Análise da Herança Epigenética Transgeracional em C. elegans Usando um Fluorescente Reporter e Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP)

A pesquisa em nosso laboratório examina como as proteínas associadas à cromatina, as modificações das histonas e os pequenos fatores da via do RNA trabalham juntos no contexto do desenvolvimento e da herança epigenética transgeracional. O ensaio de herança de RNA, usando um repórter GFP, tornou-se uma ferramenta muito poderosa. Este protocolo descreve como padronizar a preparação, pontuação e passagem de vermes, e a preparação de amostras de ChIP, que podem ajudar a gerar resultados reprodutíveis.

Um dos desafios experimentais ao estudar transgenes expressos em germinação é isolar os efeitos na linha germinativa do animal. Atualmente, estamos usando animais inteiros para ChIP, mas no futuro gostaríamos de desenvolver ensaios para examinar a cromatina, especificamente na linha germinativa. Nosso laboratório está interessado na metilação de histonas e proteínas que reconhecem essas marcas.

No futuro, gostaríamos de investigar a interação entre esses leitores de cromatina e pequenas vias de RNA no contexto da herança de RNAi em transgenes e da regulação de sequências endógenas.