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Métodos para Confirmação de Eletroporação e Transformação em Limosilactobacillus reuteri...
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Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering
Methods for Electroporation and Transformation Confirmation in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Métodos para Confirmação de Eletroporação e Transformação em Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Full Text
4,910 Views
11:04 min
June 23, 2023

DOI: 10.3791/65463-v

Alexander Duggan1, David McMillen1

1University of Toronto Mississauga

AI Banner

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Aqui, apresentamos protocolos para trabalhar com Limosilactobacillus reuteri DSM20016, detalhando crescimento, transformação plasmidial, PCR de colônias, medição de proteína repórter fluorescente e mini-preparação limitada de plasmídeos, bem como problemas comuns e solução de problemas. Esses protocolos permitem a medição de proteínas repórteres em DSM20016, ou a confirmação via PCR de colônia se nenhum repórter estiver envolvido.

L.Reuteri, e especificamente a cepa, DSM20016 é um comensal intestinal humano robusto e natural, com grande promessa para entrega terapêutica e detecção de doenças em todo o trato gastrointestinal. Este trabalho ajudará a posicioná DSM20016 como um chassi de biologia sintética para esses tipos de aplicações. Lactobacilas não têm nenhum organismo modelo específico.

Espécies preferidas existem, mas geralmente são escolhidas com um viés para objetivos específicos de pesquisa. A variação dentro da família bacteriana levou a protocolos fragmentados, alguns com iterações de modificações que remontam a publicações. É muito difícil para as pessoas que estão começando filtrar exatamente o que é e o que não é útil.

Um papel para a transformação da DSM20016 existe, mas não é moderno. Protocolos modernos para outros membros da família Lactobacillales existem, Mas eles não são DSM20016. Aqui nos esforçamos para fornecer um conjunto de protocolos para eletroporação DSM20016 fácil de usar, centralizado, modernizado, completo.

Este conjunto de protocolos oferece uma modernização substancial em relação ao protocolo de exploração de DSM20016 anterior, e elucida alguns fios suspensos, além de enfatizar partes que antes eram menos claras. O conjunto de protocolos também é completo, e especificamente para DSM20016, uma cepa para a qual outros protocolos não DSM20016 não são totalmente compatíveis. Um dos nossos principais objetivos é usar micróbios como sensores e sistemas de entrega baratos.

Estamos trabalhando com especialistas em doenças intestinais para usar DSM20016 para detectar as condições no trato gastrointestinal e fornecer terapêutica conforme necessário.

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