O Estabelecimento de um Modelo de Cicatrização de Molares Mandibulares Murinos
13 de janeiro de 2023
Este protocolo demonstra passo-a-passo detalhes de como extrair o primeiro molar inferior no camundongo. Ele fornece um método alternativo para pesquisadores com foco na cicatrização e regeneração dos ossos maxilares.
Este protocolo fornece um modelo murino de extração de molares mandibulares que raramente é introduzido nos estudos de regeneração óssea disponíveis. O desenvolvimento de um modelo murino de extração de molares mandibulares é necessário como uma mandíbula mais comparável e consistente entre os diferentes grupos de intervenção. As implicações dessa técnica não se estendem para o tratamento de nenhuma doença.
No entanto, pode ajudar a cicatrização clínica e regeneração óssea da mandíbula a longo prazo, ajudando a rever os mecanismos subjacentes a este processo. Esta técnica foi desenvolvida para auxiliar os estudos, revelando os mecanismos de cura e regeneração disponíveis. Lamentavelmente, este método não pode ser aplicado a outros sistemas.
Comece a eliminar a resistência distal do camundongo anestesiado segurando o molar com uma pinça medialmente. Em seguida, forçar uma agulha de calibre 23 no osso alveolar bucal da raiz distal e fazer um intervalo. Em seguida, mude para uma agulha calibre 25 para continuar a expansão do intervalo.
Progredir delicadamente em direção à área periapical enquanto gira lentamente a agulha para frente e angulosamente para pressionar a raiz para fora da fossa alveolar. Para eliminar a resistência mesial, insira uma agulha calibre 23 no garfo radicular e levante o molar de forma oclusal. Depois de segurar o molar com força, pegue outra agulha de calibre 23 e force-a na membrana periodontal mesial lingual para criar um intervalo.
Em seguida, use uma agulha calibre 25 e gire lentamente para frente e bucalmente. Se algum obstáculo subjacente impedir a luxação do molar, use uma agulha de calibre 26 para penetrar no ápice da raiz e repetir as operações. Durante a extração final, extraia o dente garantindo que a coroa se eleve acima do plano oclusal e que duas raízes intactas possam ser claramente vistas.
Depois de extrair com sucesso o primeiro molar inferior, aplique algodão seco para parar o sangramento, reposicione a língua, administre analgesia e coloque o mouse em uma almofada de aquecimento de temperatura constante até que ele se recupere da anestesia. O alvéolo dentário imediatamente preenchido com coágulo pós-extração. O processo de cicatrização do alvéolo foi observado durante uma semana.
Alguns ossos trabeculares semelhantes a esponjas foram formados, mas o coágulo permaneceu. No processo de cicatrização, o alvéolo foi preenchido com ossos esponjosos após duas semanas, indicando o término da regeneração. Um regulador mestre nas diferenciações osteoblásticas Sp7 foi amplamente expresso nas células da medula óssea na margem que é o osso formando a frente.
Sob o estado de homeostase, os ossos trabeculares eram consistentes e confluentes com blocos de células da medula óssea polvilhados como ilhas. Uma semana após a cirurgia, numerosas células Sp7 que expressavam preenchiam o alvéolo de extração com osso trabecular recém-formado espalhado ao redor. Com quatro semanas de pós-cirurgia, o quadro se reverteu e passou a se fundir em grande parte ao osso trabecular.
A atividade de Sp7 expressando células declinou para um nível próximo ao estado de homeostase. O também pode ser realizado para demonstrar o processo de regeneração do recém-nascido. Esta técnica pode ajudar os pesquisadores a desvendar os mecanismos subjacentes do processo de cura e regeneração disponíveis, fornecendo um novo modelo murino.
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Visão Geral
Este protocolo apresenta um método detalhado para a extração do primeiro molar mandibular em camundongos, fornecendo um novo modelo murino para o estudo da cicatrização e regeneração do osso maxilar. O estudo analisa o processo de cicatrização após a extração e os mecanismos celulares envolvidos na regeneração óssea.
Componentes Principais do Estudo
Área de Pesquisa
- Regeneração óssea
- Modelos murinos na pesquisa odontológica
- Mecanismos de cicatrização do osso maxilar
Contexto
- Necessidade de modelos consistentes em estudos de regeneração óssea
- Compreensão das implicações clínicas da cicatrização do osso da mandíbula
- Conhecimentos sobre os mecanismos de cicatrização e regeneração
Métodos Utilizados
- Extração do primeiro molar mandibular em camundongos anestesiados
- Uso de agulhas de diferentes calibres para luxação dentária
- Avaliação da cicatrização ao longo de um período de quatro semanas
Resultados Principais
- Técnica de extração bem-sucedida resultando em cicatrização observada ao longo de duas semanas
- Formação de novo osso trabecular e expressão de Sp7 em células da medula óssea
- Redução na expressão de Sp7 indicativa da retomada da homeostase
Conclusões
- O estudo demonstra um método de extração confiável que auxilia na compreensão dos processos de regeneração óssea
- Este modelo contribui com informações valiosas sobre os mecanismos de cicatrização do osso da mandíbula, relevantes para pesquisas biológicas futuras.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O modelo de cicatrização do alvéolo pós-extração do molar mandibular murino fornece uma plataforma padronizada in vivo para investigar a regeneração do osso alveolar e a ossificação intramembranosa. Este modelo permite a desmistificação mecanicista e a validação de alvos em vias de cicatrização óssea, apoiando pesquisas de descoberta em estágios iniciais e pesquisas translacionais na regeneração de tecidos esqueléticos. Sua reprodutibilidade e relevância biológica facilitam decisões de avanço ajustadas ao risco em portfólios pré-clínicos de P&D odontológica e craniofacial.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação de vias osteogênicas e reguladores celulares, como Sp7, em um contexto in vivo controlado.
- Apoia a desmistificação biológica ao fornecer um modelo consistente para validação funcional de alvos em estudos de regeneração óssea.
- Facilita a confiança preditiva na seleção de vias candidatas para reparo de tecido esquelético.
Triagem e Desenvolvimento de Ensaios
- Fornece um sistema biológico validado para avaliar intervenções no reparo ósseo e marcadores moleculares.
- Apóia a padronização e reprodutibilidade de ensaios por meio de pontos terminais cirúrgicos e histológicos consistentes.
- Permite a avaliação quantitativa da formação óssea e da atividade celular após a extração.
Pesquisa Translacional e Pré-Clinica
- Alinha-se com mecanismos relevantes à doença na cicatrização de defeitos do osso maxilar para a exploração translacional de biomarcadores.
- Permite a continuidade desde a descoberta até a validação pré-clínica de estratégias de regeneração óssea.
- Reduz a ambiguidade mecanicista na seleção de modelos pré-clínicos para aplicações odontológicas e craniofaciais.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este modelo está posicionado na interface entre a descoberta inicial e a validação pré-clínica, permitindo testes de hipóteses e estudos mecanicistas em fluxos de trabalho de regeneração óssea.
- Biologia da Descoberta: Apoia a investigação baseada em hipóteses sobre reguladores da osteogênese e da cicatrização óssea.
- Triagem: Fornece pontos finais reprodutíveis para a avaliação de intervenções candidatas e marcadores moleculares.
- Análises: Oferece leituras histológicas e de imunofluorescência quantitativas para análise comparativa.
- Pesquisa Translacional: Conecta descobertas científicas a modelos pré-clínicos relevantes para a reparação do osso maxilar.
- Reutilização Empresarial: Estabelece uma plataforma in vivo reutilizável para pesquisas contínuas sobre regeneração óssea.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva e reduz a ambiguidade mecanicista na pesquisa de cicatrização óssea.
- Valor Operacional: Padroniza procedimentos in vivo e avaliações histológicas para reprodutibilidade.
- Valor Estratégico: Orienta decisões de prosseguir ou não em alvos e vias de regeneração óssea.
- Impacto no Portfólio: Permite a priorização ajustada ao risco de programas de reparo de tecido esquelético.
Considerações de Implementação
- Requer experiência em técnicas cirúrgicas murinas e histologia óssea.
- Necessita de acesso à estereomicroscopia, coloração histológica e infraestrutura de imunofluorescência.
- Exige padronização entre equipes dos protocolos cirúrgicos e analíticos.
- Limitado a modelos mandibulares murinos; não adaptável a outros sistemas conforme a validação atual.
- As limitações práticas incluem requisitos de habilidade técnica e restrições específicas ao modelo.
