Name: Triagem de drogas de moléculas pequenas de alto rendimento para distúrbios do sono relacionados à idade usando Drosophila melanogaster (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T14:15:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Aprenda triagem de drogas de alto rendimento para distúrbios do sono em modelos envelhecidos de Drosophila melanogaster. Este protocolo automatizado melhora a precisão na medição do comportamento de sono.

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Agradecemos aos membros do laboratório do Prof. Junhai Han por suas discussões e comentários. Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China 32170970 a Y.T e pelo "Cyanine Blue Project" da Província de Jiangsu a Z.C.Z.

Este protocolo usa as moscas w1118 de 30 dias do Bloomington Drosophila Stock Center (BDSC_3605, ver Tabela de Materiais).
1. Preparação das moscas-das-frutas envelhecidas
<ol><li>Preparo de alimentos<ol><li>Prepare o meio de cultura padrão de amido de milho misturando 50 g/L de flocos de milho, 110 g/L de açúcar, 5 g/L de ágar e 25 g/L de levedura. Aqueça os flocos de milho e o fermento com água para gelatinizar e, em seguida, dissolva totalmente todas as substâncias.</li>
		<li>Quando o meio arrefecer a 50-60 °C, adicionar 6 mL/L de ácido propiônico e embalá-los imediatamente em frascos de cultura.</li>
	</ol></li>
	<li>Criação de moscas e preparação de moscas envelhecidas<ol><li>Criar a mosca cepa w1118em frascos contendo um meio de cultura padrão de amido de milho e colocar os frascos em uma incubadora de temperatura constante a 25° C, 68% de umidade relativa, condições de iluminação de 500-1000 lux e um ciclo claro: escuro de 12 h:12 h.</li>
		<li>Transfira as moscas para um novo frasco a cada 7 dias de acordo com o ciclo de crescimento das moscas, mantendo a idade dos indivíduos no mesmo frasco consistente.</li>
		<li>Recolha o novo lote de moscas que eclodem da garrafa original 3 dias depois de transferi-las e coloque-as em uma nova garrafa. Seguindo o princípio de trocar o frasco a cada 7 dias, eles serão cultivados até por volta dos 30 dias de idade.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Preparação de alimentos medicinais e tubos de vidro para monitorização
OBS: O procedimento de confecção do tubo de vidro segue o trabalho de Jin et al., com modificações34.
<ol><li>Limpeza e secagem de tubos de vidro<ol><li>Coloque o tubo de vidro (5 mm de diâmetro x 65 mm de comprimento, ver Tabela de Materiais) em um copo grande, mergulhe-o e ferva-o com água destilada dupla por 20 min. Repita 3 vezes.</li>
		<li>Retire e embrulhe o tubo de vidro, lave o interior com água bidestilada 3-5 vezes e coloque-o em um forno para secagem.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparo de meio de cultura simples (100 mL)<ol><li>Dissolva 1,5 g de ágar e 5 g de sacarose em água bidestilada, aqueça e concentre até 100 mL.</li>
		<li>Adicionar 600 μL de ácido propiónico quando o meio arrefecer a cerca de 70 °C, evitando que se solidifique em banho-maria a temperatura constante.</li>
		<li>Adicionar aproximadamente 4 mL de meio simples e Reserpina (ver Tabela de Materiais) em um copo pequeno de 10 mL até que o medicamento atinja 20 μM ou 50 μM. Adicionar dimetilsulfóxido (DMSO) à concentração de 0,2% no grupo controle negativo.</li>
	</ol></li>
	<li>Preparação dos tubos de vidro contendo medicamento<ol><li>Para facilitar o fluxo do meio, insira cuidadosamente um comprimento adequado de tubo de vidro em um copo pequeno. O meio entrará naturalmente no tubo de vidro devido à pressão atmosférica.</li>
		<li>Puxe o tubo de vidro quando o meio de cultura estiver completamente solidificado e limpe a parede externa para obter um tubo de vidro de monitoramento com um meio de cultura contendo drogas em uma extremidade.</li>
		<li>Aqueça a parafina sólida em um copo até derreter a 70 °C, coloque a extremidade do tubo de vidro perto do alimento no líquido de parafina por cerca de 5 mm e remova-o rapidamente. Espere a parafina solidificar para selar a extremidade alimentar do tubo de vidro.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Planejamento experimental e tratamento de moscas
<ol><li>Planejar o experimento para o tratamento com moscas segue a Tabela 1.</li>
</ol>4. Montagem de Drosophila e monitoramento do sono
OBS: O procedimento para montagem de Drosophila segue o trabalho de Jin et al.34 com modificações.
<ol><li>Anestesiar as moscas com gás CO2 , colocá-las em tubos de vidro selados em parafina (um por tubo) e bloquear a extremidade não alimentar com uma bola de algodão absorvente para evitar que as moscas escapem e garantir a circulação de ar.</li>
	<li>Carregue tubos no monitor infravermelho para monitorá-los.<ol><li>Monte os tubos de vidro contendo moscas em um monitor infravermelho na mesma direção e registre o número do monitor e o número do orifício correspondente a cada droga.</li>
		<li>Ajuste o alinhamento de cada tubo e faça com que os raios infravermelhos passem verticalmente pelo centro da faixa de atividade da mosca.</li>
		<li>Coloque o monitor dentro de uma incubadora de 25 °C localizada na câmara escura de sono de mosca, seguindo as configurações especificadas: temperatura de 25 °C, Zeitgeber 12 (ZT12) (equivalente à hora local 08:00) e ZT24 (equivalente à hora local 08:00). Essa configuração garante que as moscas experimentem períodos alternados de 12 h de luz e escuridão. NOTA: Tente não abrir a porta até que a coleta de dados de monitoramento esteja concluída para manter um ambiente estável na incubadora durante o monitoramento.</li>
		<li>Inicie o monitoramento usando o sistema DAM2 (consulte a Tabela de Materiais).</li>
		<li>Uma vez concluído o monitoramento, baixe os dados coletados em formato .txt do sistema.</li>
	</ol></li>
</ol>5. Processamento de dados
NOTA: O processamento dos dados utilizando o sistema DAM, DAMFileScan107 e SCAMP foi realizado de acordo com as instruções em seus sites oficiais (ver Tabela de Materiais).
<ol><li>Importe o arquivo txt acima para o software DAMFileScan107 para digitalização e divida conforme necessário para obter dados de suspensão.<ol><li>Defina a hora de início dos dados de segmentação para 8:01 (1 min de segmentação) ou 8:00 (30 min de segmentação) na terceira manhã após o início dos monitores, e a hora de término é de 8:00 a.m. três dias após a hora de início (Figura 2A1). NOTA: As moscas devem adaptar-se ao ambiente de monitorização durante, pelo menos, um dia. Assim, pode-se definir a hora de início dos dados divididos para 8h no terceiro dia após o início do monitor.</li>
		<li>Divida os dados em intervalos de 1 min e 30 min. Altere a opção "Bin Length" para 1 minuto, altere a opção "Output File Type" para Channel files, renomear e saída. O método de segmentação de dados de 30 min é o mesmo acima (Figura 2A2-5). Observação : ao executar a segmentação de dados em intervalos de 1 min e 30 min, a renomeação final dos dois arquivos deve ser consistente; caso contrário, ele pode ser ilegível durante o processamento subsequente do Matlab. Se necessário, o nome do arquivo pode ser alterado após a saída para facilitar a diferenciação.</li>
	</ol></li>
	<li>Processamento de dados usando SCAMP2020<ol><li>Abra o SCAMP2020 do pacote do programa no Matlab e clique duas vezes em Vecsey Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program (SCAMP) (Figura 2B).</li>
		<li>Adicione sua subpasta "Vecsey SCAMP Scripts" ao caminho, localize o arquivo "scamp.m" nessa pasta e execute-o. Na janela pop-up a seguir, selecione as pastas de processo de 1 min e 30 min em sequência (Figura 2C,D).</li>
		<li>Selecione um monitor, clique em Load individual See Plots to preview (Figura 3A1) e verifique a imagem exibida. Desmarque o canal correspondente de moscas mortas (Figura 3A2, Figura 3B).</li>
		<li>Repita as etapas acima para verificar todos os monitores.</li>
		<li>Renomeie cada canal em cada monitor com base no medicamento correspondente a ser testado (Figura 3A3), selecione todos os monitores e clique em ANALISAR Dados Selecionados para análise (Figura 3A4).</li>
		<li>Padrão para a opção selecionada, clique em Analisar para Lixeira Escolhida, marque Exportar Dados e, finalmente, clique em GRÁFICO 30 min Tipos de Dados para Todos os Dias para Grupos Selecionados e EXPORTAR Todos os Dados para gerar os resultados (Figura 3C).</li>
	</ol></li>
	<li>Selecione o arquivo chamado s30 no arquivo CSV, localize o valor médio correspondente e os dados de erro padrão para cada monitor, faça backup no Excel para modificação e ajuste e cole-o no GraphPad Prism (consulte Tabela de Materiais) para desenhar um diagrama de status de suspensão (Figura 4A,B).</li>
	<li>Encontre o arquivo chamado "stdur" e calcule os valores médios de sono diurno, noturno e total para cada mosca dentro de três dias (Figura 4A,C). Cole os dados no software Prism para concluir o teste de diferença e desenhe um gráfico.</li>
</ol>

Avançando nos tratamentos de distúrbios do sono: uma abordagem de triagem baseada em Drosophila

<ol><li>Le Bon, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+between+REM+and+NREM+in+the+NREM-REM+sleep+cycle%3A+a+review+on+competing+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine%22%5BJournal%5D)">Relationships between REM and NREM in the NREM-REM sleep cycle: a review on competing concepts.</a> Sleep Medicine. 70, 6-16 (2020).</li>
<li>Krueger, J. M., Frank, M. G., Wisor, J. P., Roy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+function%3A+Toward+elucidating+an+enigma%5BTitle%5D)+AND+%22Sleep+Medicine+Reviews%22%5BJournal%5D)">Sleep function: Toward elucidating an enigma.</a> Sleep Medicine Reviews. 28, 46-54 (2016).</li>
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<li>Suzuki, K., Miyamoto, M., Hirata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sleep+disorders+in+the+elderly%3A+Diagnosis+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+and+Family+Medicine%22%5BJournal%5D)">Sleep disorders in the elderly: Diagnosis and management.</a> Journal of General and Family Medicine. 18 (2), 61-71 (2017).</li>
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<li>Gilestro, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Video+tracking+and+analysis+of+sleep+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Video tracking and analysis of sleep in Drosophila melanogaster.</a> Nature Protocols. 7 (5), 995-1007 (2012).</li>
<li>Branson, K., Robie, A. A., Bender, J., Perona, P., Dickinson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+ethomics+in+large+groups+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput ethomics in large groups of Drosophila.</a> Nature Methods. 6 (6), 451-457 (2009).</li>
<li>Kabra, M., Robie, A. A., Rivera-Alba, M., Branson, S., Branson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((JAABA%3A+interactive+machine+learning+for+automatic+annotation+of+animal+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">JAABA: interactive machine learning for automatic annotation of animal behavior.</a> Nature Methods. 10 (1), 64-67 (2013).</li>
<li>Donelson, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+positional+tracking+for+long-term+analysis+of+Drosophila+sleep+and+locomotion+using+the+%26%2334%3Btracker%26%2334%3B+program%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the &#34;tracker&#34; program.</a> Plos One. 7 (5), e37250(2012).</li>
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</ol>

Os autores declaram não haver interesses concorrentes.

O método descrito é adequado para rastrear rapidamente medicamentos para dormir de pequeno e médio porte. Atualmente, a maioria dos principais métodos de triagem de drogas de alto rendimento são baseados em níveis bioquímicos e celulares. Por exemplo, a estrutura e as propriedades do receptor são examinadas em busca de ligantes específicos que possam se ligar a ele22. Outra abordagem envolve a análise do modo de ligação e da força de fragmentos moleculares de fármacos selecionados utilizando Resso...

O sono, um dos comportamentos essenciais necessários para a sobrevivência humana, é caracterizado por dois estados principais: sono de movimento rápido dos olhos (REM) e sono NREM (non-rapid eye movement)1. O sono NREM é composto por três estágios: N1 (transição entre vigília e sono), N2 (sono leve) e N3 (sono profundo, sono de ondas lentas), representando a progressão da vigília para o sono profundo1. O sono desempenha um papel crucial na saúde física e mental2. No entanto, o envelhecimento reduz a duração total do sono, a eficiência do sono, a porcentagem de sono de ondas lentas e a porcentagem de sono REM em adultos3. Indivíduos mais velhos tendem a passar mais tempo em sono leve em comparação com o sono de ondas lentas, tornando-os mais sensíveis a despertares noturnos. À medida que o número de despertares aumenta, o tempo médio de sono diminui, resultando em um padrão de sono fragmentado nos idosos, o que pode estar associado à excitação excessiva dos neurônios Hcrt em camundongos4. Além disso, declínios nos mecanismos circadianos relacionados à idade contribuem para uma mudança mais precoce na duração do sono 5,6. Esses fatores, associados a doenças físicas, estresse psicológico, fatores ambientais e uso de medicamentos, tornam os idosos mais suscetíveis a distúrbios do sono, como insônia, distúrbio comportamental do sono REM, narcolepsia, movimentos periódicos das pernas, síndrome das pernas inquietas e distúrbios respiratórios do sono 7,8.
Estudos epidemiológicos têm demonstrado que os distúrbios do sono estão intimamente ligados a doenças crônicas em idosos9, incluindo depressão 10, doenças cardiovasculares11 e demência12. A abordagem dos distúrbios do sono desempenha um papel crucial na melhoria e tratamento de doenças crônicas e na melhoria da qualidade de vida dos idosos. Atualmente, os pacientes dependem principalmente de drogas como benzodiazepínicos, não-benzodiazepínicos e agonistas dos receptores de melatonina para melhorar a qualidade do sono13. No entanto, os benzodiazepínicos podem levar à diminuição dos receptores e dependência após o uso prolongado, causando sintomas graves de abstinência após a descontinuação14,15. Drogas não benzodiazepínicas também apresentam riscos, incluindo demência16, fraturas17 e câncer18. O agonista comumente usado do receptor de melatonina, o ramelteon, reduz a latência do sono, mas não aumenta a duração do sono e tem preocupações relacionadas à função hepática devido à extensa eliminação de primeira passagem19. A agomelatina, um agonista do receptor de melatonina e antagonista do receptor de serotonina, melhora a insônia relacionada à depressão, mas também representa um risco de dano hepático20. Consequentemente, há uma necessidade urgente de medicamentos mais seguros para tratar ou aliviar distúrbios do sono. No entanto, as estratégias atuais de triagem de fármacos, baseadas em experimentos moleculares e celulares combinados com sistemas automatizados e análises computacionais, são caras e demoradas21. Estratégias de planejamento de fármacos baseadas na estrutura, baseadas na estrutura e propriedades do receptor, requerem uma compreensão clara da estrutura tridimensional do receptor e carecem de capacidade preditiva para os efeitos do fármaco22.
Em 2000, com base nos critérios de sono propostos por Campbell e Tobler em 198423, pesquisadores estabeleceram modelos animais simples para estudar o sono 24, incluindo Drosophila melanogaster, que exibia estados semelhantes aos do sono25,26. Apesar das diferenças anatômicas entre Drosophila e humanos, muitos componentes neuroquímicos e vias de sinalização que regulam o sono em Drosophila são conservados no sono de mamíferos, facilitando o estudo de doenças neurológicas humanas27,28. Drosophila também é extensivamente utilizada em estudos do ritmo circadiano, apesar das diferenças nos osciladores centrais entre moscas e mamíferos 29,30,31. Portanto, Drosophila serve como um organismo modelo valioso para estudar o comportamento do sono e conduzir a triagem de drogas relacionadas ao sono.
Este estudo propõe uma abordagem baseada em fenótipo simples e custo-efetiva para a triagem de drogas de pequenas moléculas para tratar distúrbios do sono usando moscas envelhecidas. A regulação do sono em Drosophila é altamente conservada25, e o declínio do sono observado com a idade pode ser reversível através da administração de medicamentos. Assim, esse método de rastreamento baseado no fenótipo do sono pode refletir intuitivamente a eficácia da droga. Alimentamos as moscas com uma mistura do fármaco investigado com a alimentação, monitoramos e registramos o comportamento do sono usando o Drosophila Activity Monitor (DAM)32 e analisamos os dados adquiridos usando o pacote de dados de SCAMP2020 de código aberto no MATLAB (Figura 1). A análise estatística é realizada por meio de softwares estatísticos e gráficos (ver Tabela de Materiais). Como exemplo, demonstramos a efetividade desse protocolo apresentando dados experimentais sobre a Reserpina, uma pequena molécula inibidora do transportador vesicular de monoamina que aumenta o sono33. Este protocolo fornece uma abordagem valiosa para identificar medicamentos para o tratamento de problemas de sono relacionados à idade.

<table><tbody><tr><td>Ager</td><td>BIOFROXX</td><td>8211KG001</td><td></td></tr><tr><td>Caixa de Clima Artificial</td><td>PRANDT</td><td>PRX-1000A</td><td>site oficial:https://www.nbplt17.com/PLTXBS-Products-20643427/</td></tr><tr><td>DAM2 Drosophila Activity Monitor</td><td>TriKineics</td><td>DAM2</td><td>site oficial:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>DAM2system</td><td>TriKineics</td><td>versão:v3.03</td><td>site oficial:https:// www.trikinetics.com/</td></tr> <tr><td>DAMFileScan</td><td>TriKineics</td><td>versão:1.0.7.0</td><td>site oficial:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide</td><td>SIGMA</td><td>276855</td><td></td></tr><tr><td>Drosophila Activity Monitoring Incubator</td><td>Tritech Research</td><td>DT2-CIRC-TK</td><td>site oficial:https://www.tritechresearch.com/DT2-CIRC-TK.html</td></tr><tr><td>Drosophila Bottles</td><td>Biologix</td><td>51-17720</td><td>site oficial:http://biologixgroup.com/goods.php?id=48</td></tr><tr><td>Drosophila: w1118</td><td>Bloomington Drosophila Stock Center&nbsp;</td><td></td><td></td>BDSC_3605</tr><tr><td>Excel</td><td>Versão Microsoft</td><td>:Site oficial do Excel 2016</td><td>:https://www.microsoftstore.com.cn/software/office/excel</td></tr><tr><td>Tubos de vidro</td><td>TriKinetics</td><td>PPT5x65</td><td>site oficial:https://www.trikinetics.com/</td></tr><tr><td>MATLABR2022b</td><td>Versão do MathWorks</td><td>:9.13.0.2049777</td><td>site oficial:https://ww2.mathworks.cn/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Prism</td><td>GraphPad</td><td>Versão: Prism 8.0.1</td><td>site oficial: https://www.graphpad.com/features</td></tr><tr><td>Reserpine</td><td>MACKLIN</td><td>R817202-1g</td><td></td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>SIGMA</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>SCAMP</td><td>Vecsey Lab</td><td>N / A</td><td>site oficial: https://academics.skidmore.edu/blogs/cvecsey/</td></tr></tbody></table>

triagem de drogas de moléculas pequenas de alto rendimento para distúrbios do sono relacionados à idade usando drosophila melanogaster

High-Throughput Small Molecule Drug Screening For Age-Related Sleep Disorders Using Drosophila melanogaster

O sono, um componente essencial da saúde e do bem-estar geral, frequentemente apresenta desafios para indivíduos mais velhos que frequentemente experimentam distúrbios do sono caracterizados por duração do sono encurtada e padrões fragmentados. Essas interrupções do sono também se correlacionam com um aumento do risco de várias doenças em idosos, incluindo diabetes, doenças cardiovasculares e distúrbios psicológicos. Infelizmente, as drogas existentes para distúrbios do sono estão associadas a efeitos colaterais significativos, como comprometimento cognitivo e dependência. Consequentemente, o desenvolvimento de medicamentos novos, mais seguros e mais eficazes para distúrbios do sono é urgentemente necessário. No entanto, o alto custo e a longa duração experimental dos métodos atuais de triagem de drogas permanecem como fatores limitantes.
Este protocolo descreve um método de triagem custo-efetivo e de alto rendimento que utiliza Drosophila melanogaster, uma espécie com um mecanismo de regulação do sono altamente conservado em comparação com mamíferos, tornando-se um modelo ideal para o estudo de distúrbios do sono em idosos. Ao administrar vários pequenos compostos a moscas envelhecidas, podemos avaliar seus efeitos sobre os distúrbios do sono. Os comportamentos de sono dessas moscas são registrados usando um dispositivo de monitoramento infravermelho e analisados com o pacote de dados de código aberto Sleep and Circadian Analysis MATLAB Program 2020 (SCAMP2020). Esse protocolo oferece uma abordagem de rastreamento eficiente e de baixo custo, reprodutível e eficiente para a regulação do sono. As moscas-das-frutas, devido ao seu curto ciclo de vida, baixo custo de criação e facilidade de manuseio, servem como excelentes objetos para este método. A título de ilustração, a Reserpina, uma das drogas testadas, demonstrou a capacidade de promover a duração do sono em moscas idosas, destacando a eficácia desse protocolo.

A reserpina é um inibidor de pequenas moléculas do transportador vesicular de monoamina (VMAT), que inibe a recaptação de monoaminas em vesículas pré-sinápticas, levando ao aumento do sono33. Os efeitos promotores do sono da Reserpina foram examinados em moscas com 30 dias de idade, com o grupo controle sendo alimentado apenas com o solvente dimetilsulfóxido (DMSO). No grupo Reserpina, as moscas mais velhas exibiram um sono significativamente aumentado durante o dia e a noite em comparação com o g...

Apresenta-se um protocolo de triagem de drogas de alto rendimento para melhorar o sono por meio do monitoramento do comportamento do sono de moscas-das-frutas em um modelo idoso de Drosophila .

Triagem de drogas de moléculas pequenas de alto rendimento para distúrbios do sono relacionados à idade usando Drosophila melanogaster

Sleep, an essential component of health and overall well-being, often presents challenges for older individuals who frequently experience sleep disorders ...

As técnicas de triagem de drogas incluem triagem de alto rendimento, que usa automação para descoberta de drogas, projetos baseados em estrutura e encontrar moléculas de ligação a receptores com base na estrutura, e um projeto baseado em fragmentos, que usa ressonância magnética nuclear e espectrometria de massa para otimizar fragmentos moleculares e identificar os compostos. O sistema DAM mede o sono das moscas detectando tijolos de feixe infravermelho. No entanto, este método pode superestimar o sono se as moscas permanecerem estáticas em uma extremidade do tubo, ou se a mosca não for altamente móvel.Além disso, a ordem de qualquer droga testada pode afetar a ingestão de frutos moscas, potencialmente distorcendo os resultados experimentais. Portanto, nosso experimento incorporará vários trechos para mitigar esses fatores e aumentar a precisão. Em comparação com métodos baseados em análise de vídeo, nosso método oferece recursos de alto rendimento, reduz o custo e simplifica a operação.Assim, o processo de dados experimentais também é relativamente simples, onde o gráfico resultante representa visualmente os efeitos da droga.

high-throughput-small-molecule-drug-screening-for-age-related-sleep

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Descrevemos os procedimentos para registrar os ritmos diários de atividade locomotora...

Assaying atividade locomotora para estudar ritmos circadianos e sono Parâmetros em Drosophila</em

Nanoinjection emparelhado e Eletrofisiologia Ensaio para a tela de bioatividade dos compostos utilizando os Drosophila melanogaster Sistema Fibra Gigante

Ensaios simples para medir a sensibilidade ao etanol e a tolerância rápida em Drosophila facilitam o uso deste organismo modelo para investigar esses importantes comportamentos relacionados ao etanol. Aqui, um ensaio relativamente simples e escalável para medir a sensibilidade ao etanol e a tolerância rápida em moscas é descrito.

Um Ensaio Behavioral Barato, escalável para medição Ethanol Sedação sensibilidade e tolerância rápida em<em&gt; Drosophila</em

Este protocolo descreve um ensaio de alto rendimento para testar as preferências de postura de ovos de Drosophila melanogaster em resolução de um único animal.  Este ensaio fornece uma plataforma simples, eficiente e escalável para identificar genes e componentes de circuitos que controlam um processo simples de tomada de decisão.

High Throughput Ensaio para examinar Preferências de postura de Pessoa<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Nós apresentamos um protocolo usando uma aproximação genética para a frente à tela para os mutantes que exibem a neurodegeneração no melanogaster de Drosophila. Incorpora um ensaio de escalada, uma análise da histologia, um mapeamento do gene e um sequenciamento do ADN para identificar finalmente genes novos relativos ao processo de neuroprotection.

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Drosophila é um modelo experimental amplamente utilizado adequado para o rastreamento de medicamentos com aplicações potenciais para a terapia do câncer. Aqui, descrevemos o uso de fenótipos de cor dos olhos variegated drosophila como um método para triagem de compostos de pequenas moléculas que promovem a formação de heterocromatina.

Um método de triagem para identificação de drogas promotoras de heterocromatina usando drosophila

Os métodos atuais para medir a sensibilidade ao álcool em Drosophila são projetados para testar grupos de moscas. Apresentamos um ensaio simples, de baixo custo e de alto custo para avaliar a sensibilidade à sedação de álcool em um grande número de moscas simples. O método não requer ferramentas especializadas e pode ser realizado em qualquer laboratório utilizando materiais comuns.

Método de alta duração para medir o tempo de sedação de álcool de melanogaster individual drosophila

O presente protocolo avalia a atividade locomotora de Drosophila rastreando e analisando o movimento de moscas em uma arena artesanal usando software de código aberto Fiji, compatível com plugins para segmentar pixels de cada quadro com base em gravação de vídeo de alta definição para calcular parâmetros de velocidade, distância, etc.

Uma técnica simples para avaliar a atividade locomotora em Drosophila

Este protocolo detalha o uso de larvas de Drosophila para identificar compostos anticonvulsivantes exclusivos para o tratamento da epilepsia.

Atividade convulsiva induzida por eletrochoque em larvas de Drosophila

O protocolo apresenta um método de alto rendimento e custo-benefício para avaliar a neurotoxicidade na mosca-da-fruta por meio da quantificação da disfunção locomotora como alternativa aos modelos tradicionais de mamíferos. Tem como objetivo avaliar os efeitos neurotóxicos de compostos farmacêuticos, agentes ambientais ou modificações genéticas usando um modelo sensível, reprodutível e eticamente favorável.

Análise comportamental da disfunção locomotora em Drosophila melanogaster como leitura de neurotoxicidade

Aprenda triagem de drogas de alto rendimento para distúrbios do sono em modelos envelhecidos de Drosophila melanogaster. Este protocolo automatizado melhora a precisão na medição do comportamento de sono.

Triagem de drogas de moléculas pequenas de alto rendimento para distúrbios do sono relacionados à idade usando Drosophila melanogaster (Vídeo) | JoVE Journal

Triagem de drogas de moléculas pequenas de alto rendimento para distúrbios do sono relacionados à idade usando Drosophila melanogaster

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