estudar a colonização de células de câncer de ovário em tecidos adiposos peritoneais e suas subsequentes metástases.

Injeção intraperitoneal de células: um método de entrega de células cancerígenas no tecido adiposo peritoneal de modelo murino

Este vídeo demonstra a indução da doença intestinal do enxerto contra o hospedeiro, GvHD, em um camundongo receptor letalmente irradiado usando células-tronco hematopoiéticas alogênicas e linfócitos T alorreativos esplênicos indutores de GvHD. Este protocolo ajuda a estabelecer um modelo de GvHD intestinal aguda grave para entender o mecanismo da doença e desenvolver opções terapêuticas inovadoras.

Indução da doença do enxerto contra o hospedeiro em modelos de camundongos via transplante alogênico de medula óssea e células esplênicas

Descrevemos um protocolo pelo qual o condicionamento com bussulfano permite que a medula óssea de um camundongo receptor seja substituída por células da medula óssea de camundongos doadores que expressam onipresente a proteína fluorescente verde, na ausência de irradiação. Esta técnica é útil para estudar o acúmulo de células da medula óssea no sistema nervoso central.

Busulfan como Agente mielosupressores para a geração estável de alto nível de Medula Óssea quimerismo em Ratos

Microscopia de fluorescência intravital (IVFM) da calvária é aplicada em combinação com modelos de animais geneticamente para estudar o homing e enxertia das células hematopoiéticas em nichos de medula óssea (BM).

Combinando a microscopia Intravital fluorescente (IVFM) com modelos genéticos para estudar a dinâmica de enxertia das células hematopoiéticas para nichos de medula óssea

Este manuscrito fornece uma descrição da metodologia usada para estabelecer modelos de camundongos de transdução-transplante. Um relato detalhado é dado de erros técnicos a serem evitados ao realizar transplantes de medula óssea. Deve-se obter uma compreensão clara da importância do alto título viral, transfecção/transdução e irradiação.

Transdução-Transplante Rato Modelo de neoplasia mieloproliferativa

Aqui, descrevemos um protocolo no qual um modelo de xenoenxerto derivado de pacientes com leucemia linfoblástica aguda é usado como estratégia para avaliar e monitorar as toxicidades associadas ao receptor de antígeno quimérico CD19-alvo.

Avaliação das Toxicidades Associadas às Células T do Receptor de Antígeno Quimérico Usando um Modelo de Xenoenxerto de Camundongo Derivado de Pacientes com Leucemia Linfoblástica Aguda

Este protocolo descreve a injeção intrafemoral de algumas células-tronco hematopoiéticas ou leucêmicas, incluindo células editadas por genes, em modelos de xenoenxerto murino, o que permitirá não apenas o transplante rápido e seguro de células, mas também análises seriadas da medula óssea.

Injeções intrafemorais simplificadas usando camundongos vivos permitem análise contínua da medula óssea

As injeções intrafemorais permitem o enxerto de um pequeno número de células-tronco e progenitoras hematopoiéticas (HSPCs), colocando as células diretamente na cavidade da medula óssea. Aqui descrevemos um protocolo experimental de injeção intrafemoral de HSPCs humanos em camundongos imunodeficientes.

Injeção intrafemoral de células-tronco hematopoiéticas humanas e progenitoras em camundongos imunocomprometidos 

Aqui, um método baseado em citometria de fosfofluxo é descrito para analisar a sinalização a jusante das vias mTORC1, JAK/STAT5 e MAPK em células de leucemia mielóide humana aguda xenoenxertadas em camundongos e obtidas de aspirados de medula óssea. Os níveis de p-STAT5, p-4EBP1, p-RPS6 e p-ERK1/2 são medidos simultaneamente usando um citômetro de fluxo espectral de última geração com alta sensibilidade.

Citometria de fosfofluxo intracelular de xenotransplantes derivados de pacientes com leucemia mielóide aguda

O protocolo tem como objetivo descrever um modelo de camundongo para gerar recidivas de leucemia linfoblástica aguda, com base na dinâmica da resposta à quimioterapia de indução.

Modelo Murino de Leucemia Recaída para Quimioterapia de Indução para Leucemia Linfoblástica Aguda

Este protocolo demonstra a injeção de veias temporais para a entrega intravenosa de células cancerígenas pediátricas a camundongos neonatais, permitindo modelagem precisa e reprodutível das respostas imunes em início de vida contra o câncer. O método permite avaliar o impacto de intervenções, como imunomodulação ou terapia, quando aplicadas durante o período neonatal.

Um modelo de transplante intravenoso neonatal para avaliação das atividades imunológicas na infância contra células cancerígenas

Aprenda a estabelecer leucemia mieloide aguda em camundongos por injeção intraperitoneal de células leucêmicas. Este método oferece uma alternativa mais conveniente e econômica aos protocolos convencionais de transplante.

Transplante Intra-Peritoneal na Geração de Leucemia Mielóide Aguda em Camundongos

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