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JoVE Journal Biochemistry
Analysis of Protein Complex Formation at Micromolar Concentrations by Coupling Microfluidics with Mass Photometry

Análise da formação de complexos proteicos em concentrações micromolares por acoplamento de microfluídica com fotometria de massa

Full Text
2,870 Views
06:39 min
January 26, 2024

DOI: 10.3791/65772-v

Myndert Claasen1, Zornitsa Kofinova1, Matteo Contino2, Weston B. Struwe3,4

1Refeyn Ltd., 2Adaptix Ltd., 3Physical and Theoretical Chemistry Laboratory, Department of Chemistry,University of Oxford, 4The Kavli Institute for Nanoscience Discovery,University of Oxford

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Este protocolo combina fotometria de massa com um novo sistema microfluídico para investigar interações proteína-proteína de baixa afinidade. Essa abordagem é baseada na rápida diluição de complexos altamente concentrados em solução, o que permite medições de baixa afinidade e amplia a aplicabilidade da fotometria de massa.

Este protocolo demonstra uma maneira completamente nova de analisar complexos de proteínas de baixa afinidade. Ele permite que os pesquisadores detectem e caracterizem certas interações proteicas, mesmo quando são fracas ou transitórias, o que geralmente era muito difícil ou mesmo impossível antes. As interações proteicas são cruciais para a função celular, mas detectá-las e medi-las pode ser um desafio.

A fotometria de massa é uma ótima ferramenta para quantificar a formação de complexos proteicos, mas tem limitações com amostras diluídas. Estamos resolvendo esse problema com o MassFluidix. A lacuna de pesquisa que estamos abordando é como os cientistas podem caracterizar de forma confiável as interações de baixa afinidade entre proteínas em solução.

As vantagens de nossa abordagem são que ela permite que você procure interações proteicas fracas em solução sem a necessidade de rótulos ou imobilização. Assim, os pesquisadores podem observar as proteínas de interesse e como elas interagem sem se preocupar com a possibilidade de estarem interrompendo o sistema que estão observando.

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