Abordagem simplificada de imagem intravital para monitoramento de longo prazo da dinâmica do tecido epitelial em um microscópio confocal invertido
June 30th, 2023
O protocolo apresenta uma nova ferramenta para simplificar a obtenção de imagens intravitais usando microscopia confocal invertida.
Desenvolvemos uma ferramenta para realizar imagens intravitais em camundongos vivos usando um microscópio confocal invertido. Isso nos permite acompanhar a dinâmica celular da pele ao longo da homeostase e comparar o comportamento celular durante o início e a progressão da doença. A microscopia multifóton é a principal abordagem aplicada para obter o rastreamento celular intravital.
No entanto, as desvantagens desses microscópios incluem versatilidade de imagem diária limitada, alto custo e complexidade técnica. Nossa nova ferramenta permite o uso de versáteis microscópios confocais invertidos para imagens intravitais in vivo. Ao modificar o arquivo de projeto, as dimensões da inserção do estágio podem ser personalizadas para se ajustar a qualquer marca de microscópio invertido.
O orifício objetivo pode ser redimensionado e reposicionado para se ajustar a qualquer modelo animal e tecido de escolha.
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Visão Geral
Este estudo introduz uma ferramenta inovadora para realizar imagem intravital usando microscopia confocal invertida em camundongos vivos, permitindo aos pesquisadores rastrear a dinâmica das células da pele durante a homeostase e a progressão da doença. A nova ferramenta aborda as limitações da microscopia multifotônica, tornando a imagem intravital mais acessível e versátil.
Principais Componentes do Estudo
Área de Pesquisa
- Imagem intravital
- Dinâmica das células da pele
- Técnicas de microscopia
Fundo
- As limitações atuais da microscopia multifotônica incluem altos custos e complexidade técnica.
- Microscópios confocales invertidos oferecem opções de imagem versáteis para tecidos vivos.
- Design personalizado permite adaptabilidade a diferentes modelos animais.
Métodos Utilizados
- Microscopia confocal invertida com inserções 3D impressas personalizadas
- Camundongos vivos como o sistema biológico
- Configuração de imagem personalizável para vários tecidos
Principais Resultados
- Aquisição bem-sucedida de Z-stacks de tecido da orelha marcado fluorescentemente com desvio mínimo.
- Imagem contínua de células da pele (mCherry e GFP positivas) por períodos de tempo prolongados.
- Validação da eficácia das inserções de imagem viva impressas em 3D para imagem estável.
Conclusões
- Este estudo demonstra uma abordagem inovadora para melhorar as capacidades de imagem intravital.
- A ferramenta melhora a capacidade de estudar a dinâmica celular em modelos vivos, avançando a pesquisa em biologia celular.
