October 27th, 2023
O presente protocolo fornece descrições detalhadas para o isolamento eficiente de vesículas extracelulares urinárias utilizando esferas magnéticas funcionalizadas. Além disso, engloba análises subsequentes, incluindo western blotting, proteômica e fosfoproteômica.
Estamos trabalhando na descoberta de biomarcadores baseados em vesículas extracelulares. Um passo importante é isolá-los de forma eficiente e seletiva. O EVtrap, que é baseado na separação baseada em esferas magnéticas, pode realmente nos ajudar, fornecendo alto rendimento, fácil de usar, em particular, fácil para aplicações clínicas.
Temos usado este protocolo para a descoberta em proteínas e biomarcadores de fosfoproteínas para diferentes doenças, tais como cancro da mama, cancros renais, e doença de Parkinson. Este biomarcador é derivado do biofluido. Os EVs podem ser potencialmente usados para biópsias líquidas, o que pode melhorar ainda mais o diagnóstico clínico e o tratamento.
Atualmente, a abordagem mais utilizada para o isolamento de vesículas extracelulares são a ultracentrifugação e a precipitação, mas esses métodos são limitados ao co-isolamento de contaminantes e também à baixa eficiência. Assim, nosso método EVtrap fornecerá uma maneira mais eficaz de isolar EVs, o que permitirá um método mais reprodutível e sensível e também beneficiará a análise a jusante. Estamos trabalhando em duas coisas.
Primeiro, continuamos desenvolvendo os métodos e protocolos para isolamento de EV e uma análise downstream, em particular, uma análise baseada em backup em massa. A segunda é que estamos explorando diferentes aplicações no campo clínico por causa da vantagem do EVtrap.
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Este protocolo descreve o isolamento eficiente de vesículas extracelulares urinárias (EVs) usando contas magnéticas funcionalizadas. Também detalha análises subsequentes como western blotting, proteômica e fosfoproteômica, que são essenciais para a descoberta de biomarcadores.
Efficient and selective isolation of extracellular vesicles (EVs) from biofluids is a critical inflection point for proteomics-driven biomarker discovery in biopharma R&D. This chemical affinity-based magnetic bead protocol enables high-yield, reproducible EV isolation, directly supporting quantitative proteomic and phosphoproteomic analyses essential for early disease detection and target validation. The method enhances predictive confidence in translational biomarker pipelines and supports risk-adjusted portfolio advancement.
This EV isolation protocol integrates at the interface of early discovery and translational research, bridging sample preparation with quantitative proteomics and phosphoproteomics analysis.