Avaliação do impacto de um novo sistema de processador de células de resfriamento na instalação de isolamento de células de ilhotas
August 11th, 2023
O protocolo aqui descreve um sistema de processador de célula de resfriamento personalizado que é compatível com uma sala limpa de boas práticas de fabricação (GMP) para melhorar a viabilidade da célula pós-processamento.
Olá, sou o Dr.Jihad, o Diretor do Laboratório Center P. O objetivo hoje deste vídeo é mostrar um processador de células refrigerado adaptado usado na instalação de isolamento de ilhós sem impacto no meio ambiente, bem como na recuperação das células. Comece pré-resfriando os gradientes de densidade leve e pesado e o kit do processador de células a quatro graus Celsius.
Em seguida, prepare o processador celular pré-resfriando por 45 minutos. Insira o kit do processador de célula pré-resfriado no processador de célula para o fabricante de gradiente de camisa dupla refrigerado a etanol padrão. Conecte as duas câmaras de vidro e coloque-as em uma agitação magnética Prenda o tubo entre as duas câmaras. Fresco.
O fabricante de gradiente com um resfriador de circulação de etanol a zero graus Celsius após o resfriamento. Defina a velocidade da bomba para 150 mililitros por minuto para encher a câmara com 130 mililitros de gradiente de densidade pesada no fundo do saco. Uma vez que o gradiente pesado esteja na bolsa, feche o hemostático entre duas câmaras.
Em seguida, adicione 130 mililitros de alta densidade ao béquer frontal e 140 mililitros de gradientes de baixa densidade ao béquer traseiro. Prenda o hemostático entre as duas câmaras e, em seguida, defina uma velocidade de bomba de 50 mililitros por minuto para criar um gradiente contínuo entre duas câmaras. Em seguida, prepare as células do revestimento leuconucleico mononuclear humano para purificação a partir de vários revestimentos Buffy anônimos coletados de resíduos de sangue total fornecidos pelo banco de sangue.
Após a separação, adicione cinco mililitros de gravidade específica semelhante à suspensão de células mononucleares de baixa densidade em 95 mililitros de meio gradiente de alta densidade em uma bolsa de transferência usando uma bomba peristáltica ajustada para 25 mililitros por minuto. Carregue o gradiente pré-formado com 30 mililitros de suspensão de célula mononuclear usando uma sonda térmica pré-calibrada. Continuamente. Meça a temperatura dentro do processador da célula usando um termopar digital conectado a uma sonda térmica estéril.
Monitore a temperatura de gradientes e células durante o processo. No final do carregamento de gradiente, defina o processador da célula em 537 G para minimizar o calor gerado pelo rotor. Desligue o processador da célula para permitir que o sistema hidráulico retorne aos níveis anteriores à execução e libere ar.
Em seguida, reinicie o processador da célula a 537 G e adicione 130 mililitros de gradientes de densidade pesados e 140 mililitros de baixa densidade para criar um gradiente de densidade contínuo a uma taxa de fluxo de 50 mililitros por minuto e 4,3 graus Celsius. Em seguida, carregue 30 mililitros de suspensão de célula de revestimento Buffy em cima de um gradiente de densidade de carga a uma taxa de fluxo de 25 mililitros por minuto e seis graus Celsius. Após o carregamento da célula, adicione 50 mililitros de solução de lavagem no processador da célula após cinco minutos.
Colete o gradiente fiado em 12 garrafas a uma taxa de fluxo de 100 mililitros por minuto e tubo de enchimento de cinco graus Celsius, um com 100 mililitros de mídia de lavagem e 150 mililitros de células. Em seguida, encha os tubos de dois a 12 com 225 mililitros de mídia de lavagem e 25 mililitros de células. A avaliação de partículas transportadas pelo ar em ambiente de sala limpa, grau C e grau B mostrou que não havia excesso de partículas transportadas pelo ar de 0,5 e cinco mícrons de acordo com os padrões de sala limpa, GMP grau C, grau B e BSL três.
Nenhuma diferença significativa nas temperaturas do gradiente foi observada durante as primeiras quatro etapas, com ambos os processadores mantendo aproximadamente 4,5 graus Celsius. No entanto, após a centrifugação e durante as etapas de coleta, a temperatura aumentou no início e no final das etapas de coleta para ambos os processadores. Além disso, os processadores de células resfriadas afetam a purificação da célula humana.
A eficiência e a viabilidade foram determinadas após a centrifugação. A temperatura das células coletadas subiu ligeiramente para 8,5 graus Celsius. A amostragem ativa de ar e a triagem de esterilidade não mostraram crescimento.
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Visão Geral
Este estudo concentra-se em um sistema de processamento de células com resfriamento personalizado projetado para uso em uma sala limpa GMP para melhorar a viabilidade das células após o processamento. O método descreve as etapas para preparar e usar o processador, que melhora a recuperação de células mononucleares humanas purificadas de produtos residuais sanguíneos.
Principais Componentes do Estudo
Área de Pesquisa
- Viabilidade celular
- Protocolos de sala limpa
- Processamento de células humanas
Fundamentos
- Importância de manter baixas temperaturas no processamento de células
- Desafios na recuperação de células viáveis após o processamento
- Conformidade com os padrões GMP em ambientes de processamento de células
Métodos Utilizados
- Centrifugação de densidade gradiente
- Células do manto buffy mononuclear humano
- Monitoramento de temperatura com termopar digital
Principais Resultados
- Recuperação eficiente de células sem aumentos significativos de temperatura
- Condições estéreis mantidas sem excedência de partículas no ar
- Viabilidade e pureza asseguradas das células humanas processadas após a centrifugação
Conclusões
- O protocolo efetivamente melhora a viabilidade e os resultados de processamento das células humanas
- Este sistema contribui para avanços nas metodologias de processamento de células relevantes para aplicações clínicas
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Maintaining optimal temperature control during cell processing is critical for preserving cell viability and function in cell therapy manufacturing. The introduction of a cooled cell processor system directly addresses the risk of thermal stress during centrifugation, supporting higher recovery and viability of therapeutic cell populations. This capability strengthens the reliability of cell isolation workflows and aligns with GMP cleanroom requirements for advanced therapy production.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables robust assessment of cell viability and function post-processing for downstream biological studies.
- Reduces confounding thermal effects, supporting clearer interpretation of cell-based assays.
- Improves confidence in the biological relevance of isolated cell populations for target validation.
Screening & Assay Development
- Facilitates preparation of high-viability cell samples for assay development and screening platforms.
- Supports reproducible and standardized cell isolation, minimizing batch-to-batch variability.
- Ensures quantitative recovery metrics for reliable compound evaluation in cell-based assays.
Translational & Preclinical Research
- Aligns cell processing conditions with clinical manufacturing standards, supporting translational continuity.
- Enables risk-adjusted advancement of cell therapy candidates by preserving functional cell attributes.
- Provides a platform for validating process changes without compromising GMP cleanroom compliance.
Pipeline & Workflow Integration
This cooled cell processor system integrates into the cell therapy pipeline from early cell isolation through preclinical and translational research, supporting both discovery and manufacturing environments.
- Discovery Biology: Enhances hypothesis testing by ensuring cell integrity during isolation.
- Screening: Delivers reproducible, high-viability cell preparations for assay readiness.
- Analytics: Provides quantitative temperature and viability readouts for process monitoring.
- Translational Research: Maintains GMP-aligned conditions for preclinical and clinical cell therapy workflows.
- Enterprise Reuse: Offers a scalable, minimally invasive cooling solution adaptable across cell processing platforms.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in cell-based assays and reduces mechanistic ambiguity from thermal artifacts.
- Operational Value: Standardizes temperature control, supporting reproducibility and scalability in cell processing.
- Strategic Value: Enables better go/no-go decisions by ensuring high-quality cell products for downstream applications.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of cell therapy candidates by improving process reliability.
Implementation Considerations
- Requires expertise in cell processing and cleanroom operations.
- Needs integration with temperature monitoring and digital thermocouple instrumentation.
- Demands adherence to GMP cleanroom standards for sterility and particulate control.
- Adaptable to various cell types and density gradient protocols with minimal modification.
- Limited by the availability of donor material for validation in certain regions.
