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DOI: 10.3791/65715-v
Carolina Moraes Cabé1, Sophie Novault1, Ana Jeemin Choi2, Valerie Seffer1, Laura Barrio Cano1, Valentina Libri1,3, Milena Hasan1
1Cytometry and Biomarkers UTechS, C2RT,Institut Pasteur, Université Paris Cité, 2Microenvironment and Immunity Unit,Institut Pasteur, Université Paris Cité, INSERM U1224, 3Istituto Superiore di Sanità
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study focuses on the optimization of nuclei isolation from brain and bone marrow tissues for downstream single-nuclei multiome assays. The importance of high-quality nuclei extraction is highlighted due to its impact on single-cell transcriptomics and multi-omics analyses.
O sucesso da transcriptômica de célula única/núcleo único e multi-ômica depende em grande parte da qualidade das células/núcleos. Portanto, o isolamento de células/núcleos do tecido e sua purificação devem ser altamente padronizados. Este protocolo descreve a preparação de núcleos do cérebro e da medula óssea para o ensaio de multioma de núcleo único a jusante.
A Unidade de Tecnologia de Citometria e Biomarcadores apoia projetos biomédicos por meio de tecnologias de ponta e pipelines para fenotipagem celular e perfil molecular com resolução de célula única. Neste contexto, usamos diferentes ferramentas para análise multiômica de célula única para obter insights sobre a expressão gênica e regulação gênica em saúde e doença. A citometria de fluxo identifica e origina células individuais com base em características únicas.
Os avanços recentes incluem classificadores espectrais baseados em imagem de alto rendimento, e essas tecnologias oferecem flexibilidade no design do painel, permitem o uso simultâneo de corantes semelhantes e o gerenciamento de autofluorescência. Um grande desafio experimental ao usar tecnologias de ponta de célula única é trabalhar com populações de células particularmente frágeis ou raras. Cada tipo de tecido ou célula precisa passar por uma otimização de protocolo ajustada para obter células altamente viáveis suficientes que se traduzam em dados de sequenciamento de alta qualidade.
Nosso protocolo modificado de preparação de núcleos únicos melhora a recuperação dos núcleos e minimiza o estresse sobre os núcleos. Ele é especificamente otimizado para tecidos cerebrais e da medula óssea e cobre todas as etapas desde a dissociação da amostra até a purificação dos núcleos.
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