Name: O Estabelecimento de um Modelo de Cicatrização de Molares Mandibulares Murinos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-01-13T13:40:00.000+00:00
Duration: 4 min 19 s
Description: Aprenda a extrair o primeiro molar mandibular em camundongos para estudar a cicatrização óssea e regeneração maxilar. Este modelo revela mecanismos celulares e expressão de Sp7 na formação de osso trabecular novo.

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Este trabalho é apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China 81825005 (L.Y.), 82201045 (F.Y.) e 82100982 (F.L.), e pelo Programa de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan 2021JDRC0144 (F.L.), 2022JDRC0130 (F.Y.).

Todos os procedimentos em animais neste estudo foram revisados e aprovados pelo Comitê de Ética da Escola de Estomatologia da China Ocidental, Universidade de Sichuan (WCHSIRB-D-2017-041). Camundongos adultos C57BL/6, obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais), foram utilizados para o presente estudo.
1. Preparo pré-cirúrgico
<ol><li>Preparação do instrumento<ol><li>Prepare várias agulhas de seringas descartáveis (26G, 25G, 23G; ver Tabela de Materiais) para serem usadas como elevadores. Flexionar a cabeça da agulha aproximadamente 20°-40°, como mostra a Figura 1.</li>
		<li>Prepare pinças oftálmicas dentadas como pinças. Certifique-se de que ele se encaixa no tamanho dos molares dos ratos e pode agarrar os molares com firmeza. O tamanho ideal da pinça é mostrado na Figura 1A, B3.</li>
		<li>Obter um elástico (que pode ser arrancado de uma luva médica de látex) para ser usado como abridor de boca, uma placa de espuma ou cortiça como plataforma cirúrgica, um farol para iluminar a área cirúrgica e uma almofada de aquecimento para revitalização pós-operatória. Rasgue uma bola de algodão seca em pequenos pedaços e aplique-a no local cirúrgico se ocorrer sangramento durante o procedimento.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparo anestésico<ol><li>O camundongo pode ser anestesiado por qualquer protocolo anestésico adequado que obtenha anestesia geral confirmada através do método de "pinça dos dedos". Após a anestesia, aplique pomada veterinária nos olhos do rato. LEGENDA: O protocolo anestésico geral preferido poderia ser: indução e manutenção com xilazina (10 mg/kg) e cetamina (100 mg/kg) por via intraperitoneal (IP); Para este estudo, isoflurano e pentobarbital sódico a 1% (50 mg/kg, IP) foram usados para indução e manutenção da anestesia com doses adicionais, conforme necessário.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparo para Desinfecção e Esterilização<ol><li>Desinfete a plataforma de operação e a cobertura aérea ao ar livre com um pulverizador de etanol a 75%. Antes de cada procedimento com camundongo, recomenda-se o uso de um novo conjunto de agulhas descartáveis. NOTA: As pinças dentadas são reutilizáveis e podem ser esterilizadas usando qualquer método preferido, como esterilização a vapor.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Processo cirúrgico
<ol><li>Fixação do rato e sua mandíbula<ol><li>Amarre o rato a uma plataforma cirúrgica em decúbito dorsal com fita adesiva. Fixar duas agulhas de 26 G alinhadas com o plano orbital da orelha e outras duas agulhas de 26 G à vontade abaixo da mandíbula.</li>
		<li>Aplique o elástico ao redor das agulhas e atravesse os incisivos para manter a boca aberta. Puxe levemente a língua para fora e fixe-a sob o elástico oposto ao lado cirúrgico, para evitar que obstrua o campo de visão (Figura 1C).</li>
	</ol></li>
	<li>Eliminando a resistência distal<ol><li>Segure o molar com uma pinça mesialmente, force uma agulha 23 G no osso alveolar bucal da raiz distal e feche um intervalo. NOTA: Este passo deve ser tomado com muita cautela, pois uma agulha que está embutida muito profunda provavelmente quebrará a raiz.</li>
		<li>Em seguida, mude para uma agulha 25G para continuar a expandir o intervalo e progrida delicadamente em direção à área periapical enquanto gira lentamente a agulha para frente e lingualmente (com a posição anatômica do mouse) para pressionar a raiz para fora da fossa alveolar.</li>
	</ol></li>
	<li>Eliminando a resistência mesial<ol><li>Quando houver espaço suficiente, use uma agulha 23 G para inserir no garfo radicular e levantar o molar oclusalmente. Depois de segurar o molar com força, pegue outra agulha 23 G e force-a na membrana periodontal mesial lingual para criar um intervalo.</li>
		<li>Em seguida, substitua por uma agulha de 25 G e gire lentamente para frente e bucalmente. Se algum obstáculo subjacente impedir a luxação do molar, use uma agulha 26 G para penetrar no ápice da raiz e repita as operações.</li>
	</ol></li>
	<li>Extração final<ol><li>Extrair o dente e, durante a extração, certifique-se de que a coroa se eleva acima do plano oclusal e que duas raízes intactas possam ser claramente vistas. OBS: A luxação (luxação) do dente é considerada o momento mais doloroso e angustiante do procedimento. Antes da luxação do dente, a profundidade anestésica deve ser reavaliada pelo teste da pinça dos dedos dos pés e, consequentemente, uma dose moderada de um agente anestésico deve ser administrada, se necessário.</li>
	</ol></li>
	<li>Cuidados pós-operatórios<ol><li>Após a extração do dente, aplicar algodão seco para estancar o sangramento, reposicionar a língua, administrar carprofeno (5 mg/kg) por via subcutânea e colocar o camundongo em uma almofada de aquecimento em temperatura constante até a recuperação da anestesia.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Imagem da mandíbula do camundongo e do alvéolo de extração
<ol><li>Preparação das amostras<ol><li>Eutanásia do camundongo por luxação cervical. Use tesoura oftálmica para cortar os músculos do esqueleto presos à mandíbula e ao arco zigomático. Corte da garganta ao longo da borda inferior da mandíbula até o ramo ascendente e, em seguida, para a parte posterior do côndilo e, em seguida, puxe a mandíbula para baixo e corte ao longo da linha média do incisivo inferior. Dessa forma, as duas mandíbulas separadas são colhidas.</li>
		<li>Realizar fixação, desmineralização e desidratação seguindo o procedimento padrão17. Ao incorporar17, certifique-se de que o plano oclusal esteja paralelo à borda do (consulte Tabela de Materiais). Fixar a mandíbula na parte inferior do, com sua borda inferior torneada (Figura 2). OBS: Este protocolo oferece o plano sagital da região mandibular.</li>
	</ol></li>
	<li>Fixação da amostra no micrótomo<ol><li>Regular a pinça do corpo de prova no micrótomo para projetar o côndilo e o lado da coroa 5°-20° mais, para obter uma imagem integrada da polpa da coroa concomitante com a polpa da raiz (Figura 2).</li>
	</ol></li>
	<li>Preparando as seções OBS: O côndilo é sempre a primeira estrutura anatômica a ser cortada. Quando desaparece, a área molar pode então ser cortada em várias fatias.<ol><li>Mude o intervalo do micrótomo para 5 μm, colete a cada oito cortes e procure dentina na última fatia. Se a dentina da coroa aparecer pela primeira vez sem qualquer dentina apical radicular, ajuste a pinça do espécime para fazer a área da raiz se projetar, e vice-versa.</li>
	</ol></li>
	<li>Coletando as seções NOTA: O ângulo de corte é adequado até que a dentina seja igualmente atingida na coroa e na área apical.<ol><li>Corte nessa direção e observe as fatias ao microscópio até que a polpa dentária apareça tanto na coroa quanto nas raízes. Coletar os cortes quando aparecer um contorno obscuro de molares na superfície da amostra de parafina17.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Mamoun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+socket+etiology%2C+diagnosis%2C+and+clinical+treatment+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Korean+Association+of+Oral+and+Maxillofacial+Surgeons%22%5BJournal%5D)">Dry socket etiology, diagnosis, and clinical treatment techniques.</a> Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons. 44 (2), 52-58 (2018).</li>
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<li>Soundia, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteonecrosis+of+the+jaws+%28ONJ%29+in+mice+after+extraction+of+teeth+with+periradicular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Osteonecrosis of the jaws (ONJ) in mice after extraction of teeth with periradicular disease.</a> Bone. 90, 133-141 (2016).</li>
<li>Araújo, M. G., Silva, C. O., Misawa, M., Sukekava, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+socket+healing%3A+what+can+we+learn%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontology+2000%22%5BJournal%5D)">Alveolar socket healing: what can we learn.</a> Periodontology 2000. 68 (1), 122-134 (2015).</li>
<li>Hojo, H., Ohba, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sp7+Action+in+the+skeleton%3A+its+mode+of+action%2C+functions%2C+and+relevance+to+skeletal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Sp7 Action in the skeleton: its mode of action, functions, and relevance to skeletal diseases.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (10), 5647(2022).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+functions+of+Osterix+are+required+for+bone+growth+and+homeostasis+in+postnatal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Multiple functions of Osterix are required for bone growth and homeostasis in postnatal mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 107 (29), 12919-12924 (2010).</li>
<li>Ito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathological+differences+in+the+bone+healing+processes+between+tooth+extraction+socket+and+femoral+fracture%5BTitle%5D)+AND+%22Bone+Reports%22%5BJournal%5D)">Pathological differences in the bone healing processes between tooth extraction socket and femoral fracture.</a> Bone Reports. 16, 101522(2022).</li>
<li>Vasak, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+bone+apposition+to+hydrophilic+and+hydrophobic+titanium+implant+surfaces%3A+a+histologic+and+histomorphometric+study+in+minipigs%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Oral+Implants+Research%22%5BJournal%5D)">Early bone apposition to hydrophilic and hydrophobic titanium implant surfaces: a histologic and histomorphometric study in minipigs.</a> Clinical Oral Implants Research. 25 (12), 1378-1385 (2014).</li>
<li>Araújo, M. G., Lindhe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dimensional+ridge+alterations+following+tooth+extraction.+An+experimental+study+in+the+dog%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Periodontology%22%5BJournal%5D)">Dimensional ridge alterations following tooth extraction. An experimental study in the dog.</a> Journal of Clinical Periodontology. 32 (2), 212-218 (2005).</li>
<li>Kim, I. -S., Ki, H. -C., Lee, W., Kim, H., Park, J. -B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+systemically+administered+bisphosphonates+on+bony+healing+after+tooth+extraction+and+osseointegration+of+dental+implants+in+the+rabbit+maxilla%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Oral+%26+Maxillofacial+Implants%22%5BJournal%5D)">The effect of systemically administered bisphosphonates on bony healing after tooth extraction and osseointegration of dental implants in the rabbit maxilla.</a> The International Journal of Oral & Maxillofacial Implants. 28 (5), 1194-1200 (2013).</li>
<li>Kanyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connective+tissue+growth+factor+expressed+in+rat+alveolar+bone+regeneration+sites+after+tooth+extraction%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Connective tissue growth factor expressed in rat alveolar bone regeneration sites after tooth extraction.</a> Archives of Oral Biology. 48 (10), 723-730 (2003).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+IFT140+in+early+bone+healing+of+tooth+extraction+sockets%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">The role of IFT140 in early bone healing of tooth extraction sockets.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1188-1197 (2022).</li>
<li>Apaza Alccayhuaman, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FasL+is+required+for+osseous+healing+in+extraction+sockets+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">FasL is required for osseous healing in extraction sockets in mice.</a> Frontiers in Immunology. 12, 678873(2021).</li>
<li>Avivi-Arber, L., Avivi, D., Perez, M., Arber, N., Shapira, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+bone+healing+at+tooth+extraction+sites+in+CD24-deficient+mice%3A+A+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impaired bone healing at tooth extraction sites in CD24-deficient mice: A pilot study.</a> PLoS One. 13 (2), 0191665(2018).</li>
<li>Vieira, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intramembranous+bone+healing+process+subsequent+to+tooth+extraction+in+mice%3A+micro-computed+tomography%2C+histomorphometric+and+molecular+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intramembranous bone healing process subsequent to tooth extraction in mice: micro-computed tomography, histomorphometric and molecular characterization.</a> PLoS One. 10 (5), 0128021(2015).</li>
<li>Min, K. -K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+resveratrol+on+bone-healing+capacity+in+the+mouse+tooth+extraction+socket%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Periodontal+Research%22%5BJournal%5D)">Effects of resveratrol on bone-healing capacity in the mouse tooth extraction socket.</a> Journal of Periodontal Research. 55 (2), 247-257 (2020).</li>
<li>Yu, F., Li, F., Zheng, L., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+controls+of+Sonic+hedgehog+guarantee+fidelity+of+epithelial+adult+stem+cells+trajectory+in+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Epigenetic controls of Sonic hedgehog guarantee fidelity of epithelial adult stem cells trajectory in regeneration.</a> Science Advances. 8 (29), (2022).</li>
<li>Kuroshima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+noncultured+stromal+vascular+fraction+cells+of+adipose+tissue+ameliorates+osteonecrosis+of+the+jaw-like+lesions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Transplantation of noncultured stromal vascular fraction cells of adipose tissue ameliorates osteonecrosis of the jaw-like lesions in mice.</a> Journal of bone and Mineral Research. 33 (1), 154-166 (2018).</li>
<li>Ahel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forces+that+fracture+teeth+during+extraction+with+mandibular+premolar+and+maxillary+incisor+forceps%5BTitle%5D)+AND+%22The+British+Journal+of+Oral+%26+Maxillofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Forces that fracture teeth during extraction with mandibular premolar and maxillary incisor forceps.</a> The British Journal of Oral & Maxillofacial Surgery. 53 (10), 982-987 (2015).</li>
</ol>

Todos os dados e imagens originais estão incluídos neste artigo. Os autores declaram a inexistência de conflitos de interesse.

O modelo de cicatrização de alvéolos murinos é um método importante para desvendar os mecanismos subjacentes na cicatrização e regeneração óssea, resolvendo desafios clínicos. Estudos existentes demonstraram a possibilidade do modelo de extração de incisivos e do modelo de extração de molares superiores, enquanto estudos não utilizaram o modelo de primeiro molar inferior13,17,18. No entanto, os incisivos são cruciais para a vida...

A cicatrização do alvéolo após exodontia é um cenário clínico comum, que pode resultar em complicações inconsequentes, como hemorragia alveolar, alveolite seca ou mesmo osteomielite mandibular sob cicatrização indesejável 1,2,3. Essas comorbidades podem comprometer a qualidade de vida dos pacientes e, pior ainda, desafiar vitalmente a reabilitação protética devido à perda ósseamaciça4. Embora os estágios de cicatrização do alvéolo tenham sido elucidados, eles são inadequados para direcionar o cuidado clínico pós-cirurgia de exodontia quando se deparam com vários desafios prognósticos4.
Múltiplos estudos baseados em modelos animais têm sido conduzidos para obter uma melhor compreensão dos mecanismos subjacentes no processo de cicatrização do alvéolo e evitar as situações acima. A Sp7 é um regulador mestre na diferenciação osteoblástica, desempenhando um papel vital no desenvolvimento do esqueleto, hemostasia ósseae regeneração óssea5,6. Modelos racionais de cicatrização de alvéolos poderiam mostrar a redundância da Sp7 pós-traumática na regeneração óssea. Além disso, diferentemente da consolidação da fratura de ossos longos, apenas um único processo osteogênico, a ossificação intramembranosa, envolve o processo de cicatrização do alvéolo deextração7. Isso torna o modelo de extração dentária animal ideal para o estudo de terapias baseadas em implantes, uma vez que a osseointegração de implantes obedece àmesma regra osteogênica8.
Há décadas, o modelo de exodontia vem sendo realizado em ratos, coelhos e cães, uma vez que essas espécies possuem dentes grandes e convenientes para operar 9,10,11. No entanto, dadas as crescentes demandas por modificação genética e como um fundo genético mais adaptativo aos seres humanos, camundongos estão sendo cada vez mais usados para estabelecer um modelo de extração dentária. A partir daí, os pesquisadores puderam desvendar o papel de uma população celular específica no processo de cicatrização usando camundongos modificados pelo genoma, em vez de observar fenótipos apenas12. Entre os modelos de alvéolos para extração dentária murina, estudos prévios demonstraram o estabelecimento e o processo de cicatrização de alvéolos de extração de dentes maxilares e incisivosmurinos 13,14,15,16. No entanto, o padrão de cicatrização do prognóstico e os momentos de detecção e observação podem diferir entre os protocolos. Isso apela para um critério universal para que os estudiosos estabeleçam um modelo de cura de alvéolos murinos.
Este estudo teve como objetivo constituir um modelo prático de cicatrização de alvéolos murinos para as questões acima. Molares mandibulares em camundongos apresentam características morfológicas distintas em relação aos molares superiores e incisivos, trazendo vantagens e desvantagens únicas. Como os modelos com foco na mandíbula murina são atualmente baseados em vácuo, este protocolo tentou fornecer um método realizado para extrair o primeiro molar inferior em camundongos. Esperamos que este protocolo ilumine os pesquisadores básicos com novas ideias para descobrir os mecanismos subjacentes da cicatrização da cavidade e indicar cuidados clínicos.

<table><tbody><tr><td>23/25/26 de instrumento</td><td>médico de Chengdu Xinjin Shifeng da agulha de G & Instrumentos Co. LTD.</td><td>SB1-074(IV)</td><td></td></tr><tr><td>C57/B6J&nbsp;</td><td>Gempharmatech Experimental Animals Company, Chengdu, China</td> Solução de coloração <td>C57/B6J</td><td></td></tr><tr><td>DAPI&nbsp;</td><td>Beyotime&nbsp;</td><td>Cat#C1005</td><td></td></tr><tr><td>de Incorporação</td><td>CITOTEST Scientific</td><td>80106-1100-16</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Coloração de Hematoxilina e Eosina</td><td>Biosharp</td><td>BL700B</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>RWD Life Science Co., Ltd</td><td>R510-22-10</td><td></td></tr><tr><td>Masson s Kit de Mancha Tricrômica</td><td>Solarbio</td><td>G1340</td><td></td></tr><tr><td>Microtome&nbsp;</td><td>Leica</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodium</td><td>Huaxia Chemical Reagent Co., Ltd</td><td>2018042001</td><td></td></tr><tr><td>Coelho policlonal&nbsp;</td><td>anti-Sp7&nbsp;</td><td>Abcam Cat# ab22552</td><td></td></tr><tr><td>Pinças</td><td>Chengdu Xinjin Shifeng Aparelhos Médicos & Instrumentos Co. LTD.</td><td>SB2-115</td><td></td></tr></tbody></table>

o estabelecimento de um modelo de cicatrização de molares mandibulares murinos

The Establishment of a Murine Mandibular Molar Extraction Socket Healing Model

Este estudo introduz o desenvolvimento de um modelo de extração molar na mandíbula murina para fornecer um modelo viável para o estudo da regeneração óssea alveolar e ossificação intramembranosa. Camundongos C57/J6 foram utilizados para extrair o primeiro molar inferior para estabelecer este modelo. Eles foram sacrificados e as mandíbulas bilaterais retiradas em 1 e 4 semanas pós-cirurgia, respectivamente. Subsequente coleta estereoscópica seriada, avaliação histológica e coloração por imunofluorescência foram realizadas para demonstrar o sucesso da cirurgia. Imediatamente após a cirurgia, as imagens estereoscópicas mostraram um alvéolo de extração vazio. A hematoxilina e a eosina (H&E) em 1 semana e a coloração de Masson em 4 semanas de pós-operatório mostraram que a área da raiz original estava parcial e totalmente preenchida por trabéculas ósseas, respectivamente. A coloração por imunofluorescência mostrou que, em comparação com o lado da homeostase, a expressão de Sp7 aumentou com 1 semana de pós-operatório, sugerindo osteogênese vigorosa na fossa alveolar. Todos esses resultados demonstraram um modelo praticável de cicatrização de alvéolos para extração dentária murina. Estudos futuros revelando os mecanismos de cicatrização de defeitos maxilares ou cicatrização de alvéolos poderão adotar esse método.

Para elucidar o uso prático desse método, o primeiro molar inferior direito de dois camundongos C57BL/6 saudáveis (3 meses de idade, ambos fêmeas) foi extraído e acompanhado por 1 semana e 4 semanas, respectivamente. As mandíbulas esquerdas não danificadas foram usadas como controles saudáveis. A Figura 1A mostra as características específicas do aparelho cirúrgico, incluindo agulhas 26-23 G e um tweezer oftálmico dentado. A agulha 26 G é removida e dobrada. A agulha de 25 G é dobrada a apro...

Este protocolo demonstra passo-a-passo detalhes de como extrair o primeiro molar inferior no camundongo. Ele fornece um método alternativo para pesquisadores com foco na cicatrização e regeneração dos ossos maxilares.

O Estabelecimento de um Modelo de Cicatrização de Molares Mandibulares Murinos

This study introduces the development of a molar extraction model in the murine mandible to provide a practicable model for studying alveolar bone ...

Este protocolo fornece um modelo murino de extração de molares mandibulares que raramente é introduzido nos estudos de regeneração óssea disponíveis. O desenvolvimento de um modelo murino de extração de molares mandibulares é necessário como uma mandíbula mais comparável e consistente entre os diferentes grupos de intervenção. As implicações dessa técnica não se estendem para o tratamento de nenhuma doença.No entanto, pode ajudar a cicatrização clínica e regeneração óssea da mandíbula a longo prazo, ajudando a rever os mecanismos subjacentes a este processo. Esta técnica foi desenvolvida para auxiliar os estudos, revelando os mecanismos de cura e regeneração disponíveis. Lamentavelmente, este método não pode ser aplicado a outros sistemas.Comece a eliminar a resistência distal do camundongo anestesiado segurando o molar com uma pinça medialmente. Em seguida, forçar uma agulha de calibre 23 no osso alveolar bucal da raiz distal e fazer um intervalo. Em seguida, mude para uma agulha calibre 25 para continuar a expansão do intervalo.Progredir delicadamente em direção à área periapical enquanto gira lentamente a agulha para frente e angulosamente para pressionar a raiz para fora da fossa alveolar. Para eliminar a resistência mesial, insira uma agulha calibre 23 no garfo radicular e levante o molar de forma oclusal. Depois de segurar o molar com força, pegue outra agulha de calibre 23 e force-a na membrana periodontal mesial lingual para criar um intervalo.Em seguida, use uma agulha calibre 25 e gire lentamente para frente e bucalmente. Se algum obstáculo subjacente impedir a luxação do molar, use uma agulha de calibre 26 para penetrar no ápice da raiz e repetir as operações. Durante a extração final, extraia o dente garantindo que a coroa se eleve acima do plano oclusal e que duas raízes intactas possam ser claramente vistas.Depois de extrair com sucesso o primeiro molar inferior, aplique algodão seco para parar o sangramento, reposicione a língua, administre analgesia e coloque o mouse em uma almofada de aquecimento de temperatura constante até que ele se recupere da anestesia. O alvéolo dentário imediatamente preenchido com coágulo pós-extração. O processo de cicatrização do alvéolo foi observado durante uma semana.Alguns ossos trabeculares semelhantes a esponjas foram formados, mas o coágulo permaneceu. No processo de cicatrização, o alvéolo foi preenchido com ossos esponjosos após duas semanas, indicando o término da regeneração. Um regulador mestre nas diferenciações osteoblásticas Sp7 foi amplamente expresso nas células da medula óssea na margem que é o osso formando a frente.Sob o estado de homeostase, os ossos trabeculares eram consistentes e confluentes com blocos de células da medula óssea polvilhados como ilhas. Uma semana após a cirurgia, numerosas células Sp7 que expressavam preenchiam o alvéolo de extração com osso trabecular recém-formado espalhado ao redor. Com quatro semanas de pós-cirurgia, o quadro se reverteu e passou a se fundir em grande parte ao osso trabecular.A atividade de Sp7 expressando células declinou para um nível próximo ao estado de homeostase. O também pode ser realizado para demonstrar o processo de regeneração do recém-nascido. Esta técnica pode ajudar os pesquisadores a desvendar os mecanismos subjacentes do processo de cura e regeneração disponíveis, fornecendo um novo modelo murino.

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Aqui nós apresentamos um protocolo cirúrgico nos coelhos com o objetivo avaliar materiais da substituição do osso nos termos de capacidades da regeneração do osso. Usando cilindros PEEK fixados em crânios de coelhos, osteocondução, osteoindução, osteogênese e vasculogênese induzida pelos materiais podem ser avaliados tanto em animais vivos ou eutanasiados.

Modelo calvarial de aumento ósseo em coelho para avaliação do crescimento ósseo e neovascularização em materiais de substituição óssea

Este artigo descreve um procedimento passo a passo para o estabelecimento de um modelo de camundongos com fístula oronasal. A fístula oronasal foi criada empregando-se cautério oftalmológico aquecido para lesar a porção da linha média do palato duro, resultando na formação de uma abertura entre as cavidades oral e nasal.

Estabelecimento de um modelo de fístula oronasal em camundongos

Este artigo apresenta um protocolo simplificado para estabelecer um modelo de pulpite em camundongos usando um mordaça bucal inovador, seguido de análise histológica subsequente.

Estabelecimento de um modelo de exposição à polpa murina com uma nova mordaça bucal para pesquisa de pulpite

Demonstramos passo-a-passo um protocolo de movimentação ortodôntica manejável operado em um modelo maxilar murino. Com a explicação explícita de cada passo e demonstração visual, os pesquisadores podem dominar esse modelo e aplicá-lo às suas necessidades experimentais com algumas modificações.

O estabelecimento de um modelo ortodôntico murino maxilar

Este é um relato de um modelo experimental de periimplantite induzida por ligadura em camundongos. Descrevemos todos os passos cirúrgicos, desde o manejo pré e pós-operatório dos animais, extrações, colocação de implantes e periimplantite induzida por ligadura.

Modelo Experimental de Periimplantite Induzida por Ligadura em Camundongos

Este protocolo apresenta um método abrangente e eficiente para análise do reparo ósseo mandibular. Descrevemos uma técnica reprodutível para fratura mandibular não estabilizada em modelo de camundongo, permitindo a análise do processo de reparo ósseo endocondral com mínimo dano tecidual e perda óssea.

Técnica menos invasiva para fratura mandibular não estabilizada em modelos de camundongos

O objetivo deste estudo foi padronizar uma abordagem cirúrgica segura e reprodutível para realizar uma amputação transversa completa da mandíbula em Ambystoma mexicanum , visando o estudo da regeneração do tecido craniofacial.

Desenho e Padronização de um Modelo de Lesão Mandibular para o Estudo da Regeneração de Tecido Craniofacial no Modelo Ambystoma mexicanum

Transplante renal em ratos é um procedimento tecnicamente desafiador que requer cuidados pós-operatórios cuidado e tratamento para o sucesso.

Murino Procedimento de Transplante Renal

Este vídeo demonstra como usar um modelo rápido e confiável para o estudo de processos Pathobiological e fisiopatológicas da isquemia miocárdica.

LAD Ligadura: Um Modelo murino de Infarto do Miocárdio

Este protocolo de vídeo demonstra um método para a geração de...

Produção de transgênicos Xenopus laevis Por Restrição Integração Mediada por Enzima e Transplante Nuclear

Aprenda a extrair o primeiro molar mandibular em camundongos para estudar a cicatrização óssea e regeneração maxilar. Este modelo revela mecanismos celulares e expressão de Sp7 na formação de osso trabecular novo.

O Estabelecimento de um Modelo de Cicatrização de Molares Mandibulares Murinos

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