Name: Inspeção rápida da qualidade do índigo naturalis por espalhamento múltiplo de luz (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-18T12:10:00.000+00:00
Duration: 3 min 40 s
Description: Aprenda a avaliar a qualidade do Indigo Naturalis por espalhamento múltiplo de luz. Este método rápido e não invasivo permite controlar a autenticidade de medicamentos tradicionais chineses sem alterar a amostra.

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O trabalho deseja agradecer o apoio da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (No. 82173976), Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Chave (No. 2018YFC1707205) e Laboratório Chave Estadual de Medicamentos Inovadores e Equipamentos Farmacêuticos de Alta Economia de Energia, Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Jiangxi (No. GZSYS202003).

1. Preparação da amostra de ensaio
<ol><li>Configure quatro lotes diferentes de pó de ervas Indigo Naturalis para o teste. Passar cada amostra pela sétima peneira e nona peneira sucessivamente e coletar a amostra entre a sétima e a nona peneira5. NOTA: O tamanho médio da abertura da sétima peneira é de 125 μm ± 5,8 μm. O tamanho médio da abertura da nona peneira é de 75 μm ± 4,1 μm.</li>
	<li>Pesar com precisão 0,2 g da amostra (pó Indigo Naturalis) em um papel de pesagem e reserve-a.</li>
</ol>2. Adição da amostra
<ol><li>Construa um suporte de ferro e coloque um anel de ferro com um funil de 5 cm de diâmetro.</li>
	<li>Use uma pipeta para adicionar 20 mL de água pura ao frasco de vidro da amostra (diâmetro inferior 2,6 cm, altura 6 cm). Coloque o frasco de vidro de amostra diretamente sob o funil para que a borda inferior do funil fique nivelada com a boca do frasco. NOTA: Limpe o exterior do frasco para injetáveis de vidro de amostra com uma toalha de papel limpa e não abrasiva e inspecione a superfície de vidro em busca de marcas visíveis. Se houver, troque o frasco de vidro. Tenha cuidado para não derramar ao adicionar líquido.</li>
	<li>Solte a amostra a uma altura de 80 cm da borda inferior do funil para que ela possa deslizar livremente ao longo do funil para dentro do frasco de amostra.</li>
</ol>3. Operação do instrumento
<ol><li>Ligue o instrumento Turbiscan Lab e aqueça-o por 30 min.</li>
	<li>Crie o arquivo. Clique no botão Criar arquivo no menu superior (ou na função Novo arquivo no menu Arquivo) para criar um novo arquivo de medição vazio. Defina seu nome e salve o local (por padrão, a pasta de dados está localizada em: "C:/users/admin/Formulaction/FAnalyser/Data".</li>
	<li>Clique no botão Mostrar temperatura do laboratório de turbiscan no menu superior para definir a temperatura alvo do instrumento para 25 °C. NOTA: A temperatura do instrumento é influenciada pela temperatura ambiente, por isso tenha cuidado para ajustar a temperatura ambiente.</li>
	<li>Clique em Verificação de programas no menu superior para entrar no programa de análise de instalação. Adicione o programa à lista e, na barra de tarefas, adicione 30 s como um ciclo e 21 varreduras à sequência de análise. Selecione este programa de análise para todas as medições subsequentes.</li>
	<li>Mova o frasco para injetáveis de amostra preparado para o sistema de medição. Depois de configurar o programa, clique em Iniciar para iniciar a medição. NOTA: Tenha cuidado para não agitar a garrafa de vidro ao se mover e apenas movê-la ligeiramente.</li>
	<li>Após a aquisição dos dados, clique na lista de parâmetros calculados para calcular automaticamente a ETI.</li>
</ol>

<ol><li>Li, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+water+test+in+the+identification+of+traditional+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medicine+Modern+Distance+Education+of+China%22%5BJournal%5D)">The application of water test in the identification of traditional Chinese medicine.</a> Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 19 (23), 153-155 (2021).</li>
<li>Ye, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+application+effect+of+water+test+method+in+identification+of+traditional+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Heilongjiang+Medicine+Journal%22%5BJournal%5D)">Analysis of application effect of water test method in identification of traditional Chinese medicine.</a> Heilongjiang Medicine Journal. 33 (02), 283-285 (2020).</li>
<li>Yang, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+natural+dye+to+herbal+medicine%3A+a+systematic+review+of+chemical+constituents%2C+pharmacological+effects+and+clinical+applications+of+indigo+naturalis%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">From natural dye to herbal medicine: a systematic review of chemical constituents, pharmacological effects and clinical applications of indigo naturalis.</a> Chinese Medicine. 15 (1), 127(2020).</li>
<li>Chen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+value+of+water+test+method+in+the+identification+of+Chinese+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Traditional+Chinese+Medicine+Management%22%5BJournal%5D)">The application value of water test method in the identification of Chinese medicine.</a> Journal of Traditional Chinese Medicine Management. 30 (10), 133-134 (2022).</li>
<li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+application+of+a+rapid+quality+inspection+method+for+Indigo+Naturalis+based+on+quantitative+portrayal+of+water+testing+process%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmacologica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Establishment and application of a rapid quality inspection method for Indigo Naturalis based on quantitative portrayal of water testing process.</a> Acta Pharmacologica Sinica. 57 (11), 3411-3418 (2022).</li>
<li>Mengual, O., Meunier, G., Cayre, I., Puech, K., Snabre, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+instability+of+concentrated+dispersions+by+a+new+optical+analyser%3A+the+TURBISCAN+MA+1000%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+A%3A+Physicochemical+and+Engineering+Aspects%22%5BJournal%5D)">Characterisation of instability of concentrated dispersions by a new optical analyser: the TURBISCAN MA 1000.</a> Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. 152 (1), 111-123 (1999).</li>
<li>Olatunji, O. N., Du, J., Hintz, W., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+particle+sedimentation+analysis+in+sterically-stabilized+TiO2+particles+stability+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Powder+Technology%22%5BJournal%5D)">Application of particle sedimentation analysis in sterically-stabilized TiO2 particles stability assessment.</a> Advanced Powder Technology. 27 (4), 1325-1336 (2016).</li>
<li>Ferrentino, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fining+of+red+wine+monitored+by+multiple+light+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Fining of red wine monitored by multiple light scattering.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (27), 5523-5530 (2017).</li>
<li>Ramezani, M., Ferrentino, G., Morozova, K., Scampicchio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+light+scattering+measurements+for+online+monitoring+of+milk+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">Multiple light scattering measurements for online monitoring of milk fermentation.</a> Foods. 10 (7), 1582(2021).</li>
<li>Yang, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+evaluate+the+particle+growth+and+sedimentation+of+dispersed+polymer+microsphere+profile+control+system+based+on+multiple+light+scattering%5BTitle%5D)+AND+%22Powder+Technology%22%5BJournal%5D)">A new approach to evaluate the particle growth and sedimentation of dispersed polymer microsphere profile control system based on multiple light scattering.</a> Powder Technology. 315, 477-485 (2017).</li>
<li>Zhang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+non-high-risk+acute+promyelocytic+leukemia+with+realgar-indigo+naturalis+formula+%28RIF%29+and+all-trans+retinoid+acid+%28ATRA%29%3A+study+protocol+for+a+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Trials%22%5BJournal%5D)">Treatment of non-high-risk acute promyelocytic leukemia with realgar-indigo naturalis formula (RIF) and all-trans retinoid acid (ATRA): study protocol for a randomized controlled trial.</a> Trials. 21 (1), 7(2020).</li>
<li>Sugimoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+efficacy+and+safety+of+oral+Qing-Dai+in+patients+with+ulcerative+colitis%3A+a+single-center+open-label+prospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Digestion%22%5BJournal%5D)">Clinical efficacy and safety of oral Qing-Dai in patients with ulcerative colitis: a single-center open-label prospective study.</a> Digestion. 93 (3), 193-201 (2016).</li>
<li>Lin, Y. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+assessment+of+patients+with+recalcitrant+psoriasis+in+a+randomized%2C+observer-blind%2C+vehicle-controlled+trial+using+indigo+naturalis%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Clinical assessment of patients with recalcitrant psoriasis in a randomized, observer-blind, vehicle-controlled trial using indigo naturalis.</a> Archives of Dermatology. 144 (11), 1457-1464 (2008).</li>
<li>Sun, Q., Leng, J., Tang, L., Wang, L., Fu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+review+of+the+chemistry%2C+pharmacokinetics%2C+pharmacology%2C+clinical+applications%2C+adverse+events%2C+and+quality+control+of+indigo+naturalis%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive review of the chemistry, pharmacokinetics, pharmacology, clinical applications, adverse events, and quality control of indigo naturalis.</a> Frontiers in Pharmacology. 12, 664022(2021).</li>
<li>Yang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+and+analysis+of+the+commodity+quality+of+Indigo+Naturalis+herbs+in+Beijing+area%5BTitle%5D)+AND+%22Lishizhen+Medicine+and+Materia+Medica+Research%22%5BJournal%5D)">Investigation and analysis of the commodity quality of Indigo Naturalis herbs in Beijing area.</a> Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 23 (07), 1787-1788 (2012).</li>
<li>Yao, Z. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+of+thirty-eight+batches+of+indigo+naturalis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chengdu+University+of+TCM%22%5BJournal%5D)">Comparative study of thirty-eight batches of indigo naturalis.</a> Journal of Chengdu University of TCM. 34 (02), 86-88 (2011).</li>
<li>Bai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+indigo+and+indirubin+in+indigo+naturalis+by+HPLC%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Chinese+Medicine%22%5BJournal%5D)">Determination of indigo and indirubin in indigo naturalis by HPLC.</a> Modern Chinese Medicine. 12 (08), 27-29 (2010).</li>
</ol>

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

De acordo com a medicina tradicional chinesa, Indigo Naturalis tem o poder de limpar o calor e desintoxicação, resfriar o sangue, eliminar manchas, purgar o fogo, e parar a convulsão. Baseado em ensaios clínicos randomizados duplo-cegos controlados11,12,13, o Indigo Naturalis é eficaz no tratamento da psoríase, retocolite ulcerativa e leucemia promielocítica aguda, além de seu tratamento tradicional de tosse e catarro, sintomas hemorrágicos, feridas e inchaços,<s...

Na medicina tradicional chinesa, durante o curso do tratamento da doença, a eficácia clínica dos medicamentos e a segurança do curso do tratamento são diretamente impactadas pela qualidade da medicina fitoterápica chinesa. Utilizando tecnologia de identificação de ponta, pode-se avaliar a eficácia da fitoterapia chinesa e garantir a segurança do usuário. O método de teste de água fitoterápico chinês refere-se à imersão das ervas em água ou solvente, determinando rápida e precisamente a autenticidade do medicamento, observando as mudanças de cor, tamanho e forma1.
Foi originalmente uma boa escolha para a identificação da medicina chinesa. No entanto, a desvantagem do método tradicional de teste de água é que a precisão e a sensibilidade de distinguir a autenticidade da medicina chinesa são baixas devido à subjetividade da observação a olho nu2. Um dos principais materiais medicinais utilizados no método de teste da água é o Indigo Naturalis, considerado um remédio eficaz para hipertermia pediátrica, psoríase, leucemia e retocolite ulcerativa3. O índigo Naturalis genuíno flutua na superfície da água, e a água não fica azul escuro depois de tremer. No entanto, o falso Indigo Naturalis tem partículas que afundam, e a água ficará azul escuro depois de tremer4. Seu princípio é devido ao índigo, indirrubina e outros componentes orgânicos hidrofóbicos e facilmente flutuáveis de alta qualidade Indigo Naturalis. Pelo contrário, devido à baixa matéria orgânica, grande quantidade de cal e textura pesada, algumas partículas dopadas com falso Indigo Naturalis afundarão rapidamente5. No entanto, este método é apenas uma simples identificação qualitativa, e limita a rápida identificação da autenticidade da medicina fitoterápica chinesa e falha em revelar as mudanças de Indigo Naturalis na água.
A tecnologia de espalhamento múltiplo de luz é uma tecnologia que pode medir a varredura de sinal de luz multiângulo com base em um laser que passa pela amostra. A luz incidente será espalhada quando penetrar na amostra ou encontrar partículas. Se a luz espalhada penetrar através da amostra, forma-se um sinal luminoso de transmissão; Se a concentração da amostra for alta, a luz será refletida pelas partículas, formando um sinal de retroespalhamento luminoso. As mudanças na intensidade da luz refletem as mudanças na concentração e no tamanho das partículas na preparação líquida6. Os múltiplos instrumentos de espalhamento de luz podem analisar com rapidez e precisão fenômenos como emulsificação, floculação, precipitação e ruptura de suspensão, emulsão e espuma líquida por tecnologia de espalhamento múltiplo de luz, bem como analisar quantitativamente características como a taxa de ocorrência dos fenômenos acima.
A tecnologia de espalhamento múltiplo de luz demonstrou benefícios significativos no monitoramento da estabilidade de partículas7, clarificação de vinho tinto8 e controle de qualidade da fermentação do leite9. Usando essa tecnologia, o método tradicional de teste de água da Indigo Naturalis pode ser intuitivo, quantitativo e científico. Portanto, com base no princípio da tecnologia de espalhamento múltiplo de luz, este estudo estabeleceu um método rápido de avaliação da qualidade do Indigo Naturalis, tomando o índice de estabilidade (IST) de Turbiscan da amostra como índice de controle de qualidade (Figura 1).

<table><tbody><tr><td>Balança analítica (1/10.000)</td><td>Sartorious, Alemanha</td><td>BSA224S&nbsp;</td><td>www.sartorius.com.cn</td></tr><tr><td>Funil</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co. LTD</td><td>Diâmetro 5 cm</td><td>www.cdkelongchem.com</td></tr><tr><td>Indigo Naturalis S1</td><td>Xianyou, Fujian</td><td>20210501</td><td></td></tr><tr><td>Indigo Naturalis S2</td><td>Yaan, Sichuan</td><td>20201102</td><td></td></tr><tr><td>Indigo Naturalis S3</td><td>Xianyou, Fujian</td><td>20161012</td><td></td></tr><tr><td>Indigo Naturalis S4</td><td>Xianyou, Fujian</td><td>20180305</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Anel de ferro</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co. LTD</td> <td>/</td> <td>www.cdkelongchem.com</td></tr><tr><td>Suporte de ferro</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co. LTD</td> <td>/</td> <td>www.cdkelongchem.com</td></tr><tr><td>Medidor de água ultra-pura Mili-Q</td><td>Milipore, EUA</td><td>Mili-Q</td><td>www.merckmillipore.com</td></tr><tr><td>Nona peneira</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co. LTD</td><td>Tamanho médio da abertura 75 &micro; m</td><td>www.cdkelongchem.com</td></tr><tr><td>Frasco de amostra</td><td>French Formulaction Company</td><td>Diâmetro inferior 2,6 cm, altura 6 cm</td><td>www.formulaction.com</td></tr><tr><td>Sétima peneira</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co. LTD</td><td>Tamanho médio da abertura 125 &micro; m</td><td>www.cdkelongchem.com</td></tr><tr><td>Instrumento de espalhamento de luz múltipla Turbisoft Lab</td><td>Empresa francesa de formulação</td><td>Turbisoft Lab 2.3.1.125 Analisador 1.3.5</td><td>www.formulaction.com</td></tr><tr><td>Papel de pesagem</td><td>Chengdu Kelong Chemical Co. LTD</td> <td>/</td> <td>www.cdkelongchem.com</td></tr></tbody></table>

inspeção rápida da qualidade do índigo naturalis por espalhamento múltiplo de luz

Fast Inspection of Quality of Indigo Naturalis by Multiple Light Scattering

O controle de qualidade da medicina fitoterápica chinesa é um componente crucial da pesquisa e desenvolvimento da medicina fitoterápica chinesa. Diante dos desafios da modernização e internacionalização da fitoterapia chinesa, é urgente estabelecer procedimentos completos e eficazes para a identificação da qualidade da fitoterapia chinesa, e há uma necessidade urgente de novas técnicas analíticas e de teste que sejam eficientes, precisas e ambientalmente corretas. 
O espalhamento múltiplo de luz é um método analítico e de ponta que pode avaliar com precisão e rapidez a qualidade da fitoterapia chinesa sem alterar a natureza ou o estado da amostra ou usar reagentes orgânicos. Indigo Naturalis é considerado um bom remédio para hipertermia pediátrica, psoríase, leucemia e colite ulcerosa. Neste estudo, o processo de adição do pó de Indigo Naturalis em água foi registrado precisamente usando um instrumento de espalhamento múltiplo de luz. 
As medidas qualitativas e quantitativas do instrumento podem ser usadas para capturar com precisão a trajetória geral e o comportamento de afundamento do pó de Indigo Naturalis em água e para estabelecer um método de avaliação rápida da qualidade do Indigo Naturalis com espectrogramas de transmissão e retroespalhamento da amostra como indicadores qualitativos e índice de estabilidade como indicador quantitativo. A técnica analítica baseada em espalhamento múltiplo de luz fornece um método rápido, preciso, ecológico e ecológico para a avaliação da qualidade do Indigo Naturalis e apoia o desenvolvimento e a transformação do Indigo Naturalis de alta qualidade.

As figuras 2A-D correspondem a S1, S2, S3 e S4 do Indigo Naturalis, respectivamente. A é de alta qualidade Indigo Naturalis, mostrando a mesma transmitância de luz em qualquer altura dentro de 0-10 min, que é muito estável. B é o Indigo Naturalis comum, e sua transmitância de luz flutua ligeiramente com a mudança do tempo e é geralmente estável. C e D são produtos falsificados e inferiores. Pode haver duas condições nos espectrogramas de transmissão do falso...

Aqui, apresentamos um método de avaliação da qualidade baseado em uma técnica de espalhamento múltiplo de luz para avaliar a qualidade do Indigo Naturalis.

Inspeção rápida da qualidade do índigo naturalis por espalhamento múltiplo de luz

Quality control of Chinese herbal medicine is a crucial component of Chinese herbal medicine research and development. Faced with the challenges of ...

O protocolo pode avaliar com precisão e rapidez a qualidade da medicina chinesa sem alterar a natureza da amostra ou usar reagentes orgânicos. A principal vantagem desta técnica fornece um método rápido, preciso e para avaliação quantitativa e apoia o desenvolvimento e a transformação da medicina chinesa de alta qualidade. Acreditamos que este método será útil no campo do controle de qualidade da medicina tradicional chinesa, particularmente na avaliação da autenticidade.Comece selecionando quatro lotes distintos de pó de ervas Indigo naturalis para teste. Para cada amostra, passe sucessivamente pela sétima e nona peneiras e colete o pó que fica entre essas duas peneiras. Agora pese com precisão 0,2 gramas do pó coletado em um pedaço de papel de pesagem e reserve essa quantidade medida para uso posterior.Em seguida, monte um suporte de ferro e coloque um anel de ferro com um funil de cinco centímetros de diâmetro sobre ele. Pipetar 20 mililitros de água pura para a garrafa de vidro da amostra e, em seguida, colocar a garrafa de vidro da amostra diretamente sob o funil, garantindo que a borda inferior do funil se alinhe com a boca da garrafa. Solte a amostra a uma altura de 80 centí

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