Instilação não invasiva de lipopolissacarídeo intratraqueal em camundongos

Nosso protocolo propõe um novo método de liberação não invasiva de LPS da traqueia para o pulmão, com maior precisão. As pessoas que estão tentando este método pela primeira vez devem colocar muito esforço em encontrar a posição da traqueia. Para preparar a plataforma de intubação, passe a corda pelos dois orifícios e amarre suas extremidades às pequenas saliências no topo do riser.

Em seguida, prenda dois elásticos em cada extremidade do clipe de papel e tape-os nas costas do riser. Finalmente, fixe o riser na base em um ângulo de 90 graus. Monte a cânula em uma caneta de cânula e acenda a luz da caneta.

Em seguida, desinfete a pinça cirúrgica pequena e a pipeta de Pasteur com álcool a 70%. Para preparar a solução do composto de teste, adicione três miligramas de lipopolissacarídeo, ou LPS, em um mililitro de pH 7,2 PBS. Em seguida, dissolva 10 miligramas de pentobarbital sódico em um mililitro de soro fisiológico normal e filtre a solução usando um filtro de seringa de 0,45 micrômetro.

Coloque o mouse anestesiado na plataforma de intubação. Em seguida, fixe os dentes dianteiros superiores com a barbante e os dois antepés com os elásticos. Usando uma pinça, puxe a língua para fora e segure-a.

Empurre a cânula lentamente ao longo da boca até a epiglote mandibular. Localize a traqueia com a luz da caneta da cânula e insira lentamente a cânula nela. Em seguida, retire a caneta de intubação, deixando a cânula dentro.

Insira a pipeta Pasteur na junta da cânula e pressione o cabeçote. Após a intubação endotraqueal bem-sucedida, usando uma microseringa de cabeça plana, instilar a solução de LPS preparada a três miligramas por quilograma de dose através da cânula. Depois de terminar, retire a microseringa e a cânula.

Remova o mouse da plataforma de intubação e coloque-o em uma gaiola separada para recuperar. Observe o estado respiratório do camundongo até que ele se recupere e recupere a consciência. 12 horas após a instilação traqueal do LPS, a expressão de uma citocina inflamatória, TNF-alfa, e a relação peso seco-úmido do pulmão foram avaliadas e comparadas com outros métodos de instilação.

Os níveis séricos de TNF-alfa no grupo intubação orofaríngea não invasiva estavam significativamente aumentados em comparação com o grupo controle branco. A relação peso seco/úmido do pulmão também foi aumentada, atingindo o mesmo nível do grupo intubação traqueal cirúrgica. É importante não coçar a traqueia no processo de encontrar a localização da traqueia.

A técnica também pode ser usada para liberar outras drogas que precisam chegar ao pulmão de forma não invasiva.