Geração de Podócitos Derivados do Paciente a partir de Biópsias de Pele

Este manuscrito descreve um protocolo de duas etapas para gerar podócitos específicos do paciente a partir de fibroblastos dérmicos via reprogramação epissomal em células-tronco pluripotentes induzidas por humanos (hiPSCs) e subsequente diferenciação em podócitos.

Descrevemos um protocolo para geração de podócitos humanos por reprogramação epissomal de fibroblastos dérmicos em células-tronco pluripotentes induzidas por humanos. Essas células assemelham-se muito melhor aos podócitos in vivo do que os podócitos imortalizados em termos de processos alimentares podocitários e expressão de marcador específico para podócitos. Os podócitos são células terminalmente diferenciadas.

Portanto, essas células não proliferam mais e a análise primária de podócitos em cultura celular é limitada. Embora o problema do número limitado de células tenha sido superado com o uso de podócitos imortalizados condicionalmente, esses podócitos apresentam fenótipo e comportamento desdiferenciados, o que questiona seu uso em pesquisa básica. Com a ajuda de células-tronco pluripotentes induzidas, podócitos podem ser gerados in vitro em um número quase ilimitado de células com morfologia típica de podócitos, incluindo processos alimentares distintos e expressão de marcadores específicos para podócitos.

Ao usar as células-tronco específicas do paciente para se diferenciar em podócitos, é possível estudar as alterações doença-específicas da célula ex vivo. No caso, a biópsia de pele inicial foi realizada de um paciente com doença genética podocitária. Os podócitos gerados com nosso protocolo são células doentes personalizadas que carregam a mutação do paciente.

Assim, essas células representam um modelo aprimorado ex vivo para estudar doenças podocitárias e potenciais substâncias terapêuticas em uma abordagem individualizada.