Name: Microdissecção e Coloração por Imunofluorescência de Mangas Miocárdicas em Veias Pulmonares Murinas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-21T13:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Aprenda microdissecção e imunofluorescência de mangas miocárdicas em veias pulmonares murinas para estudar fibrilação atrial. Este protocolo permite analisar proteínas cardíacas e identificar alvos terapêuticos em modelos translacionais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi apoiado pelo Centro Alemão de Pesquisa Cardiovascular (DZHK; 81X3600221to H.V., 81X2600255 to S.C.), pelo China Scholarship Council (CSC201808130158 a R.X.), pela Fundação Alemã de Pesquisa (DFG; Programa de Cientista Clínico em Medicina Vascular (PRIME), MA 2186/14-1 a P. T.), e a Fundação Corona (S199/10079/2019 a S. C.).

Revelando a arquitetura miocárdica das veias pulmonares murinas

<ol><li>Lippi, G., Sanchis-Gomar, F., Cervellin, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+of+atrial+fibrillation%3A+An+increasing+epidemic+and+public+health+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology of atrial fibrillation: An increasing epidemic and public health challenge.</a> International Journal of Stroke. 16 (2), 217-221 (2021).</li>
<li>Wijesurendra, R. S., Casadei, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Heart%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of atrial fibrillation.</a> Heart. 105 (24), 1860-1867 (2019).</li>
<li>Haïssaguerre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+initiation+of+atrial+fibrillation+by+ectopic+beats+originating+in+the+pulmonary+veins%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Spontaneous initiation of atrial fibrillation by ectopic beats originating in the pulmonary veins.</a> The New England Journal of Medicine. 339 (10), 659-666 (1998).</li>
<li>Mueller-Hoecker, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+rodents+and+humans%3A+a+light+microscopic+and+ultrastructural+study+on+cardiomyocytes+in+pulmonary+veins%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Of rodents and humans: a light microscopic and ultrastructural study on cardiomyocytes in pulmonary veins.</a> International Journal of Medical Sciences. 5 (3), 152-158 (2008).</li>
<li>Kramer, A. W., Marks, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+occurrence+of+cardiac+muscle+in+the+pulmonary+veins+of+Rodenita%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">The occurrence of cardiac muscle in the pulmonary veins of Rodenita.</a> Journal of Morphology. 117 (2), 135-149 (1965).</li>
<li>Nathan, H., Eliakim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+junction+between+the+left+atrium+and+the+pulmonary+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">The junction between the left atrium and the pulmonary veins.</a> Circulation. 34 (3), 412-422 (1966).</li>
<li>Nathan, H., Gloobe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+atrio-venous+junctions+and+extensions+%28sleeves%29+over+the+pulmonary+and+caval+veins%3A+Anatomical+observations+in+various+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Myocardial atrio-venous junctions and extensions (sleeves) over the pulmonary and caval veins: Anatomical observations in various mammals.</a> Thorax. 25 (3), 317-324 (1970).</li>
<li>Bond, R. C., Choisy, S. C., Bryant, S. M., Hancox, J. C., James, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion+currents%2C+action+potentials%2C+and+noradrenergic+responses+in+rat+pulmonary+vein+and+left+atrial+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reports%22%5BJournal%5D)">Ion currents, action potentials, and noradrenergic responses in rat pulmonary vein and left atrial cardiomyocytes.</a> Physiological Reports. 8 (9), 14432(2020).</li>
<li>Thiagalingam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vein+contraction%3A+Characterization+of+dynamic+changes+in+pulmonary+vein+morphology+using+multiphase+multislice+computed+tomography+scanning%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vein contraction: Characterization of dynamic changes in pulmonary vein morphology using multiphase multislice computed tomography scanning.</a> Heart Rhythm. 5 (12), 1645-1650 (2008).</li>
<li>Spach, M. S., Barr, R. C., Jewett, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spread+of+excitation+from+the+atrium+into+thoracic+veins+in+human+beings+and+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Spread of excitation from the atrium into thoracic veins in human beings and dogs.</a> The American Journal of Cardiology. 30 (8), 844-854 (1972).</li>
<li>Scott McNutt, N., Weinstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+ultrastructure+at+mammalian+intercellular+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Biophysics+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Membrane ultrastructure at mammalian intercellular junctions.</a> Progress in Biophysics and Molecular Biology. 26, 45-101 (1973).</li>
<li>Barr, L., Dewey, M. M., Berger, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation+of+action+potentials+and+the+structure+of+the+nexus+in+cardiac+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+General+Physiology%22%5BJournal%5D)">Propagation of action potentials and the structure of the nexus in cardiac muscle.</a> Journal of General Physiology. 48 (5), 797-823 (1965).</li>
<li>Kawamura, K., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+of+the+cell+junction+of+heart+muscle+with+special+reference+to+its+functional+significance+in+excitation+conduction+and+to+the+concept+of+%26%2334%3Bdisease+of+intercalated+disc%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Circulation+Journal%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure of the cell junction of heart muscle with special reference to its functional significance in excitation conduction and to the concept of &#34;disease of intercalated disc&#34.</a> Japanese Circulation Journal. 31 (11), 1533-1543 (1967).</li>
<li>Van Kempen, M. J., Fromaget, C., Gros, D., Moorman, A. F., Lamers, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+distribution+of+connexin43%2C+the+major+cardiac+gap+junction+protein%2C+in+the+developing+and+adult+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Spatial distribution of connexin43, the major cardiac gap junction protein, in the developing and adult rat heart.</a> Circulation Research. 68 (6), 1638-1651 (1991).</li>
<li>Verheule, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+structure+and+connexin+expression+of+canine+pulmonary+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Tissue structure and connexin expression of canine pulmonary veins.</a> Cardiovascular Research. 55 (4), 727-738 (2002).</li>
<li>Xiao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+connexin+43%2C+ion+channels+and+Ca2%2B-handling+proteins+in+rat+pulmonary+vein+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic+Medicine%22%5BJournal%5D)">Expression of connexin 43, ion channels and Ca2+-handling proteins in rat pulmonary vein cardiomyocytes.</a> Experimental and Therapeutic Medicine. 12 (5), 3233-3241 (2016).</li>
<li>Xia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole-mount+immunofluorescence+staining%2C+confocal+imaging+and+3D+reconstruction+of+the+sinoatrial+and+atrioventricular+node+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Whole-mount immunofluorescence staining, confocal imaging and 3D reconstruction of the sinoatrial and atrioventricular node in the mouse.</a> Journal of Visualized Experiments. (166), (2020).</li>
<li>Tomsits, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medetomidine%2Fmidazolam%2Ffentanyl+narcosis+alters+cardiac+autonomic+tone+leading+to+conduction+disorders+and+arrhythmias+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Medetomidine/midazolam/fentanyl narcosis alters cardiac autonomic tone leading to conduction disorders and arrhythmias in mice.</a> Lab Animal. 52 (4), 85-92 (2023).</li>
<li>Xia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+resident+cardiac+macrophages+from+the+murine+sinoatrial+and+atrioventricular+node%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of resident cardiac macrophages from the murine sinoatrial and atrioventricular node.</a> Journal of Visualized Experiments. (171), (2021).</li>
<li>Bredeloux, P., Pasqualin, C., Bordy, R., Maupoil, V., Findlay, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+activity+arising+in+cardiac+muscle+sleeves+of+the+pulmonary+vein%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Automatic activity arising in cardiac muscle sleeves of the pulmonary vein.</a> Biomolecules. 12 (1), 23(2021).</li>
<li>Chen, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanisms+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cardiovascular+Electrophysiology%22%5BJournal%5D)">The mechanisms of atrial fibrillation.</a> Journal of Cardiovascular Electrophysiology. 17, S2-S7 (2006).</li>
<li>Thibault, S., Ton, A. -T., Huynh, F., Fiset, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin+lateralization+contributes+to+male+susceptibility+to+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Connexin lateralization contributes to male susceptibility to atrial fibrillation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (18), 10696(2022).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Com esse protocolo, compartilhamos um método para distinguir e isolar os PVs do coração de camundongos e realizar a coloração de imunofluorescência neles. Após a retirada dos órgãos, o coração e os pulmões foram desidratados em solução de sacarose esterilizada, seguindo-se a separação dos ventrículos do átrio e dos lobos pulmonares sob orientação microscópica. Em seguida, a base do coração foi preparada para visualizar as VVPP e cortá-las dos pulmões no hilo. A coloração subsequente por imunofluorescência foi realizada p...

A fibrilação atrial (FA) é a arritmia sustentada mais comum1. A prevalência da FA está aumentando ainda mais, com um número esperado de ~17,9 milhões de pacientes na Europa em 20601. A FA é clinicamente de grande importância, pois é um fator de risco essencial para o desenvolvimento de infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca ou acidente vascular cerebral, resultando em uma enorme carga individual, social e socioeconômica1. Embora a FA seja conhecida há décadas, a fisiopatologia da FA ainda não étotalmente compreendida2.
Já no final da década de 1990, estudos demonstraram o grande impacto das veias pulmonares (VVPs) no início e manutenção da FA, pois são a principal fonte de batimentos ectópicos desencadeantes de FA3. Foi demonstrado que os PVs diferem estruturalmente de outros vasos sanguíneos. Enquanto os vasos sanguíneos típicos contêm células musculares lisas, a túnica média dos PVs também contém cardiomiócitos4. Em roedores, essa musculatura cardíaca está presente em toda a VP, incluindo as partes intra e extrapulmonares, bem como na região doorifício5. Em humanos, as VPs também contêm cardiomiócitos, que podem ser observados dentro de extensões do miocárdio do átrio esquerdo (AE), as chamadas mangas miocárdicas (SM)6,7.
A SM tem semelhanças morfológicas com o miocárdioatrial8. A forma e o tamanho dos cardiomiócitos atriais e PV não variam significativamente entre si e apresentam propriedades eletrofisiológicas comparáveis8. Registros eletrofisiológicos dentro do PV comprovaram a atividade elétrica da SM, e imagens angiográficas revelaram contrações sincronizadas com os batimentos cardíacos 9,10.
As junções comunicantes são complexos proteicos formadores de poros compostos por seis subunidades de conexinas, que permitem a passagem de íons e pequenas moléculas11. As junções comunicantes existem nas aposições célula-célula, interconectam cardiomiócitos vizinhos e permitem um acoplamento elétrico intercelular entre os cardiomiócitos12,13. Várias isoformas de conexina são expressas no coração, sendo a conexina 43 (Cx43) a isoforma mais comum expressa em todas as regiões docoração14. Estudos prévios evidenciam a expressão da Cx43 em cardiomiócitos dasVPs15,16.
Permanece um desafio investigar a EM dentro de PVs intactos devido à sua estrutura delicada, especialmente em modelos animais de pequeno porte. Aqui, demonstramos como identificar e isolar PVs juntamente com AL e lobos pulmonares em camundongos usando microdissecção guiada por microscopia. Além disso, demonstramos a coloração por imunofluorescência (IF) dos PVs para visualizar os cardiomiócitos e suas interconexões dentro dos PVs.

<table><tbody><tr><td>Lâminas de adesão</td><td>Epredia</td><td>10149870</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo secundário AF568</td><td>Invitrogen</td><td>A11036</td><td>Hospedeiro: Cabra, Reatividade:</td></tr><tr><td>Coelho Agarose</td><td>Biozym LE</td><td>840104</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488-anticorpo secundário</td><td>Tecnologia de Sinalização Celular</td><td>4408S</td><td>Hospedeiro: Cabra, Reatividade: Camundongo</td></tr><tr><td>Anticorpo Anti-Conexina 43 / GJA1</td><td>Abcam</td><td>ab11370</td><td>Anticorpo Policlonal, Clone: GJA1, Hospedeiro: Coelho&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-cTNT</td><td>Invitrogen</td><td>MA5-12960</td><td>Anticorpo monoclonal, Clone: 13-11, Hospedeiro:</td></tr><tr><td>Camundongo Albumina de soro bovino</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Brush</td><td>Lukas&nbsp;</td><td>5486</td><td>tamanho 6</td></tr><tr><td>Lamínulas</td><td>Epredia</td><td></td><td>24 mm x 50 mm</td></tr><tr><td>Cryotome Cryo Star NX70</td><td>Epredia&nbsp;</td><td></td><td>Configurações: Temperatura da amostra: -18 &deg; C, Temperatura da Lâmina: -25 &deg; Câmera</td></tr><tr><td>C DFC365FX</td><td>Leica&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência DM6 B</td><td>Leica&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gelo</td><td></td><td></td><td></td>seco</tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato da Dubecco (DPBS) 1x conc.</td><td>Gibco</td><td>14040133</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>Dumont #5FS Fórceps</td><td>F.S.T.91150-20</td><td></td> <td>2 peças necessárias</td></tr><tr><td>Tesoura Fina</td><td>F.S.T.</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Meio de montagem de fluorescência</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>Graefe Forceps</td><td>F.S.T.</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Invitrogen</td><td>H3570</td><td>Contracoloração de núcleos celulares</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Software de análise e processamento</td><td>FIJI</td><td></td></tr><tr><td>LAS X</td><td>Leica&nbsp;</td><td></td><td>Software de imagem para Leica DM6 B</td></tr><tr><td>Lâminas de micrótomo S35</td><td>Feather</td><td>207500000</td><td></td></tr><tr><td>Microondas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soro de cabra normal</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S26-M</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T. composto</td><td>Tissue-Tek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído 16%</td><td>Pierce</td><td>28908</td><td></td></tr><tr><td>pipetas Pasteur</td> sem metanol<td>VWR</td><td>612-1681</td> Placa de Petri TPP 93100 Balancim 3D digital 3D de diâmetro VWR 612-1681 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td> ttler</td><td>00040010000</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de coloração deslizante</td><td>EasyDip</td><td>M900-12</td><td></td></tr><tr><td>Moldes de amostra</td><td>Tissue-Tek Cryomold</td><td>4557</td><td>25 mm x 20 mm x 5 mm</td></tr><tr><td>Sistema de coloração StainTray M920</td><td>StainTray</td><td>631-1923</td><td>Sistema de coloração para 20 lâminas</td></tr><tr><td>Agulha Sterican</td><td>Braun</td><td>4657705</td><td>G 27 - utilizado para injeção (<forte>passo 2</forte>) e fixação (<forte>passo 3 e 4</forte>) no protocolo</td></tr><tr><td>Student Vannas Spring Scissors</td><td>F.S.T.</td><td>91500-09</td><td></td></tr><tr><td>Super PAP Pen Liquid Blocker</td><td>Super PAP Pen</td><td>N71310-N</td><td></td></tr><tr><td>Seringas</td><td>Braun</td><td>4606108V</td><td>10 mL</td></tr><tr><td>Tris base</td><td>Roche</td><td>TRIS-RO</td><td>componente para 1x Tris-Buffered Saline (TBS)</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr></tbody></table>

microdissecção e coloração por imunofluorescência de mangas miocárdicas em veias pulmonares murinas

Microdissection and Immunofluorescence Staining of Myocardial Sleeves in Murine Pulmonary Veins

As veias pulmonares (VVPs) são a principal fonte de batimentos ectópicos nas arritmias atriais e desempenham um papel crucial no desenvolvimento e progressão da fibrilação atrial (FA). As VPs contêm mangas miocárdicas (SM) compostas por cardiomiócitos. A SM está implicada no início e manutenção da FA, pois preserva semelhanças com o miocárdio cardíaco de trabalho, incluindo a capacidade de gerar impulsos elétricos ectópicos. Os roedores são amplamente utilizados e podem representar excelentes modelos animais para o estudo do miocárdio da veia pulmonar, uma vez que os cardiomiócitos estão amplamente presentes em toda a parede do vaso. No entanto, a microdissecção precisa e a preparação de PVs murinos são desafiadoras devido ao pequeno tamanho do órgão e à intrincada anatomia.
Demonstramos um protocolo de microdissecção guiado por microscopia para isolar o átrio esquerdo (AE) murino juntamente com as VVPPs. A coloração por imunofluorescência usando anticorpos cardíacos Troponina-T (cTNT) e conexina 43 (Cx43) é realizada para visualizar o AE e as VPs em toda a extensão. A aquisição de imagens em aumentos de 10x e 40x fornece uma visão abrangente da estrutura das VVPN, bem como informações detalhadas sobre a arquitetura miocárdica, destacando particularmente a presença de conexina 43 dentro da EM.

Realizamos a microdissecção, coloração e imagem das VPs em 10 camundongos de 12-16 semanas de idade. Seguindo o protocolo, microdissecamos com sucesso as VPs juntamente com o AL em todos os camundongos experimentais e obtivemos cortes com uma visão abrangente das VPs em oito camundongos. As imagens de visão geral foram obtidas em aumento de 10x para identificar a região do orifício das VVP (PVO) na junção AE-PV, as VPs extrapulmonares (PVex) (VPs entre o hilo pulmonar e a junção AE-PV) e as VVP intrapulmonares...

Este protocolo demonstra isolamento guiado por microscopia e coloração por imunofluorescência de veias pulmonares murinas. Preparamos amostras de tecido contendo o átrio esquerdo, veias pulmonares e pulmões correspondentes e as coramos para troponina cardíaca T e Conexina 43.

Microdissecção e Coloração por Imunofluorescência de Mangas Miocárdicas em Veias Pulmonares Murinas

Pulmonary veins (PVs) are the major source of ectopic beats in atrial arrhythmias and play a crucial role in the development and progression of atrial ...

A fibrilação atrial é a arritmia mais comum, mas a complexa fisiopatologia ainda não é totalmente compreendida. Com nossas pesquisas, contribuímos para um melhor entendimento dos mecanismos que levam ao início e manutenção da fibrilação atrial. Traduzir a pesquisa médica da bancada para a beira do leito é um grande desafio.Para resolver isso, estabelecemos um pipeline translacional de modelos celulares sobre modelos de camundongos para grandes modelos animais e porcos, permitindo-nos identificar e validar novos alvos terapêuticos. Camundongos são frequentemente usados para estudar arritmias. No entanto, é um desafio estudar as veias pulmonares em camundongos.As veias pulmonares são os principais desencadeadores de fibrilação atrial nos pacientes. Nosso protocolo fornece uma diretriz eficaz para identificar e microdissecar veias pulmonares para conduzir investigações adicionais.

microdissection-immunofluorescence-staining-myocardial-sleeves-murine

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Neste protocolo, w e identificou um novo população de células de melanócito-like (também conhecido como melanócitos cardíacos) nos corações de ratos e humanos que contribuem para a arritmia atrial dispara em camundongos.

Isolar células de melanócito-like primárias do coração mouse

Fonte: Brown, A. O., e Orihuela, C. J. Visualização de Streptococcus pneumoniae em Microlesões Cardíacas e Remodelação Cardíaca Subsequente. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo demonstra a imunocoloração de seções de tecido cardíaco de camundongos fixadas quimicamente para visualizar bactérias patogênicas localizadas em microlesões induzidas por infecção. O processo inclui lavagem de tecidos, permeabilização de membranas, bloqueio de sítios inespecíficos, marcação de anticorpos, contracoloração nuclear...

Imunocoloração de microlesões preenchidas com bactérias em uma seção de tecido cardíaco de camundongo para imagem

Entrega célula intramio em modelos murinos de doenças cardiovasculares, como a hipertensão ou o enfarte do miocárdio, é amplamente utilizado para testar o potencial terapêutico de diferentes tipos celulares em estudos de regeneração. Portanto, uma descrição detalhada e uma visualização clara deste procedimento cirúrgico ajudará a definir os limites e as vantagens das análises terapêuticas celulares cardiovasculares em pequenos roedores.

Entrega celular intramiocárdico: Observações em murino Corações

Um modelo altamente reprodutível para infarto do miocárdio em camundongos com manipulações minimamente invasivas é descrito. O modelo pode ser facilmente executado, resultando em alta reprodutibilidade e taxa de sobrevida. Assim, o modelo descrito reduzirá o número de animais necessários conforme solicitado pelo princípio 3R (Substituição, Refinamento e Redução).

Minimal procedimento cirúrgico invasivo de induzir Infarto do Miocárdio em Ratos

Aqui, descrevemos uma abordagem de microscopia de folha clara para visualizar o infiltrado de leucócitos CD45 + cardíacos em um modelo murino de miocardite fulminante asséptica, que é induzida pelo tratamento de toxina diftônica intratraqueal de ratos CD11c.DTR.

Visualização Quantitativa de Infiltrado de Leucócitos em um Modelo Murino de Miocardite Fulminante por Microscopia de Folha de Luz

Exame ecocardiográfico é frequentemente usada em ratos. Aparelhos de ultra-som de alta resolução caro foram desenvolvidos para esta finalidade. Este protocolo descreve um procedimento ecocardiográfico acessível, combinado com análises morfométricas histológica para determinar a morfologia cardíaca.

Exame ecocardiográfico e histológico da morfologia cardíaca no Mouse

Este estudo utiliza uma técnica de microscopia (LSFM) de fluorescência de luz-folha de iluminação dupla face combinada com compensação óptica para estudar o coração murino.

Microscopia de fluorescência de luz-folha para o estudo do coração murino

Apresentado aqui é um protocolo para estudar a microcirculação coronária no tecido cardíaco murino vivo por ex vivo monitoramento da pressão e fluxo de perfusão arterial que mantém a pressão, bem como componentes de árvores vasculares, incluindo os leitos capilares e pericitos, já que a artéria septal é canulada e pressurizada.

Medição dinâmica e imagem de capilares, arterioles e pericias em coração de rato

Fornecemos um protocolo passo-a-passo para a coloração por imunofluorescência de montagem completa do nó sinoatrial (SAN) e do nó atrioventricular (AVN) em corações murinos.

Coloração de Imunofluorescência de Montagem Inteira, Imagem Confocal e Reconstrução 3D do Nó Sinoatrial e Atrioventricular em Camundongo

Aqui, descrevemos um protocolo simples e econômico para realizar a quantificação imparcial da densidade microvascular pulmonar para tecido pulmonar de camundongos inteiros usando coloração única de Isolectina B4.

Quantificando a densidade microvascular pulmonar em camundongos através de lóbulos

A reconstrução tridimensional (3D) do dano cardíaco no infarto agudo do miocárdio reperfundido (repIAM) permite a quantificação fiel e a co-localização dos padrões associados que afetam a doença. Aqui, uma abordagem de imagem guiada por folha de luz automatizável é fornecida para medição contemporânea de danos cardíacos, área de risco e resposta de células imunes.

Análise 3D Simultânea de Dano Cardíaco e Resposta Imune em Infarto Agudo do Miocárdio Reperfundido Usando Microscopia de Fluorescência de Folha de Luz

Aprenda microdissecção e imunofluorescência de mangas miocárdicas em veias pulmonares murinas para estudar fibrilação atrial. Este protocolo permite analisar proteínas cardíacas e identificar alvos terapêuticos em modelos translacionais.

Microdissecção e Coloração por Imunofluorescência de Mangas Miocárdicas em Veias Pulmonares Murinas

Explorar mais vídeos