9 de fevereiro de 2024
Este protocolo apresenta um conjunto de ensaios funcionais de neutrófilos para ser usado como um método de triagem para cobrir funções de diferentes vias de sinalização. O protocolo inclui uma avaliação inicial e simples da viabilidade celular, pureza, produção de espécies reativas de oxigênio, migração em tempo real, fagocitose e uma sugestão preliminar de armadilhas extracelulares para neutrófilos.
O NeutroFun Screen Protocol fornece um grupo de testes funcionais que usam produtos químicos de baixo custo e podem ser realizados em um único experimento a partir de neutrófilos frescos. Isso permite uma avaliação preliminar de algumas das principais funções dos neutrófilos para orientar estudos de seguimento mais trabalhosos e caros. A pesquisa de neutrófilos emprega várias condições de modulação.
Como citocinas, peptídeos, produtos microbianos e estímulos físicos. Adicionalmente, analisa citometria de fluxo, multiômica, dispositivos microfluídicos e imunocitoquímica. A extensa marca de condições e ensaios usados em combinação torna o fluxo de trabalho da pesquisa de neutrófilos longo, trabalhoso e caro.
Normalmente, nessas reduções, no número de condições testadas ou no número de testes realizados, os métodos atuais de última geração exigem extensas configuráveis, muitas células e longos procedimentos de preparação. Nosso protocolo NeutroFun Screen oferece uma abordagem mais rápida e econômica para avaliar a funcionalidade celular em comparação com outros métodos. Isso é conseguido combinando várias análises dentro do protocolo, mantendo a precisão e abrangência nos resultados.
Dois pesquisadores realizaram esse fluxo de trabalho simultaneamente para uma rápida visão geral da função dos neutrófilos. O pesquisador um isola os PMNs, ajusta a concentração e incuba os sistemas de ativação, enquanto o pesquisador dois prepara materiais para os casos subsequentes. Em seguida, o pesquisador um realiza fagocitose e ensaios colorimétricos de NBT, enquanto o pesquisador dois realiza testes de migração em tempo real e de lâminas de NBT.
O protocolo do teste NeutroFun oferece um conjunto de testes funcionais para neutrófilos, utilizando produtos químicos de baixo custo em um único experimento. Este protocolo facilita uma avaliação preliminar das principais funções dos neutrófilos, auxiliando no planejamento de estudos mais abrangentes.
A triagem rápida e multiplexada das funções dos neutrófilos é essencial para a descoberta precoce de fármacos em imunologia, permitindo testes eficientes de hipóteses e redução de riscos mecanicistas. O protocolo NeutroFun Screen oferece uma visão abrangente e econômica da viabilidade dos neutrófilos, produção de ERO, migração, fagocitose e formação de NETs, apoiando a triagem e priorização de portfólios. Esta abordagem maximiza a utilidade das amostras e acelera a tomada de decisões em pontos críticos da descoberta.
A NeutroFun Screen posiciona-se na interface entre a fase inicial de descoberta e a identificação de compostos promissores, permitindo um perfil funcional rápido antes de estudos pré-clínicos que demandam grandes recursos.