Name: Cultura Primária de Células-Tronco da Polpa Dentária (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-05T13:50:00.000+00:00
Duration: 3 min 45 s
Description: Aprenda o método de cultura de explante para isolar células-tronco da polpa dentária homogêneas, livres de células endoteliais e pericitos. Esta técnica avança a medicina regenerativa e terapias personalizadas para regeneração óssea.

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Reconhecemos o apoio financeiro à AK do Departamento de Pesquisa em Saúde (DHR), ICMR, Govt. da Índia (DHR-NRI Grant # R.12015/01/2022-HR). SR recebeu financiamento do ICMR, Govt. da Índia (Grant # 2020-7593/SCR-BMS) e PS recebeu bolsa do CSIR, Govt. da Índia. Também somos gratos à Sra. Sandhya Tokhi e à Sra. Bhupinder Kaur pela assistência na citometria de fluxo e ao núcleo central de instrumentação sofisticada (CSIC) e ao PGIMER, Chandigarh por fornecer suporte de infraestrutura.

Estabelecendo a cultura primária de células-tronco da polpa dentária

<ol><li>Bhattacharyya, S., Kumar, A., Lal Khanduja, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voyage+of+stem+cell+toward+terminal+differentiation%3A+a+brief+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochimica+et+Biophysica+Sinica%22%5BJournal%5D)">The voyage of stem cell toward terminal differentiation: a brief overview.</a> Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 44 (6), 463-475 (2012).</li>
<li>Prentice, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Adult stem cells.</a> Circulation Research. 124 (6), 837-839 (2019).</li>
<li>Raik, S., Kumar, A., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+cell-free+therapeutic+approach%3A+Role+of+stem+cell+%26%2334%3Bsoup-ernatant%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+and+Applied+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Insights into cell-free therapeutic approach: Role of stem cell &#34;soup-ernatant&#34.</a> Biotechnology and Applied Biochemistry. 65 (2), 104-118 (2018).</li>
<li>Rodriguez-Fuentes, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+current+clinical+applications%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells current clinical applications: a systematic review.</a> Archives of Medical Research. 52 (1), 93-101 (2021).</li>
<li>Yamazaki, K., Kawabori, M., Seki, T., Houkin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+trials+of+stem+cell+treatment+for+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Clinical trials of stem cell treatment for spinal cord injury.</a> International Journal of Molecular Sciences. 21 (11), 3994(2020).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+spectrum+of+secretome+regulates+the+relative+hepatogenic+potential+of+mesenchymal+stem+cells+from+bone+marrow+and+dental+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Molecular spectrum of secretome regulates the relative hepatogenic potential of mesenchymal stem cells from bone marrow and dental tissue.</a> Scientific Reports. 7 (1), 15015(2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+cues+modulate+the+neurogenic+potential+of+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">Secretome cues modulate the neurogenic potential of bone marrow and dental stem cells.</a> Molecular Neurobiology. 54 (6), 4672-4682 (2017).</li>
<li>Kumar, A., Kumar, V., Rattan, V., Jha, V., Bhattacharyya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Secretome+proteins+regulate+comparative+osteogenic+and+adipogenic+potential+in+bone+marrow+and+dental+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimie%22%5BJournal%5D)">Secretome proteins regulate comparative osteogenic and adipogenic potential in bone marrow and dental stem cells.</a> Biochimie. 155, 129-139 (2018).</li>
<li>Kumar, A., Bhattacharyya, S., Rattan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+uncontrolled+freezing+on+biological+characteristics+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Effect of uncontrolled freezing on biological characteristics of human dental pulp stem cells.</a> Cell Tissue Bank. 16 (4), 513-522 (2015).</li>
<li>Raik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+post-thaw+quality+of+dental+mesenchymal+stromal+cells+after+long-term+cryopreservation+by+uncontrolled+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+Biochemistry+and+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Assessment of post-thaw quality of dental mesenchymal stromal cells after long-term cryopreservation by uncontrolled freezing.</a> Applied Biochemistry and Biotechnology. 191 (2), 728-743 (2020).</li>
<li>Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+human+dental+pulp+stem+cells+%28DPSCs%29+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 97 (25), 13625-13630 (2000).</li>
<li>Tsutsui, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+advances+to+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Cloning%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: advances to applications.</a> Stem Cells and Cloning. 13, 33-42 (2020).</li>
<li>Huang, G. T. -J., Gronthos, S., Shi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+derived+from+dental+tissues+vs.+those+from+other+sources%3A+their+biology+and+role+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dental+Research%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells derived from dental tissues vs. those from other sources: their biology and role in regenerative medicine.</a> Journal of Dental Research. 88 (9), 792-806 (2009).</li>
<li>La Noce, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+state+of+the+art+and+suggestions+for+a+true+translation+of+research+into+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Dentistry%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: state of the art and suggestions for a true translation of research into therapy.</a> Journal of Dentistry. 42 (7), 761-768 (2014).</li>
<li>Xiao, L., Tsutsui, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+human+dental+pulp+cells-derived+spheroids+in+serum-free+medium%3A+stem+cells+in+the+core%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Characterization of human dental pulp cells-derived spheroids in serum-free medium: stem cells in the core.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2624-2636 (2013).</li>
<li>Kumar, A., Yun, H., Funderburgh, M. L., Du, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+therapy+for+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Regenerative therapy for the cornea.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 87, 101011(2022).</li>
<li>Gandia, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dental+pulp+stem+cells+improve+left+ventricular+function%2C+induce+angiogenesis%2C+and+reduce+infarct+size+in+rats+with+acute+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human dental pulp stem cells improve left ventricular function, induce angiogenesis, and reduce infarct size in rats with acute myocardial infarction.</a> Stem Cells. 26 (3), 638-645 (2008).</li>
<li>Yong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+angiogenic+ability+between+SHED+and+DPSC+in+a+mice+model+with+critical+limb+ischemic%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of the angiogenic ability between SHED and DPSC in a mice model with critical limb ischemic.</a> Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 19 (4), 861-870 (2022).</li>
<li>Zhang, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+dental+pulp+stem+cell+transplantation+in+a+rat+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of dental pulp stem cell transplantation in a rat model of Alzheimer's disease.</a> Neural Regeneration Research. 16 (5), 893-898 (2021).</li>
<li>Kabir, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imperative+role+of+dental+pulp+stem+cells+in+regenerative+therapies%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Nigerian+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Imperative role of dental pulp stem cells in regenerative therapies: a systematic review.</a> Nigerian Journal of Surgery. 20 (1), 1-8 (2014).</li>
<li>Kumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cell+secretome+ameliorates+d-galactose+induced+accelerated+aging+in+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Biochemistry+and+Function%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cell secretome ameliorates d-galactose induced accelerated aging in rat model.</a> Cell Biochemistry and Function. 40 (5), 535-545 (2022).</li>
<li>Hirata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multifaceted+therapeutic+benefits+of+factors+derived+from+dental+pulp+stem+cells+for+mouse+liver+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multifaceted therapeutic benefits of factors derived from dental pulp stem cells for mouse liver fibrosis.</a> Stem Cells Translational Medicine. 5 (10), 1416-1424 (2016).</li>
<li>Fujii, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((regeneration+by+human+dental+pulp+stem+cells+using+a+helioxanthin+derivative+and+cell-sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">regeneration by human dental pulp stem cells using a helioxanthin derivative and cell-sheet technology.</a> Stem Cell Research & Therapy. 9 (1), 24(2018).</li>
<li>Ferrua, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+has+dental+pulp+stem+cells+isolation+been+conducted%3F+A+scoping+review%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Oral+Research%22%5BJournal%5D)">How has dental pulp stem cells isolation been conducted? A scoping review.</a> Brazilian Oral Research. 31, e87(2017).</li>
<li>Pilbauerova, N., Soukup, T., Suchankova Kleplova, T., Suchanek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+isolation%2C+amplification+and+characterization+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Biologica%22%5BJournal%5D)">Enzymatic isolation, amplification and characterization of dental pulp stem cells.</a> Folia Biologica. 65 (3), 124-133 (2019).</li>
<li>Tatullo, M., Marrelli, M., Shakesheff, K. M., White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+pulp+stem+cells%3A+function%2C+isolation+and+applications+in+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dental pulp stem cells: function, isolation and applications in regenerative medicine.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 9 (11), 1205-1216 (2015).</li>
<li>Hilkens, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+isolation+methodology+on+stem+cell+properties+and+multilineage+differentiation+potential+of+human+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of isolation methodology on stem cell properties and multilineage differentiation potential of human dental pulp stem cells.</a> Cell and Tissue Research. 353 (1), 65-78 (2013).</li>
<li>Hendijani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Explant+culture%3A+An+advantageous+method+for+isolation+of+mesenchymal+stem+cells+from+human+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Explant culture: An advantageous method for isolation of mesenchymal stem cells from human tissues.</a> Cell Proliferation. 50 (2), e12334(2017).</li>
<li>Aryal Ac, S., Islam, M. S., Samsudin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+the+effect+of+a+time+delay+on+the+characteristics+and+survival+of+dental+pulp+stem+cells+from+extracted+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Investigation of the effect of a time delay on the characteristics and survival of dental pulp stem cells from extracted teeth.</a> Archives of Oral Biology. 119, 104896(2020).</li>
<li>Langenbach, F., Handschel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+dexamethasone%2C+ascorbic+acid+and+%CE%B2-glycerophosphate+on+the+osteogenic+differentiation+of+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effects of dexamethasone, ascorbic acid and β-glycerophosphate on the osteogenic differentiation of stem cells in vitro.</a> Stem Cell Research & Therapy. 4, 117(2013).</li>
<li>Jaiswal, N., Haynesworth, S. E., Caplan, A. I., Bruder, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteogenic+differentiation+of+purified%2C+culture-expanded+human+mesenchymal+stem+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 64 (2), 295-312 (1997).</li>
<li>Bernar, A., Gebetsberger, J. V., Bauer, M., Streif, W., Schirmer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+alizarin+red+S+assay+by+enhancing+mineralization+of+osteoblasts%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Optimization of the alizarin red S assay by enhancing mineralization of osteoblasts.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (1), 723(2022).</li>
<li>Coe, C. L., Lubach, G. R., Schneider, M. L., Dierschke, D. J., Ershler, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+rearing+conditions+alter+immune+responses+in+the+developing+infant+primate%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early rearing conditions alter immune responses in the developing infant primate.</a> Pediatrics. 90, 505-509 (1992).</li>
<li>Bakopoulou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+impact+of+two+different+isolation+methods+on+the+osteo%2Fodontogenic+differentiation+potential+of+human+dental+stem+cells+derived+from+deciduous+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Assessment of the impact of two different isolation methods on the osteo/odontogenic differentiation potential of human dental stem cells derived from deciduous teeth.</a> Calcified Tissue International. 88 (2), 130-141 (2011).</li>
<li>Arthur, A., Rychkov, G., Shi, S., Koblar, S. A., Gronthos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+human+dental+pulp+stem+cells+differentiate+toward+functionally+active+neurons+under+appropriate+environmental+cues%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Adult human dental pulp stem cells differentiate toward functionally active neurons under appropriate environmental cues.</a> Stem Cells. 26 (7), 1787-1795 (2008).</li>
<li>Kim, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoblastic%2Fcementoblastic+and+neural+differentiation+of+dental+stem+cells+and+their+applications+to+tissue+engineering+and+regenerative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+B%2C+Reviews%22%5BJournal%5D)">Osteoblastic/cementoblastic and neural differentiation of dental stem cells and their applications to tissue engineering and regenerative medicine.</a> Tissue Engineering. Part B, Reviews. 18 (3), 235-244 (2012).</li>
<li>Ge, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distal+C+terminus+of+CaV1.2+channels+plays+a+crucial+role+in+the+neural+differentiation+of+dental+pulp+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Distal C terminus of CaV1.2 channels plays a crucial role in the neural differentiation of dental pulp stem cells.</a> PLoS One. 8 (11), e81332(2013).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflito de interesses financeiro ou não financeiro.

As células-tronco depositaram as esperanças de curar inúmeras doenças, devido à sua plasticidade, robustez, propriedades imunomoduladoras, mecanismos parácrinos e eficiências de homing. O tecido pulpar dentário é considerado a fonte mais potente e valiosa de células-tronco, com plasticidade eminente e capacidade regenerativa. Aqui, demonstramos o isolamento de DPSCs, utilizando o método de cultura de explante amplamente adotado, no qual as células migram de pedaços de tecido pulpar ou explantes para crescer em uma cultur...

As células-tronco adultas tornaram-se uma poderosa ferramenta terapêutica para tratamentos e terapias direcionadas a células devido à sua plasticidade, mecanismos parácrinos e propriedades imunomoduladoras 1,2,3. Os dados encorajadores de estudos pré-clínicos baseados em células-tronco inspiraram os pesquisadores a trabalhar pela tradução da bancada para a beira do leito. O tipo de células-tronco usadas para terapia com células-tronco desempenha um papel significativo nos resultados bem-sucedidos. Em estudos pré-clínicos e clínicos, a fonte mais amplamente relatada de células-tronco mesenquimais (CTMs) continua sendo a medula óssea 4,5. No entanto, as principais desvantagens do uso de células-tronco derivadas da medula óssea (BMSCs) incluem sua população rara, procedimentos altamente invasivos para isolamento e sua capacidade limitada de expansão. Portanto, fontes alternativas de MSCs estão sendo exploradas. Nesse sentido, os tecidos dentários, com sua facilidade de acessibilidade, enorme plasticidade, alto potencial regenerativo e alta capacidade proliferativa, passaram a ser considerados uma fonte alternativa rica e potencial de células-tronco 6,7,8,9,10.
As células-tronco da polpa dentária (CPEP) foram o primeiro tipo de células-tronco dentárias a serem isoladas e caracterizadas por Gronthos em 200011. As DPSCs chamaram a atenção para aplicações de engenharia de tecidos devido à sua alta taxa de proliferação, potencial de diferenciação significativo, facilidade de acessibilidade com cultura sem esforço e, o mais importante, sua capacidade de serem obtidas de um dente descartado sem qualquer preocupação ética12. As limitações impostas por outras fontes de células-tronco, como BMSCs e células-tronco derivadas de tecido adiposo (ADSCs), em seu isolamento e capacidades inadequadas de autorrenovação são contornadas pelas DPSCs13. As DPSCs humanas podem ser obtidas a partir de dentes decíduos humanos, dentes permanentes, dentes do siso, dentes decíduos esfoliados (SHEDs) e papilas apicais. Além disso, as CPDP também podem ser isoladas de dentes supranumerários, que geralmente são descartados14. As DPSCs expressam marcadores associados à crista neural e têm o potencial de se diferenciar em células neuronais tanto in vitro quanto in vivo15. Além de seu potencial neurogênico, as DPSCs podem se diferenciar em outras linhagens celulares, como osteogênica, condrogênica, adipogênica, hepática e miogênica, quando submetidas a condições específicasde diferenciação 13. Assim, essas células multipotentes possuem grande potencial para terapia baseada em células e podem ser empregadas para a regeneração de vários tecidos. Estudos também relataram o potencial papel das CPDP na reconstrução dacórnea16, reparo do infarto do miocárdio17, e seu potencial papel terapêutico em doenças como isquemia demembro18, Alzheimer19, Parkinson20 eenvelhecimento21. Portanto, as células-tronco derivadas do tecido dentário podem ser usadas não apenas para a regeneração dentária, mas também para o reparo e regeneração de órgãos não dentários, como olhos16, corações17, fígados22, ossos23 etc.
Existem dois métodos específicos para o isolamento de uma população de MSC do tecido pulpar - digestão enzimática e cultura de explante24,25. O estabelecimento bem-sucedido de culturas primárias sem qualquer diferença significativa na quantidade e propriedades das DPSCs foi relatado por ambos os métodos26. Neste estudo, focamos no isolamento de DPSCs pelo método do explante27, uma vez que esse método gera DPSCs sem contaminação das células hematopoiéticas e endoteliais, em comparação com a digestão enzimática que pode resultar em contaminação por fibroblastos28.

<table><tbody><tr><td>Placa de cultura de células de 6 poços</td><td>Costar</td><td>3516</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>Coloração azul de Alcian Kit</td><td>de coloração de condrócitos EZstain, HiMedia</td><td>CCK029</td><td></td></tr><tr><td>coloração vermelha de alizarina</td><td>S Sigma-Aldrich</td><td>TMS-008</td><td>Coloração osteogênica</td></tr><tr><td>Coquetel de antibióticos</td><td>Himedia</td><td>A002-5X50ML</td><td>Para evitar a contaminação da cultura</td></tr><tr><td>Ácido ascórbico</td><td>Himedia</td><td>TC094-25G</td><td>Indução condrogênica</td></tr><tr><td>B27 suplemento</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>Para indução neural</td></tr><tr><td>bFGF (Fator de Crescimento de Fibroblastos básico)</td><td>Gibco</td><td>PHG0024</td><td>Para indução neural</td></tr><tr><td>CD 105</td><td>BD-Pharmingen</td><td>560839</td><td></td></tr><tr><td>CD 35</td><td>Biolegend</td><td>343604</td><td></td></tr><tr><td>CD 45</td><td>Biolegend</td><td>304006</td><td></td></tr><tr><td>CD 73</td><td>Biolegend</td><td>344016</td><td></td></tr><tr><td>CD 90</td><td>Biolegend</td><td>328107</td><td>Caracterização</td></tr><tr><td>cloreto de cetilpiridínio (CPC)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1104006</td><td>para extração de vermelho de alizarina</td></tr><tr><td>Dexametasona 21-fosfato dissódico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1159-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered</td><td>Saline Himedia</td><td>TS1006-5L</td><td>Para fins de lavagem</td></tr><tr><td>EGF (Fator de Crescimento Epidérmico)</td><td>Gibco</td><td>PHG0311</td><td>Para indução hepática e neural&nbsp;</td></tr><tr><td>EVOS Microscópio LED</td><td>Invitrogen</td><td></td><td>Para&nbsp; imagem de fluorescência</td></tr><tr><td>Coloração EZ Kit de coloração de condrócitos</td><td>Himedia</td><td>CCK029-1KT</td><td>Kit de coloração de condrócitos</td></tr><tr><td>FACS Citômetro de fluxo de canto</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>Para célula caracterização</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Gibco</td><td>16000044</td><td>para cultura primária</td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2442</td><td>Para cultura de células</td></tr><tr><td>Suplemento G5</td><td>Gibco</td><td>17503012</td><td>Para indução neural</td></tr><tr><td>HGF (Fator de Crescimento de Hepatócitos)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1404</td><td>Para indução hepática</td></tr><tr><td>HLA-DR</td><td>Biolegend</td><td>307605</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; TGF humano-&beta; 3</td><td>Peprotech</td><td>#100-36E-10U</td><td></td></tr><tr><td>Insulina-Transferrina-Ácido Selenous premix</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I3146</td><td>Para indução hepática</td></tr><tr><td>ITS premix</td><td>Corning</td><td>354350</td><td></td></tr><tr><td>LDL Uptake Assay kit</td><td>Abcam</td><td>ab133127</td><td>Para caracterização hepática</td></tr><tr><td>Baixa glicose DMEM</td><td>Gibco</td><td>11885-084</td><td>Para indução hepática</td></tr><tr><td>MAP2 anticorpo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4403</td><td>Para caracterização neural</td></tr><tr><td>Suplemento N2</td><td>Gibco</td><td>17502048</td><td>Para indução neural</td></tr><tr><td>Mídia Basal Neural</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>Para indução neural</td></tr><tr><td>NFM anticorpo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N4142</td><td>Para caracterização neural</td></tr><tr><td>Microscópio Nikon Elipse TS100</td><td>Nikon</td><td></td><td>Para&nbsp; Óleo de imagem de fluorescência</td></tr><tr><td>Red O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01391-250Ml</td><td>Coloração adipogênica</td></tr><tr><td>Oncostatina M</td><td>R& D Systems</td><td>295-OM-010/CF</td><td>Para indução hepática</td></tr><tr><td>Petridish</td><td>Tarson</td><td>460090-90MM</td><td>Para corte de tecidos</td></tr><tr><td>Fosfato de potássio monobásico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>15655-100G</td><td>Indução osteogênica</td></tr><tr><td>Propan-2-ol</td><td>Thermo</td><td>Fisher Q13827</td><td>Para extração de óleo Red O</td></tr><tr><td>Solução de piruvato de sódio</td><td>Sigma life sciences</td><td>S8636-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4049</td><td>Para passagem de células</td></tr><tr><td>Whatman papel de filtro</td><td>merck</td><td>WHA1001325</td><td>papel de filtro</td></tr><tr><td>&alpha;- Mídia essencial mínima (&alpha;-MEM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0643-10X 1L</td><td>Mídia para cultura primária</td></tr><tr><td>&beta;-glicerofosfato sal dissódico hidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422-50G</td><td></td></tr></tbody></table>

cultura primária de células-tronco da polpa dentária

Primary Culture of Dental Pulp Stem Cells

A polpa dentária humana representa um reservatório promissor de células-tronco multipotentes com competência regenerativa preeminente que pode ser colhido de um dente extraído. A origem ecto-mesenquimal derivada da crista neural das células-tronco da polpa dentária (DPSCs) confere um alto grau de plasticidade que se deve aos seus benefícios multifacetados no reparo e regeneração de tecidos. Existem várias maneiras práticas de coletar, manter e proliferar células-tronco adultas sendo investigadas para seu uso na medicina regenerativa. Neste trabalho, demonstramos o estabelecimento de uma cultura primária de células-tronco mesenquimais a partir de tecido dentário pelo método de cultura de explante. As células isoladas foram fusiformes e aderidas à superfície plástica da placa de cultura. A caracterização fenotípica dessas células-tronco mostrou expressão positiva de marcadores de superfície celular recomendados pela sociedade internacional de terapia celular (ISCT) para MSC, como CD90, CD73 e CD105. Além disso, a expressão insignificante de marcadores hematopoiéticos (CD45) e endoteliais (CD34) e menos de 2% de expressão de marcadores HLA-DR confirmaram a homogeneidade e pureza das culturas de DPSC. Ilustramos ainda sua multipotência com base na diferenciação para linhagens adipogênicas, osteogênicas e condrogênicas. Também induzimos essas células a se diferenciarem em células hepáticas e neuronais, adicionando meios de estimulação correspondentes. Este protocolo otimizado ajudará no cultivo de uma população altamente expansível de células-tronco mesenquimais para serem utilizadas em laboratório ou para estudos pré-clínicos. Protocolos semelhantes podem ser incorporados em configurações clínicas para a prática de tratamentos baseados em DPSC.

Aqui, descrevemos como os pesquisadores podem estabelecer uma cultura pura de DPSCs por meio do método de explante 6,7,8,9,10 e induzi-los a várias linhagens para estabelecer a pureza da cultura para aplicações a jusante.
Estabelecemos uma cultura primária de DPSCs a partir do pequeno tecido de polpa extraído do terceiro mo...

Este artigo fornece um guia passo a passo para estabelecer uma cultura primária de células-tronco de polpa dentária usando o método de cultura de explante e caracterização dessas células com base nas diretrizes do ICSCRT. As células isoladas por este protocolo podem ser consideradas como células-tronco mesenquimais para futuras aplicações.

Cultura Primária de Células-Tronco da Polpa Dentária

The human dental pulp represents a promising multipotent stem cell reservoir with pre-eminent regenerative competence that can be harvested from an ...

Estamos investigando o potencial das DPSCs em aplicações baseadas em células e livres de células para modelos de doenças, enquanto estudamos os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na regeneração de tecidos. Além disso, estamos explorando o papel dos fatores secretores derivados de células-tronco no controle do destino das células-tronco e na promoção da regeneração dos tecidos. Nosso foco atual é o uso de técnicas de cultura 3D para obter uma compreensão mais profunda dos mecanismos moleculares, mudanças genéticas e epigenéticas associadas à regeneração de tecidos.Estamos incorporando técnicas avançadas, como sequenciamento de última geração, sequenciamento de RNA e sequenciamento de chip para desvendar domínios regulatórios que regem vários processos celulares. Usando métodos de explante para isolar DPSC, uma população homogênea de células-tronco pode ser colhida com eficiência, livre de outras células como endoteliais e pericitos. Esses tipos de células permanecem na cultura de células quando as DPSCs são estabelecidas usando procedimentos enzimáticos.Nossa pesquisa usando DPSCs como modelo celular para triagem de drogas e regeneração de tecidos pode desenvolver novas terapias, medicina personalizada avançada e ter implicações de longo alcance na medicina regenerativa, incluindo reconstrução craniofacial e regeneração óssea in vivo após extração dentária. Atualmente, estamos investigando como as DPSCs podem ser usadas para tratar defeitos ósseos, como ossos longos e defeitos da calvária. Além disso, estamos explorando as potenciais implicações terapêuticas de moléculas secretoras derivadas de DPSCs em vários modelos de doenças, incluindo neurodegeneração e glaucoma.

primary-culture-of-dental-pulp-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O método descrito o isolamento e caracterização de células pulpares humanas estaminais (hDPSCs)...

Isolamento, caracterização e comparativa Diferenciação de células-tronco da polpa dentária Derivado de dentes permanentes usando dois métodos diferentes

Nós fornecemos os protocolos para avaliação de células-tronco mesenquimais isoladas de polpa dentária e interações de células de câncer de próstata baseadas em métodos diretos e indiretos co-cultura. Médio de condição e membranas de trans-bem são apropriadas analisar a atividade indireta parácrina. Semeando diferencialmente manchado células juntos é um modelo adequado para a interação célula-célula direto.

Isolamento de células-tronco mesenquimais de tecido pulpar e co-cultura com células cancerosas para estudar suas interações

Aqui nós apresentamos um protocolo para isolamento de células-tronco polpa Dental humana e propagação a fim de avaliar a expressão da proteína príon durante o processo de diferenciação neuronal.

Isolamento, propagação e expressão de proteína príon durante a diferenciação Neuronal de células-tronco humanas polpa Dental

Este protocolo enfatiza a extração, cultura e preservação de células-tronco multipotentes da polpa dentária por meio da digestão enzimática. Além disso, demonstra seu potencial de diferenciação em osteoblastos, adipócitos e condrócitos, destacando a importância da precisão e consistência no processo.

Isolamento, Cultura e Caracterização de Células-Tronco da Polpa Dentária de Dentes Humanos Decíduos e Permanentes

Este protocolo demonstra como manter saudável, indiferenciada-tronco embrionárias humanas (ES) células.

Cultura e Manutenção de células estaminais embrionárias humanas

Hepatócitos primários proporcionar uma ferramenta valiosa para avaliar as funções bioquímicas, moleculares, e metabólicas em um sistema fisiologicamente relevante experimental. Nós descrevemos um protocolo confiável para rato em perfusão de fígado in situ, que sempre gera hepatócitos viáveis ​​até to1.0 ×...

Isolamento e cultura primária de células hepáticas de ratos

Um método simples é descrito para a indução de células epiteliais para mesenquimal (EMT) em uma variedade de tipos de células. Métodos de análise de células em EMT estados por imunocitoquímica estão incluídos.

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Nesta publicação, é descrito um procedimento rápido e conveniente para o isolamento e cultura de células acinares pancreáticas primárias do pâncreas murino. Este método constitui uma ferramenta valiosa para o estudo da fisiologia das células primárias normais do pâncreas fresco / não transformada exócrinas.

Isolamento e Cultura do mouse primárias células pancreáticas acinares

Aqui detalhamos um método para germes dentários cultura em fatias mandíbula usando um cortador de tecidos. Este método permite acesso exclusivo ao dente durante o desenvolvimento, proporcionando uma excelente oportunidade para a manipulação e linhagem de rastreamento, não está disponível através de métodos de cultura mais tradicionais.

O método de cultura fatia para acompanhar o desenvolvimento de germes dentários Em Explant Cultura

O isolamento e cultura de uma população pura de células satélites quiescentes, uma população de células estaminais musculares, é essencial para a compreensão da haste músculo biologia celular e regeneração, bem como o transplante de células estaminais para terapias em distrofia muscular e outras doenças degenerativas.

Isolamento, cultura e transplante de células musculares satélite

Aprenda o método de cultura de explante para isolar células-tronco da polpa dentária homogêneas, livres de células endoteliais e pericitos. Esta técnica avança a medicina regenerativa e terapias personalizadas para regeneração óssea.

Cultura Primária de Células-Tronco da Polpa Dentária

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