Abordagens Complementares para Interrogar o Fluxo de Mitofagia em Células β Pancreáticas

Este protocolo descreve dois métodos para a análise quantitativa da mitofagia em células β pancreáticas: primeiro, uma combinação de corantes específicos para mitocôndrias permeáveis a células e, segundo, um repórter de mitofagia codificado geneticamente. Essas duas técnicas são complementares e podem ser empregadas com base em necessidades específicas, permitindo flexibilidade e precisão na abordagem quantitativa do controle de qualidade mitocondrial.

Nosso protocolo descreve dois métodos complementares para estudar o fluxo de mitofagia de células beta na resolução de célula única via citometria de fluxo. O protocolo mt-Keima utiliza um repórter genético de mitofagia, enquanto o protocolo MtPhagy combina três corantes fluorescentes, o que facilita a extrapolação para células difíceis de transfectar em amostras humanas. As avaliações da mitofagia usando abordagens bioquímicas tradicionais e abordagens de imagem são demoradas e desafiadoras.

Assim, é importante desenvolver métodos novos, robustos e eficazes para estudar o fluxo de mitofagia em células beta. Tanto o método mt-Keima quanto o método mtPhagy são avaliações quantitativas eficientes para estudar o fluxo de mitofagia em células beta pancreáticas. Assim, o laboratório de Soleimanpour se concentra nos diferentes mecanismos que conduzem a falência das células beta pancreáticas e o diabetes.

E nos concentramos especificamente nos diferentes aspectos do ciclo de vida mitocondrial, incluindo a mitofagia, para entender como defeitos na função mitocondrial impulsionam o desenvolvimento do diabetes.