Name: Microscopia de Expansão Ultraestrutural em Três Estágios do Ciclo de Vida In Vitro do Trypanosoma cruzi (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-12T14:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Aprenda microscopia de expansão ultraestrutural para estudo do ciclo de vida do Trypanosoma cruzi em três estágios in vitro. Este método permite reconstrução tridimensional de estruturas celulares em nanoscala.

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<meta charset="utf8"></head><body>Microscopia de Expansão Ultraestrutural no Ciclo de Vida In Vitro de Trypanosoma cruzi

<ol><li>Chen, F., Tillberg, P. W., Boyden, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy.</a> Science. 347 (6221), 543-548 (2015).</li>
<li>Chozinski, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+with+conventional+antibodies+and+fluorescent+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy with conventional antibodies and fluorescent proteins.</a> Nature Methods. 13 (6), 485-488 (2016).</li>
<li>Ku, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+and+scalable+super-resolution+imaging+of+three-dimensional+protein+localization+in+size-adjustable+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Multiplexed and scalable super-resolution imaging of three-dimensional protein localization in size-adjustable tissues.</a> Nature Biotechnology. 34 (9), 973-981 (2016).</li>
<li>Gambarotto, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+cellular+ultrastructures+using+expansion+microscopy+%28U-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Imaging cellular ultrastructures using expansion microscopy (U-ExM).</a> Nature Methods. 16 (1), 71-74 (2018).</li>
<li>Tillberg, P. W., Chen, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy%3A+Scalable+and+convenient+super-resolution+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy: Scalable and convenient super-resolution microscopy.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 35, 683-701 (2019).</li>
<li>Jurriens, D., van Batenburg, V., Katrukha, E. A., Kapitein, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+the+neuronal+cytoskeleton+using+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Mapping the neuronal cytoskeleton using expansion microscopy.</a> Methods in Cell Biology. 161, 105-124 (2021).</li>
<li>Alonso, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+%28U-ExM%29+in+Trypanosoma+cruzi%3A+localization+of+tubulin+isoforms+and+isotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitology+Research%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) in Trypanosoma cruzi: localization of tubulin isoforms and isotypes.</a> Parasitology Research. 121 (10), 3019-3024 (2022).</li>
<li>Kalichava, A., Ochsenreiter, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+expansion+microscopy+in+Trypanosoma+brucei%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biology%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure expansion microscopy in Trypanosoma brucei.</a> Open Biology. 11 (10), 210132(2021).</li>
<li>Amodeo, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+novel+mitochondrial+genome+segregation+factor+TAP110+in+Trypanosoma+brucei%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Characterization of the novel mitochondrial genome segregation factor TAP110 in Trypanosoma brucei.</a> Journal of Cell Science. 134 (5), (2021).</li>
<li>Liffner, B., Absalon, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+reveals+plasmodium+falciparum+blood-stage+parasites+undergo+anaphase+with+a+chromatin+bridge+in+the+absence+of+mini-chromosome+maintenance+complex+binding+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy reveals plasmodium falciparum blood-stage parasites undergo anaphase with a chromatin bridge in the absence of mini-chromosome maintenance complex binding protein.</a> Microorganisms. 9 (11), 2306(2021).</li>
<li>Dos Santos Pacheco, N., Soldati-Favre, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+auxin-inducible+degron+system+with+ultrastructure+expansion+microscopy+to+accelerate+the+discovery+of+gene+function+in+Toxoplasma+gondii%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Coupling auxin-inducible degron system with ultrastructure expansion microscopy to accelerate the discovery of gene function in Toxoplasma gondii.</a> Methods in Molecular Biology. 2369, 121-137 (2021).</li>
<li>Lidani, K. C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chagas+disease%3A+From+discovery+to+a+worldwide+health+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Public+Health%22%5BJournal%5D)">Chagas disease: From discovery to a worldwide health problem.</a> Frontiers in Public Health. 7, 166(2019).</li>
<li>Carrea, A., Diambra, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+biology+approach+to+model+the+life+cycle+of+Trypanosoma+cruzi%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Systems biology approach to model the life cycle of Trypanosoma cruzi.</a> PloS One. 11 (1), e0146947(2016).</li>
<li>Vidal, J. C., De Souza, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVidal%2C+JC+%22Morphological+and+Functional+Aspects+of+Cytoskeleton+of+Trypanosomatids.+Cytoskeleton+-+Structure%2C+Dynamics%2C+Function+and+Disease%22">Morphological and Functional Aspects of Cytoskeleton of Trypanosomatids. Cytoskeleton - Structure, Dynamics, Function and Disease</a>. , InTech. (2017).</li>
<li>Kunz, T. C., Götz, R., Gao, S., Sauer, M., Kozjak-Pavlovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+expansion+microscopy+to+visualize+and+characterize+the+morphology+of+mitochondrial+cristae%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cell+and+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Using expansion microscopy to visualize and characterize the morphology of mitochondrial cristae.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 617(2020).</li>
<li>Laporte, M. H., Klena, N., Hamel, V., Guichard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+the+native+cellular+organization+by+coupling+cryofixation+with+expansion+microscopy+%28Cryo-ExM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Visualizing the native cellular organization by coupling cryofixation with expansion microscopy (Cryo-ExM).</a> Nature Methods. 19 (2), 216-222 (2022).</li>
<li>Sahabandu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+microscopy+for+the+analysis+of+centrioles+and+cilia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Expansion microscopy for the analysis of centrioles and cilia.</a> Journal of Microscopy. 276 (3), 145-159 (2019).</li>
<li>Wen, G., Leen, V., Rohand, T., Sauer, M., Hofkens, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+progress+in+expansion+microscopy%3A+chemical+strategies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Current progress in expansion microscopy: chemical strategies and applications.</a> Chemical Reviews. 123 (6), 3299-3323 (2023).</li>
<li>Trinks, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subdiffraction-resolution+fluorescence+imaging+of+immunological+synapse+formation+between+NK+cells+and+A.+fumigatus+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Communications+Biology%22%5BJournal%5D)">Subdiffraction-resolution fluorescence imaging of immunological synapse formation between NK cells and A. fumigatus by expansion microscopy.</a> Communications Biology. 4 (1), 1151(2021).</li>
<li>White, B. M., Kumar, P., Conwell, A. N., Wu, K., Baskin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Lipid expansion microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 144 (40), 18212-18217 (2022).</li>
<li>Steib, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TissUExM+enables+quantitative+ultrastructural+analysis+in+whole+vertebrate+embryos+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports+Methods%22%5BJournal%5D)">TissUExM enables quantitative ultrastructural analysis in whole vertebrate embryos by expansion microscopy.</a> Cell Reports Methods. 2 (10), 100311(2022).</li>
<li>Shaib, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+proteins+by+expansion+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Visualizing proteins by expansion microscopy.</a> bioRxiv. , (2023).</li>
<li>M'Saad, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((All-optical+visualization+of+specific+molecules+in+the+ultrastructural+context+of+brain+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">All-optical visualization of specific molecules in the ultrastructural context of brain tissue.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Filtros de seringa estéril de 0,22 micrômetros Soluções de membrana PES</td><td></td><td>SFPES030022S</td><td></td></tr><tr><td>copo de 1 L</td><td>Schott Duran</td><td>10005227</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de microcentrífuga SPINWIN de 1,5 mL</td><td>Tarson</td><td>T38-500010</td><td></td></tr><tr><td>10 mL de serigrafia estéril descartável</td><td>NP</td><td>66-32</td><td></td></tr><tr><td>10 mL pipeta sorológica estéril</td><td>Jet Biofil</td><td>GSP211010</td><td></td></tr><tr><td>Lamínulas de 12 mm</td><td>Merienfeld GmbH</td><td>01 115 20</td><td>Lamínulas redondas</td></tr><tr><td>Placas de 12 poços</td><td>Jet Biofil</td><td>TCP011012</td><td></td></tr><tr><td>Lamínulas de 22 mm</td><td>Corning</td><td>2845-22</td><td>Lamínulas quadradas</td></tr><tr><td>Placas de 24 poços</td><td>Jet Biofil</td><td>TCP-011-024</td><td></td></tr><tr><td>Copo de 250 mL</td><td>Schott Duran</td><td>C108.1</td><td></td></tr><tr><td>3 mL Pasteur pipeta</td><td>Deltalab</td><td>200037</td><td></td></tr><tr><td>pratos com fundo de vidro de 35 mm</td><td>Matsunami vidro ind</td><td>D11130H</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-Diamidine-2&prime;-fenilindol dicloridrato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9542</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>5 ml pipeta sorológica estéril</td><td>Jet Biofil</td><td>GSP010005</td><td></td></tr><tr><td>placas de 6 poços</td><td>Sarstedt</td><td>83.3920</td><td></td></tr><tr><td>Acrilamida</td><td>BioRad</td><td>1610101</td><td></td></tr><tr><td>Persulfato de amônio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A3678-25G</td><td>APS</td></tr><tr><td>ATTO 647 NHS éster</td><td>BOC Sciences</td><td>F10-0107</td><td>Para rotulagem de pan-proteoma</td></tr><tr><td>Gabinete de segurança Telstar</td><td></td><td>Bio II A / P</td><td></td></tr><tr><td>Albumina de sódio bovina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7906</td><td>BSA</td></tr><tr><td>CO2 Incubadora</td><td>Sanyo</td> Microscópio confocal <td>MCO-15A</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td>LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Tarsons de Petrídico descartáveis</td><td></td><td>460095</td><td>90 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>DMEM, alta glicose</td><td>Thermo Fisher Cientific</td><td>12100046</td><td>pó</td></tr><tr><td>Paquímetro digital eletrônico</td><td></td><td>Radar RADAR-SLIDE-CALIPER</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Absolute Supelco</td><td>1,00,98,31,000</td><td></td></tr><tr><td>Soro de bezerro fetal</td><td>Internegocios SA</td><td>FCS FRA 500</td> Pacote de processamento de imagem <td>Fiji estéril e inativado por calor</td></tr><tr><td></td><td>ImageJ</td><td></td><td>doi:10.1038/nmeth.2019</td></tr><tr><td>Formaldeído 37%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F8775</td><td>FA</td></tr><tr><td>Vidro Petrídico</td><td>Marienfeld Superior</td><td>PM-3400300</td><td>60 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>Glucosa D(+)</td><td>Cicarelli</td><td></td><td></td>716214</tr><tr><td>Glutaraldeído 70%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>G7776</td><td></td></tr><tr><td>Cabra anti-camundongo IgG Anticorpo secundário Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen</td><td>A-21422</td><td></td></tr><tr><td>Cabra anti-coelho IgG Anticorpo secundário FICT</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-095-003</td><td></td></tr><tr><td>Cilindro graduado</td><td>Nalgene</td><td>3663-1000</td><td></td></tr><tr><td>Frasco</td> <td>de vidro graduadoGlassco</td><td>GL-274.202.01</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Bloco de Aquecimento</td><td>IBR</td><td></td><td>Feito em casa</td></tr><tr><td>Hemin</td><td>Frontier Scientific</td><td>H651-9</td><td></td></tr><tr><td>Ácido clorídrico 36,8-38,0%</td><td>Ciccarelli</td><td>918110</td><td></td></tr><tr><td>Balde de gelo</td><td>Corning</td><td>1167U68</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Tecno Dalvo</td><td>TOC130</td><td></td></tr><tr><td>Infusão de Fígado</td><td>Difco</td><td>226920</td><td></td></tr><tr><td>Agitador e aquecedor magnético</td><td>Companheiro de laboratório</td><td>HP-3000</td><td></td></tr><tr><td>Espátula de metal</td><td>SALTTECH</td><td>200MM</td><td></td></tr><tr><td>Pinças de metal</td><td>Marienfeld Superior</td><td>PM-6633002</td><td></td></tr><tr><td>Metanol absolut</td><td>Cicarelli</td><td>897110</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de microcentrífuga 1,5 mL</td><td>Tarson</td><td>500010-N</td><td></td></tr><tr><td>Papel de grau de microscopia KimWipes</td><td>Kimtech Science</td><td>B0013HT2QW</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q sistema de água</td><td>Merk Millipore</td><td>IQ-7003</td><td></td></tr><tr><td>clone de tubulina alfa de camundongo DM1A</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9026</td><td></td></tr><tr><td>anti-PFR de camundongo Anticorpos</td><td></td><td></td><td>purificados doados pelo Dr. Ariel Silber (USP)</td></tr> <tr><td>N, N&ampague;-metilenbisacrilamida</td><td>ICN</td><td>193997</td><td>bis</td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Cicarelli</td><td>834214</td><td></td></tr><tr><td>Câmara Neubauer</td><td>Boeco</td><td>BOE 01</td><td></td></tr><tr><td>pipeta p1000</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P1000</td><td></td></tr><tr><td>p1000 ponteiras de pipeta</td><td>Tarson</td><td>TAR-521020B</td><td></td></tr><tr><td>p20 pipeta</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P20</td><td></td></tr><tr><td>p20 ponteiras de pipeta</td><td>Tarson</td><td>TAR-527108</td><td></td></tr><tr><td>p200 pipeta</td><td>Gilson</td><td>PIPETMAN P200</td><td></td></tr><tr><td>p200 pontas de pipeta</td><td>Tarson</td><td>TAR-521010Y</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>PFA</td></tr><tr><td>pH / ORP / &deg; Medidor C</td><td>HANNA Instruments</td><td>HI 2211</td><td></td></tr><tr><td>Poli-D-Lisina 0,1%</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P8920</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Potássio</td><td>Cicarelli</td><td>867212</td><td>KCl</td></tr><tr><td>Lâmina de barbear</td><td>Printex</td><td>BS 2982: 1992</td><td></td></tr><tr><td>Fita de vedação "Parafilm M"</td> <td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>Acrilato de Sódio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>408220-25G</td><td></td></tr><tr><td>SA Bicarbonato de Sódio</td><td>Cicarelli</td><td>929211</td><td>NaHCO3</td></tr><tr><td>Cloreto de Sódio</td><td>Cicarelli</td><td>750214</td><td>NaCl</td></tr><tr><td>Dodecil Sulfato de Sódio</td><td>BioRad</td><td>1610302</td><td>SDS</td></tr><tr><td>Hidróxido de Sódio</td><td>Merk</td><td>1-06498</td><td>NaOH</td></tr><tr><td>Sorvall ST 16 Centrífuga</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>75004380</td><td></td></tr><tr><td>Frascos T-25</td><td>Corning</td><td>430639</td><td></td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Invitrogen</td><td>15524-010</td><td></td></tr><tr><td>Papel de seda</td><td>Elite</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triptose</td><td>Merck</td><td>1106760500</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>BioRad</td><td>1610719</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Biopack</td><td>2003-07</td><td>Polissorbato 20</td></tr><tr><td>Bomba</td> <td>de vácuoSilfab</td><td>N33-A</td><td></td></tr><tr><td>Vero cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-1587</td><td></td></tr><tr><td>Vortex MIxer</td><td>Dragon Lab</td><td>MX-S</td><td></td></tr></tbody></table>

microscopia de expansão ultraestrutural em três estágios do ciclo de vida in vitro do trypanosoma cruzi

Ultrastructural Expansion Microscopy in Three In Vitro Life Cycle Stages of Trypanosoma cruzi

Se o protocolo tiver sido executado corretamente (Figura 1), as amostras serão visíveis como um gel planar e translúcido que pode ser expandido até um fator de 4-4,5x em água (Figura 3A). Essa expansão proporcionou uma resolução efetiva de cerca de 70 nm, que pode variar dependendo do fator de expansão final e do sistema de imagem empregado. Após o segundo processo de expansão e aquisição de imagens em microscópio confocal, pudemos observar fatores de expansão e...

Microscopia de Expansão Ultraestrutural em Três Estágios do Ciclo de Vida In Vitro do Trypanosoma cruzi

We describe here the application of ultrastructure expansion microscopy (U-ExM) in Trypanosoma cruzi, a technique that allows increasing the spatial ...

ultrastructural-expansion-microscopy-three-vitro-life-cycle-stages

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Biologia

Neste protocolo, fluorescente etiquetadas T. cruzi foram injetados em larvas de peixe-zebra transparente, e motilidade do parasita foi observada na vivo usando microscopia de fluorescência folha de luz.

Estabelecimento de Zebrafish Larval como um modelo Animal para investigar Trypanosoma cruzi motilidade In Vivo

O Trypanosoma cruzi agente da doença de Chagas produz duradouro infecções assintomáticas que se desenvolvem abruptamente em patologia clinicamente reconhecida. O protocolo de pesquisa a seguir descreve um curto prazo baseada na família epidemiológico estudo para desvendar a T. cruzi infecção transmitida sexualmente da mãe à progênie.

Transmissão sexual de tripanosomas americanas de machos e fêmeas para companheiros de ingênua

Aqui, nós descrevemos um protocolo para introduzir um nocaute do gene no amastigotas extracelular de Trypanosoma cruzi, usando o sistema de crispr/Cas9. O phenotype do crescimento pode ser seguido acima pela contagem da pilha da cultura axênicos do amastigotas ou pela proliferação de amastigotas intracelular após a invasão da pilha de anfitrião.

Introduzindo um nocaute genético diretamente no estágio Amastigote do Trypanosoma cruzi usando o sistema crispr/Cas9

Descrevemos um ensaio colorimétrico de alta produtividade medindo β-galactosidase atividade em três estágios do ciclo de vida de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. Este ensaio pode ser usado para identificar compostos trypanocidas de forma fácil, rápida e reprodutível.

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O presente protocolo descreve microscopia fluorescente de folha de luz e métodos automatizados assistidos por software para visualizar e quantificar precisamente parasitas Trypanosoma cruzi e células T intactos e limpos. Essas técnicas fornecem uma maneira confiável de avaliar os resultados do tratamento e oferecem novas percepções sobre as interações parasita-host.

Imagem 3D quantitativa de células infectadas por trypanosoma cruzi, amastigotes dormentes e células T em órgãos esclarecidos intactos

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A natureza das interações entre células tronco e progenitoras hematopoéticas (hspCs) e nichos de medula óssea é pouco compreendido. Modificações de hardware personalizado e um protocolo de aquisição multi-passo permite o uso de dois fótons e microscopia confocal a imagem ex vivo hspCs rotulados hospedados dentro de áreas da medula óssea, as interações de rastreamento e movimento.

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