Name: Monitoramento Bioluminescente da Sobrevida do Enxerto em Modelo de Transferência Adotiva de Diabetes Autoimune em Camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 3 s
Description: Aprenda a monitorar a sobrevida de enxertos de células NIT-1 em camundongos NOD-SCID usando imagem bioluminescente. Este método minimamente invasivo auxilia no estudo de respostas autoimunes no diabetes tipo 1.

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Agradecemos à Dra. Erica P. Cai e ao Dr. Yuki Ishikawa pelo desenvolvimento do método descrito neste protocolo (ver ref. 11). A pesquisa nos laboratórios de S.K. e P.Y. é apoiada por subsídios dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) (R01DK120445, P30DK036836), JDRF, Instituto de Células-Tronco de Harvard e Fundação Beatson. T.S. foi apoiado por uma bolsa de pós-doutorado do Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais (NIDDK) (T32 DK007260-45), e K.B. foi apoiado em parte por uma bolsa da Fundação Mary K. Iacocca.

<ol><li>Katsarou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes mellitus.</a> Nature Reviews Disease Primers. 3, 17016(2017).</li>
<li>Shapiro, A. M., Pokrywczynska, M., Ricordi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+pancreatic+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Clinical pancreatic islet transplantation.</a> Nature Reviews Endocrinology. 13 (5), 268-277 (2017).</li>
<li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li>
<li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li>
<li>Vertex Announces Positive Day 90 Data for the First Patient in the Phase 1_2 Clinical Trial Dosed With VX-880, a Novel Investigational Stem Cell-Derived Therapy for the Treatment of Type 1 Diabetes. Businesswire. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes">https://www.businesswire.com/news/home/20211018005226/en/Vertex-Announces-Positive-Day-90-Data-for-the-First-Patient-in-the-Phase-12-Clinical-Trial-Dosed-With-VX-880-a-Novel-Investigational-Stem-Cell-Derived-Therapy-for-the-Treatment-of-Type-1-Diabetes</a> (2021).</li>
<li>Gamble, A., Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+journey+of+islet+cell+transplantation+and+future+development%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">The journey of islet cell transplantation and future development.</a> Islets. 10 (2), 80-94 (2018).</li>
<li>Pearson, J. A., Wong, F. S., Wen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+Non+Obese+Diabetic+%28NOD%29+mouse+model+in+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">The importance of the Non Obese Diabetic (NOD) mouse model in autoimmune diabetes.</a> Journal of Autoimmunity. 66, 76-88 (2016).</li>
<li>Hamaguchi, K., Gaskins, R. H., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIT-1%2C+a+pancreatic+%CE%B2-cell+line+established+from+a+transgenic+NOD%2FLt+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">NIT-1, a pancreatic β-cell line established from a transgenic NOD/Lt mouse.</a> Diabetes. 40 (7), 842-849 (1991).</li>
<li>Christianson, S. W., Shultz, L. D., Leiter, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+transfer+of+diabetes+into+immunodeficient+NOD-scid%2Fscid+mice%3A+Relative+contribution+of+CD4%2B+and+CD8%2B+T-cells+from+diabetogenic+versus+prediabetic+NOD.NON-Thy1a+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Adoptive transfer of diabetes into immunodeficient NOD-scid/scid mice: Relative contribution of CD4+ and CD8+ T-cells from diabetogenic versus prediabetic NOD.NON-Thy1a donors.</a> Diabetes. 42 (1), 44-55 (1993).</li>
<li>Cai, E. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-scale+in+vivo+CRISPR+screen+identifies+RNLS+as+a+target+for+beta+cell+protection+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Genome-scale in vivo CRISPR screen identifies RNLS as a target for beta cell protection in type 1 diabetes.</a> Nature Metabolism. 2 (9), 934-945 (2020).</li>
<li>Parent, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+deletion+of+human+leukocyte+antigens+protects+stem+cell-derived+islets+from+immune+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Selective deletion of human leukocyte antigens protects stem cell-derived islets from immune rejection.</a> Cell Reports. 36 (7), 109538(2021).</li>
<li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lack+of+acute+xenogeneic+graft-versus-host+disease%2C+but+retention+of+T-cell+function+following+engraftment+of+human+peripheral+blood+mononuclear+cells+in+NSG+mice+deficient+in+MHC+class+I+and+II+expression%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Lack of acute xenogeneic graft-versus-host disease, but retention of T-cell function following engraftment of human peripheral blood mononuclear cells in NSG mice deficient in MHC class I and II expression.</a> FASEB Journal. 33 (3), 3137-3151 (2019).</li>
<li>Abdulreda, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+type+1+diabetes+immunopathology+using+eye-transplanted+islets+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of type 1 diabetes immunopathology using eye-transplanted islets in NOD mice.</a> Diabetologia. 62 (7), 1237-1250 (2019).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

A DM1 é uma doença devastadora para a qual não existe cura atualmente. A terapia de reposição de células beta oferece um tratamento promissor para pacientes com essa doença, mas a barreira crítica a essa estratégia é o potencial de ataque autoimune recorrente contra as células beta transplantadas. A engenharia genética de células SC-beta para reduzir sua visibilidade imunológica ou suscetibilidade é uma solução potencial para este problema. Descrito aqui é um protocolo para imagens não invasivas de células beta transplan...

O diabetes tipo 1 (DM1) é causado pela destruição autoimune das células beta produtoras de insulina do pâncreas. A perda de massa da célula beta resulta em deficiência de insulina e hiperglicemia. Os pacientes com DM1 dependem de múltiplas injeções diárias de insulina exógena e experimentam episódios de hiperglicemia grave e hipoglicemia ao longo de suas vidas. As complicações relacionadas a esses episódios incluem retinopatia diabética, diminuição da função renal eneuropatia1.
As injeções de insulina são um tratamento, mas não uma cura para a DM1. A substituição da massa perdida de células beta, no entanto, tem o potencial de reverter a doença, permitindo que os pacientes produzam sua própria insulina. No entanto, a oferta de ilhotas doadoras cadáveres é limitada2. As ilhotas derivadas de células-tronco (ilhotas SC) podem fornecer um suprimento virtualmente ilimitado de células beta para transplante. Vários grupos têm demonstrado que células-tronco embrionárias humanas (CTEs) e células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) podem ser diferenciadas para gerar células beta-like funcionais 3,4,5. Dados promissores de ensaios clínicos iniciais indicam que essas células mantêm sua função após o transplante e podem permitir que os pacientes se tornem independentes de insulina6. No entanto, a imunossupressão crônica é necessária, aumentando sua suscetibilidade ao câncer e à infecção. Além disso, agentes imunossupressores podem ser citotóxicos para enxertos em longo prazo7. Para eliminar a necessidade de imunossupressão, as ilhotas SC podem ser geneticamente modificadas para protegê-las da autoimunidade recorrente, bem como da aloimunidade após o transplante.
A pesquisa com células-tronco é altamente exigente em custos e mão de obra. Linhagens celulares de camundongos e modelos animais são ferramentas úteis para a identificação inicial e validação experimental de estratégias para proteger células transplantadas da autoimunidade. O camundongo NOD desenvolve diabetes autoimune espontâneo com muitas semelhanças com a DM1 humana8, e a linhagem celular insulinoma NIT-1 compartilha um background genético com essa linhagem de camundongo9. O diabetes pode ser transferido adotivamente para a linhagem de camundongos NOD-scid imunodeficiente relacionada através da injeção de esplenócitos diabéticos de camundongos NOD, a fim de sincronizar temporalmente o início do diabetes em camundongos experimentais replicados10. Este modelo pode ser usado para identificar alvos genéticos de forma relativamente rápida e barata para posterior validação em ilhotas SC. Recentemente, o método foi aplicado para identificar e validar RNLS, um alvo que foi encontrado para proteger ilhotas humanas primárias da autoimunidade in vivo e ilhotas derivadas de iPSC do estresse da célula beta in vitro11. Descrito aqui é um protocolo simples para transplantar células NIT-1 geneticamente modificadas e monitorar de forma não invasiva sua sobrevivência em um modelo de transferência adotivo de diabetes autoimune em camundongos.

<table><tbody><tr><td>0,05% de tripsina, 0,53 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-052-CI</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td>Isolado clonal de crescimento rápido e altamente transfectável derivado de células renais embrionárias humanas transformadas com o antígeno T grande SV40</td></tr><tr><td>ACK Lysing Buffer</td><td>Gibco</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>Almofadas de preparação de álcool, álcool isopropílico 70%</td><td>Amazon/Ever Ready First Aid</td><td>B08NWF31DX</td><td></td></tr><tr><td>Seringa BD 5ml Ponta Luer-Lok</td><td>BD</td><td>309646</td><td></td></tr><tr><td>BD Agulha PrecisionGlide 26G x 5/8 (0.45 mm x 16 mm) Sub-Q</td><td>BD</td><td>305115</td><td></td></tr><tr><td>BD 1 mL TB Seringa Ponta Deslizante</td><td>BD</td><td>309659</td><td></td></tr><tr><td>Blasticidina S HCl</td><td>Corning</td><td>&nbsp; 30-100-RB</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de células premium SureStrain, 70 &micro; m, estéril</td><td>Southern Labware</td><td>C4070</td><td>Ou use filtro estéril semelhante com tamanho de poro de 40-70um</td></tr><tr><td>CellDrop contador de células automatizado</td><td>Denovix</td><td>CellDrop BF-PAYG</td><td>Ou use dispositivo contador de células semelhante</td></tr><tr><td>Corning 100 mL Penicilina-Estreptomicina Solução, 100x</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de Aspiração Descartáveis, Poliestireno, Estéril, Capacidade=2 mL</td><td>VWR</td><td>414004-265</td><td>Ou use pipeta de aspiração semelhante</td></tr><tr><td>D-Luciferina, sal de potássio, grau de biologia molecular, pó, >99%</td> <td>Goldbio</td><td>LUCK-100</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, glicose alta, piruvato, sem glutamina</td><td>Gibco</td><td>10313039</td><td></td></tr><tr><td>tubos Falcon BD, 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49A</td><td></td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Pinça premium para tecidos, 1 x 2 dentes 5 pol, Aço Alemão</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-820-074</td><td></td></tr><tr><td>Tira de teste de glicose na urina</td><td>California Pet Pharmacy</td><td>u-tsg100</td><td>Ou use uma tira de teste semelhante para medições de glicose na urina/sangue</td></tr><tr><td>GlutaMAX&ndash; 1 (100x)</td><td>Gibco</td><td>35050-061</td><td></td></tr><tr><td>Lâmpada de aquecimento infravermelho</td><td>Cole Parmer</td><td>03057-00</td><td>Ou use lâmpada infravermelha semelhante&nbsp;</td></tr><tr><td>Seringa de insulina 0,5 mL, U-100 29 G 0,5 em</td><td>Becton Dickinson</td><td>309306</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano, USP</td><td>Piramal Critical Care</td><td>6679401725</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de imagem in vivo IVIS Spectrum</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>124262 Instrumento para coleta não invasiva de imagens bioluminescentes de células transplantadas Software de</td></tr><tr><td>análise de imagem viva</td><td>Perkin Elmer</td><td>128113</td><td>Software para coletar e quantificar sinais bioluminescentes</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga seal-rite, 1,5 mL</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5510</td><td>Ou use tubos de microcentrífuga estéreis semelhantes</td></tr><tr><td>NIT-1</td><td>ATCC</td><td>CRL-2055</td><td>Linha de células beta pancreáticas derivada de camundongos NOD/Lt</td></tr><tr><td>NOD. Cg-Prkdcscid/J</td><td>O Laboratório Jackson 001303</td><td></td><td>camundongos homozigotos para a grave mutação espontânea de deficiência imunológica combinada Prkdcscid, comumente referido como&nbsp; scid, são caracterizados por ausência de células T funcionais e células B, linfopenia, hipogamaglobulinemia e um microambiente hematopoiético normal.</td></tr><tr><td>NOD/ShiLtJ</td><td>O Laboratório Jackson</td><td>001976</td><td>A linhagem de camundongos NOD/ShiLtJ (comumente chamada de NOD) é um modelo poligênico para diabetes tipo 1 autoimune</td></tr><tr><td>PBS, pH 7,4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010031</td><td>Sem cálcio, sem magnésio, sem vermelho de fenol</td></tr><tr><td>pCMV-VSV-G</td><td>Addgene</td><td>8454</td><td></td></tr><tr><td>pLenti-luciferase-blast</td><td>Plasmídeo feito internamente</td><td>disponível mediante solicitação</td><td>Veja o Arquivo Suplementar 1</td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>pMDLg/pRRE</td><td>Addgene</td><td>12251</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenimina, Linear, MW 25.000, Grau de Transfecção (PEI 25K)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1014320</td><td></td></tr><tr><td>pRSV-Rev</td><td>Addgene</td><td>12253</td><td></td></tr><tr><td>Limitador para roedores, rodada 1 estilo broome em</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-288-32A</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura, pontiaguda</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td>Ou use outra tesoura feita de aço inoxidável de grau cirúrgico Placas de</td></tr><tr><td>cultura tratadas com cultura de tecidos</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS430167-20EA</td><td>Ou use outras placas de Petri tratadas com cultura de células estéreis</td></tr><tr><td>Pinças/Fórceps, de precisão fina com ponta média</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-000-157</td><td></td></tr></tbody></table>

monitoramento bioluminescente da sobrevida do enxerto em modelo de transferência adotiva de diabetes autoimune em camundongos

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

O diabetes tipo 1 é caracterizado pela destruição autoimune das células beta produtoras de insulina do pâncreas. Um tratamento promissor para essa doença é o transplante de células-tronco derivadas de células-tronco. Modificações genéticas, no entanto, podem ser necessárias para proteger as células transplantadas da autoimunidade persistente. Modelos de camundongos diabéticos são uma ferramenta útil para a avaliação preliminar de estratégias para proteger células transplantadas do ataque autoimune. Descrito aqui é um método minimamente invasivo para transplante e imagem de enxertos celulares em um modelo de transferência adotiva de diabetes em camundongos. Neste protocolo, células da linhagem beta pancreática murina NIT-1 expressando o transgene luciferase luciferase luc2 são transplantadas subcutaneamente em camundongos imunodeficientes diabéticos não obesos (NOD)-imunodeficientes combinados graves (scid). Esses camundongos são injetados simultaneamente por via intravenosa com esplenócitos de camundongos NOD espontaneamente diabéticos para transferir autoimunidade. Os enxertos são imageados em intervalos regulares por meio de imagens bioluminescentes não invasivas para monitorar a sobrevivência celular. A sobrevivência das células mutantes é comparada à das células controle transplantadas no mesmo camundongo.

Uma visão geral do protocolo é descrita na Figura 1. A sobrevivência de duas linhagens celulares, como um mutante e um controle não-alvo, pode ser comparada, ou a sobrevivência de uma linhagem celular pode ser medida em vários grupos de camundongos, como camundongos tratados com drogas versus controles tratados com veículo. A Figura 3A mostra três camundongos NOD-scid fêmeas de 8 semanas de idade transplantados com uma linhagem celular não-alvo (esquerda) e uma ...

Este protocolo descreve um método simples e minimamente invasivo para transplante e obtenção de imagens de células NIT-1 em camundongos imunodeficientes combinados não-obesos diabéticos (NOD)-graves desafiados com esplenócitos purificados de camundongos NOD espontaneamente diabéticos.

Monitoramento Bioluminescente da Sobrevida do Enxerto em Modelo de Transferência Adotiva de Diabetes Autoimune em Camundongos

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Esse protocolo pode ajudar a entender os mecanismos de proteção contra ataques autoimunes e identificar alvos terapêuticos para a reposição de células beta no diabetes tipo um. A principal vantagem desta técnica é o custo relativamente baixo, a simplicidade dos métodos de cultura de células, transplante e imagem, bem como a mínima invasividade das técnicas em camundongos. Indivíduos que nunca realizaram uma injeção na veia da cauda antes podem ter dificuldades para inserir a agulha na veia.Peça uma demonstração por um especialista antes da primeira injeção. Para começar, pegue o rato anestesiado e remova os pelos de seu lado dorsal usando um barbeador elétrico com um protetor, expondo aproximadamente uma polegada por dois centímetros da pele. Devolva o rato raspado à câmara de knockdown.Antes do transplante, transfira um camundongo de cada vez da câmara para uma superfície limpa equipada com um cone nasal de isoflurano e guie suavemente a cabeça do camundongo para dentro do cone nasal. Limpe a área raspada com uma almofada de preparação de álcool isopropílico para remover os pelos soltos e desinfetar a pele. Em seguida, desenhe mais de 300 microlitros de suspensão celular em uma se

bioluminescent-monitoring-graft-survival-an-adoptive-transfer-model

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Biology

Biologia

Um método para enxertia confiável luciferase marcadas humana maligna dos nervos periféricos células tumorais em bainha do nervo ciático de ratos imunodeficientes é descrito. A utilização de imagem de bioluminescência para demonstrar estabelecimento adequado de enxertos tumor e critérios para a segregação aleatória dos animais em grupos de estudo são também discutidos.

Ortotópico do xeno-Human-luciferase Tagged maligna dos nervos periféricos Células Tumorais Bainha para In vivo Teste de Agentes Terapêuticos candidatos

Imagem bioluminescência para avaliação das respostas imune após o implante do tecido do coração Engineered (EHT)

O transplante de medula óssea murina é uma técnica amplamente utilizada para estudar os mecanismos imunológicos que regem enxerto-versus-hospedeiro da doença em seres humanos. A capacidade de monitorar padrões de tráfico de células...

Indução de enxerto-versus-hospedeiro de Doenças e<em&gt; Em Vivo</em&gt; Monitoramento celular T Usando um modelo murino de MHC de correspondência

Este vídeo demonstra um modelo ortotópico de câncer de pâncreas que utiliza Matrigel para entrega celular localizada e imagens de bioluminescência in vivo para monitoramento não invasivo da progressão do tumor. O modelo ortotópico é adequado para modelos singênicos e de xenoenxerto e pode ser usado em ensaios pré-clínicos para investigar o impacto de novas terapias anticâncer no crescimento do tumor pancreático primário e metástase.

Modelo de camundongo com câncer de pâncreas ortotópico bioluminescente: uma técnica não invasiva para monitorar a progressão do câncer em camundongos

Este vídeo demonstra um método baseado em imagem para visualizar células beta transplantadas que expressam luciferase em um camundongo imunodeficiente diabético não obeso. A introdução de esplenócitos de um camundongo diabético leva à destruição progressiva das células beta, visualmente confirmada pelo declínio da luminescência após a introdução do substrato.

Imagem de células beta transgênicas em um camundongo imunodeficiente desafiado com esplenócitos diabéticos

Fonte: Clark, A.J., et al. Imagem de bioluminescência de um modelo animal imunocompetente para glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra imagens de bioluminescência para rastrear a progressão do glioblastoma em um modelo de camundongo imunocompetente, usando células tumorais que expressam luciferase e luciferina para quantificar o crescimento do tumor de forma não invasiva.

Imagem de bioluminescência de um modelo de camundongo imunocompetente para glioblastoma

Uma melhor compreensão da biologia do câncer de pâncreas é criticamente necessário para permitir o desenvolvimento de melhores opções terapêuticas para o tratamento de câncer no pâncreas. Para atender a essa necessidade, nós demonstramos um modelo ortotópico de câncer pancreático que permite o monitoramento não-invasivo de progressão do câncer...

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As células de glioma GL261 fornecem um modelo animal imunocompetente útil de glioblastoma. Os objetivos deste protocolo são demonstrar técnicas adequadas para monitorar o crescimento do tumor intracraniano usando imagens de bioluminescência in vivo e verificar a utilidade das células GL261 modificadas com luciferase para estudar a imunologia tumoral e abordagens imunoterapêuticas para o tratamento do glioblastoma.

Bioluminescência imagem de um modelo animal para imunocompetentes Glioblastoma

Aqui usamos bioluminescentes, raio-x e positron-emissão calculado a tomografia computadorizada/tomografia computadorizada de imagem para estudar a atividade como a inibição de mTOR impactos tumores de medula óssea-incorporada do mieloma múltiplo em um modelo de transplante. Isto permite análises fisiologicamente relevantes, não-invasivo e multimodais do efeito antimieloma de terapias direcionamento incorporada a medula óssea mieloma tumores na vivo.

Imagem de tomografia computadorizada multimodal bioluminescentes e emissão positrônica Tomography/computacional de mieloma múltiplo Xenografts de medula óssea em camundongos NOG

A doença enxerto versus hospedeiro é uma grande complicação após o transplante de medula óssea alogênico. As células dendríticas desempenham um papel crítico na patogênese da doença enxerto-versus-hospedeiro. O artigo atual descreve uma nova plataforma de transplante de medula óssea para investigar o papel das células dendríticas no desenvolvimento da doença enxerto versus hospedeiro e o efeito enxerto-versus-leucemia.

Plataforma de transplante de medula óssea para investigar o papel das células dendríticas na doença enxerto-versus-hospedeiro

O objetivo deste protocolo é monitorar continuamente a dinâmica do processo de engrafamento da ilhota pancreática humana e o acolhimento contribuinte versus células doadoras. Isso é feito transplantando ilhotas humanas na câmara anterior do olho (ACE) de um NOD. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-receptor do mouse seguido de repetidas imagens de 2 fótons.

Imagem longitudinal in Vivo e quantificação de células hospedeiras pancreáticas humanas na câmara de olho anterior

Aprenda a monitorar a sobrevida de enxertos de células NIT-1 em camundongos NOD-SCID usando imagem bioluminescente. Este método minimamente invasivo auxilia no estudo de respostas autoimunes no diabetes tipo 1.

Monitoramento Bioluminescente da Sobrevida do Enxerto em Modelo de Transferência Adotiva de Diabetes Autoimune em Camundongos

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