Name: Liberação Sub-Retiniana de Progenitores de Fotorreceptores Derivados de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Camundongos rd10 (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Aprenda a preparar progenitores de fotorreceptores derivados de células-tronco embrionárias humanas e sua injeção sub-retiniana em camundongos rd10. Este protocolo de 32 dias permite estudar terapias celulares para degeneração retiniana.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Agradecemos a Wei Sheng Tan, Luanne Chiang Xue Yen, Xinyi Lee e Yingying Chung por fornecerem assistência técnica para a preparação do dia 32 progenitores fotorreceptores derivados de hESC após criopreservação. Este trabalho foi apoiado em parte por subsídios do National Medical Research Council Young Investigator Research Grant Award (NMRC/OFYIRG/0042/2017) e National Research Foundation24th Competitive Research Program Grant (CRP24-2020-0083) para H.G.T.

Os experimentos in vivo foram realizados de acordo com as diretrizes e protocolos aprovados pelo Institutional Animal Care and Use Committee of SingHealth (IACUC) e pela Association for Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Statement para o uso de animais em Pesquisa Oftalmológica e da Visão. Os filhotes foram imunossuprimidos de P17 (pré-transplante) a P30 (pós-transplante) alimentando-os com água potável contendo ciclosporina (260 g/L).
1. Preparação de progenitores fotorreceptores derivados de hESC do Dia 32 após criopreservação
<ol><li>Meio de diferenciação fotorreceptor pré-aquecido (PRDM) em banho-maria a 37 °C.</li>
	<li>Recuperar um criovial contendo células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC do dia 32 a partir de nitrogênio líquido. Mantenha no gelo seco.</li>
	<li>Descongelar o criovial a 37 °C em banho-maria por 3-5 min. Ressuspender no dia 32 células em 1 mL de PRDM e centrifugar a 130 x g por 4 min.</li>
	<li>Remover o sobrenadante e ressuspender as células em 1 mL de PRDM.</li>
	<li>Remover 10 μL da mistura para contagem celular. Misture as células usando 0,2% de azul de tripano de acordo com as instruções do fabricante. Pipetar a mistura de células para a lâmina da câmara de contagem de células. Determine o número e a viabilidade de células por contador de células automatizado.</li>
	<li>Prossiga para a próxima etapa quando a viabilidade celular estiver acima de 70%. Centrifugar a suspensão de células restantes a 130 x g por 4 min. Retirar o sobrenadante e ressuspender o pellet de células em PRDM na concentração de 3 x 105 células/μL para transplante.</li>
	<li>Observe se há aglomerados celulares visíveis. Ressuspenda os aglomerados celulares repetidamente usando uma ponta de pipeta de 10 μL no tubo de microfuga até que nenhum aglomerado celular visível seja observado. Coloque na seringa de injeção 33G para observar a extrusão da solução celular através da agulha.</li>
</ol>2. Liberação sub-retiniana das hESCs em camundongos rd10
<ol><li>Preparo dos animais<ol><li>Anestesiar o camundongo (P20, macho/fêmea, 3-6 g) usando uma combinação de cetamina (20 mg/kg de peso corporal) e xilazina (2 mg/kg de peso corporal) em uma seringa tuberculínica de 1 mL conectada a uma agulha 27G por abordagem intraperitoneal. Administrar uma injeção subcutânea de buprenorfina (0,05 mg/kg) no camundongo como analgésico preventivo.</li>
		<li>Após a administração da anestesia, instilar uma gota cada de tropicamida a 1% e fenilefrina a 2,5% para dilatação pupilar. Aplique um gel oftálmico na córnea para evitar o ressecamento do olho e catarata relacionada à anestesia.</li>
		<li>Coloque o rato numa gaiola vazia até ficar totalmente anestesiado. Avalie o nível anestésico adequado apertando a pata e confirme se o animal não reage ao pinça dura.</li>
		<li>Quando o rato estiver totalmente anestesiado, coloque o animal numa almofada quente regulada a 38 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Entrega sub-retiniana das células<ol><li>Para usar uma abordagem de pars plana transvítrea de 1 porta, como feito aqui, execute a injeção sub-retiniana em um ambiente estéril. Use um microscópio cirúrgico vertical com um caminho de luz direto para realizar a injeção.</li>
		<li>Prepare a seringa de vidro de 10 μL removendo o cubo da agulha. Monte a agulha romba 33G na seringa de vidro. Pegue a tampa do cubo de metal e prenda cuidadosamente a agulha na seringa.</li>
		<li>Lave com água destilada para verificar se há sinais de vazamento e patência da agulha. Esvazie a seringa e coloque-a ao lado com cuidado.</li>
		<li>Coloque o rato anestesiado em um travesseiro, com o olho de tratamento olhando diretamente para a objetiva do microscópio. Aplicar o cloridrato de proparacaína a 0,5% e aguardar 30 s. Aplique 150 μL de gel oftálmico no olho e coloque uma tampa redonda sobre ele.</li>
		<li>Realize um exame áspero do olho observando a córnea, íris, pupila, lente e conjuntiva. Através da pupila, visualize o fundo do olho do mouse ajustando o plano focal. Ajuste a cabeça até que a cabeça óptica esteja posicionada no centro da pupila e minimize o movimento da cabeça posicionando-se adequadamente no travesseiro.</li>
		<li>Bata suavemente na base do tubo com as hESCs várias vezes para obter uma suspensão de célula uniforme. Usando a seringa de microlitro de vidro de 10 μL com uma agulha romba 33G, retire 2 μL de células/meio. Retire as células imediatamente antes da injeção para evitar o assentamento/aglomeração celular na seringa.</li>
		<li>Usando uma agulha descartável 30G, faça uma ferida de esclerectomia 2 mm atrás do limbo. Mantenha o ângulo da agulha em ~45° para evitar tocar na lente. Uma vez que a ponta da agulha é visualizada no olho, retire suavemente a agulha. Descarte a agulha no compartimento afiado após o uso para evitar ferimentos por picada de agulha.</li>
		<li>Pegue a seringa de vidro e insira a agulha romba na ferida de esclerectomia. Sem tocar na lente, avance a agulha romba até atingir a retina oposta da ferida de entrada. Certifique-se de que a área de injeção está livre dos principais vasos sanguíneos da retina para evitar hemorragias.</li>
		<li>Penetre suavemente na retina até que um ramo de pressão na esclera seja visto. Mantenha a extremidade romba da agulha paralela à esclera para evitar o vazamento das células para o espaço vítreo.</li>
		<li>Injete lentamente 2 μL de suspensão celular ou meio PRDM (controle) no espaço sub-retiniano enquanto a pressão suave é mantida na seringa. Com uma injeção bem-sucedida, uma mancha visível (ou seja, retina elevada com a suspensão/mídia celular) deve ser formada no local da injeção. NOTA: Apenas uma pressão suave deve ser usada durante a injeção para evitar o rasgo da retina e o bloqueio das células na ponta da agulha.</li>
		<li>Depois de confirmar a bolha, aguarde 10 s para deixar as células se acomodarem. Retraia suavemente a agulha do olho.</li>
	</ol></li>
	<li>Tomografia de coerência óptica (OCT) intraoperatória (OCT) da bolha (opcional)<ol><li>Posicione o olho do mouse para visualizar a mancha sob o microscópio, movendo lentamente a cabeça. Fixe a posição segurando suavemente a cabeça. Nenhuma dilatação pupilar adicional é necessária. Não retire a tampa e o gel no olho. Ele dá uma mídia óptica clara para visualizar o bleb.</li>
		<li>Execute a OCT intraoperatória usando a função iOCT integrada do microscópio cirúrgico.</li>
		<li>Pressione a opção Cubo na tela da OCT e posicione a área de digitalização no bleb pressionando os botões de seta . Ajuste a OCT deslizando Centralização e Foco para obter a melhor qualidade da OCT. Pressione Capturar/Digitalizar para adquirir a varredura da OCT da área de bleb. Revise as imagens para verificar a qualidade das digitalizações.</li>
	</ol></li>
	<li>Recuperação<ol><li>Retire a tampa e limpe o gel do olho com gaze. Aplique pomada antibiótica uma vez após a injeção para prevenir a infecção.</li>
		<li>Permitir que o animal se recupere da anestesia sob uma luz quente até que recupere a consciência suficiente para manter a decúbito esternal e retornar à gaiola de origem. Monitore o animal por pelo menos 3 dias após a injeção em busca de sinais de inflamação, infecção e angústia. NOTA: A luz quente de 150 W deve estar a pelo menos 30 cm de distância da gaiola do animal, e deve-se tomar cuidado para evitar uma lesão por queimadura.</li>
		<li>Administrar uma injeção subcutânea de buprenorfina (0,05 mg/kg) 8 de hora em hora por 1 dia ou por recomendação do veterinário. Se for observada inflamação ou infecção do olho, consulte um profissional veterinário para o tratamento adequado.</li>
	</ol></li>
	<li>Limpeza e esterilização dos instrumentais<ol><li>Lave a seringa de microlitro de vidro de 10 μL e a agulha romba 33G com etanol 100% 10x. Lave o etanol piscando a seringa com água destilada.</li>
		<li>Dissimule a seringa de vidro e a agulha. Seque a seringa para armazenamento.</li>
	</ol></li>
</ol>

Visão revitalizante: terapia com células-tronco para degeneração da retina

Hwee Goon Tay é co-fundador da Alder Therapeutics AB. Outros autores declaram não haver interesses concorrentes.

A injeção sub-retiniana tem sido utilizada para transplante de suspensão celular para tratamento de EPR e doenças retinianas23,25,26,27,28,31,40. Esta abordagem é altamente essencial em estudos com roedores, não apenas para abordagens de transplante celular e terapia gênica, mas também para ...

Doenças hereditárias da retina e degeneração macular relacionada à idade levam à perda de células fotorreceptoras e eventual cegueira. O fotorreceptor retiniano é a camada do segmento externo da retina composta por células especializadas responsáveis pela fototransdução (isto é, conversão de luz em sinais neuronais). As células fotorreceptoras do bastonete e do cone estão adjacentes à camada pigmentada da retina (EPR)1. A terapia de reposição de células fotorreceptoras para compensar a perda celular tem sido uma abordagem terapêutica emergente e em desenvolvimento. Células-tronco embrionárias (CTEs)2,3,4, células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) derivadas de EPRs e células progenitoras da retina (RPCs)4,5,6,7,8 foram usadas para restaurar as células fotorreceptoras danificadas. O espaço sub-retiniano, um espaço confinado entre a retina e o EPR, é um local atraente para depositar essas células para substituir as células fotorreceptoras danificadas, o EPR e as células de Mueller devido à sua vizinhança9,10,11.
Terapias gênicas e celulares têm utilizado o espaço sub-retiniano para medicina regenerativa para várias doenças retinianas em estudos pré-clínicos. Isso inclui a entrega de cópias funcionais do gene ou ferramentas de edição gênica na forma de terapia anti-senso com oligonucleotídeos12,13 ou CRISPR/Cas9 ou edição de base via estratégia baseada em vírus adenoassociado (AAV) 14,15,16, implantação de materiais (por exemplo, folha de EPR, próteses retinianas 17,18,19) e organoides retinianos derivados de células-tronco diferenciadas 20,21,22 para tratar doenças retinianas e relacionadas à EPR. Ensaios clínicos utilizando hESC-RPE31 no espaço sub-retiniano para tratar amaurose congênita de Leber (LCA) associada ao EPR6523,24, acromatopsia ligada ao CNGA325, retinite pigmentosa associada a MERTK26, coroideremia 27,28,29,30 provaram ser uma abordagem eficaz. A injeção direta de células nas proximidades da área danificada melhora muito a chance de assentamento celular na região apropriada, integração sináptica e eventual melhora visual.
Embora a injeção sub-retiniana em modelos humanos e de olhos grandes (i.e., porco 32,33,34,35, coelho 36,37,38,39,40 e primata não humano 41,42,43) tenha sido estabelecida, tal injeção no modelo murino ainda é desafiadora devido à restrição do tamanho do globo ocular e enorme lente ocupando o olho do rato 44,45,46. No entanto, modelos geneticamente modificados só estão prontamente disponíveis em pequenos animais e não em animais de grande porte (ou seja, coelhos e primatas não humanos), portanto, a injeção sub-retiniana em camundongos chama a atenção para investigar novas abordagens terapêuticas em doenças genéticas da retina. Três abordagens principais estão sendo usadas para entregar células ou AAVs no espaço sub-retiniano: a via transcorneana, a via transescleral e a via pars plana (ver Figura 2). As vias transcórnea e transescleral estão associadas à formação de catarata, sinéquias, sangramento de coroide e refluxo do local da injeção 11,44,45,47,48,49. Adotamos a abordagem pars plana como visualização direta do processo de injeção, e o local de injeção pode ser obtido em tempo real ao microscópio.
Recentemente, descrevemos um método que pode diferenciar células-tronco embrionárias humanas (hESCs) em progenitores fotorreceptores sob condições xenofree, quimicamente definidas, usando a isoforma LN523 recombinante de laminina específica da retina humana. Uma vez que o LN523 estava presente na retina, hipotetizamos que o nicho da matriz extracelular da retina humana poderia ser recapitulado in vitro e, assim, apoiar a diferenciação dos fotorreceptores das hESCs36. A análise transcriptômica de célula única mostrou que progenitores fotorreceptores co-expressando homeobox e recuperatina cone-rod foram gerados após 32 dias. Um modelo mutante de camundongo com degeneração retiniana 10 (rd10) que imita retinose pigmentar humana autossômica foi usado para avaliar a eficácia dos progenitores de fotorreceptores derivados do hESC do dia 32 in-vivo. As células progenitoras do fotorreceptor derivadas do hESC foram injetadas no espaço sub-retiniano de camundongos rd10 em P20, onde a disfunção e a degeneração dos fotoceptores estão em curso36. Aqui, descrevemos um protocolo detalhado para a preparação dos progenitores fotorreceptores derivados de hESC pós-criopreservados e liberação no espaço sub-retiniano de camundongos rd10 . Este método também pode ser usado para administrar AAVs, suspensões celulares, peptídeos ou produtos químicos no espaço sub-retiniano em camundongos.

<table><tbody><tr><td>0,3% de Tobramicina</td><td>Novartis</td><td>NDC &nbsp; 0078-0813-01</td><td>Tobrex (3,5 g)</td></tr><tr><td>0,3% Tobramicina e 0,1% Dexametasona</td><td>Novartis</td><td>NDC 0078-0876-01</td><td>Tobradex (3,5 g)</td></tr><tr><td>0,5% Cloridrato de Proparacaína</td><td>Alcon</td><td>NDC 0998-0016-15</td><td>0,5% Alcaína (15 mL)</td></tr><tr><td>1 mL Seringa de tuberculina</td><td>Turemo</td><td>SS01T2713</td><td></td></tr><tr><td>1% Tropicamida</td><td>Alcon</td><td>NDC 0998-0355-15</td><td>1% Mydriacyl (15 mL)</td></tr><tr><td>Cloridrato de fenilefrina 2,5%</td><td>Alcon</td><td>NDC 0998-0342-05</td><td>2,5% Mydfrin (5 mL)</td></tr><tr><td>Placa de cultura de tecidos de 24 poços</td><td>Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>30 G Agulha descartável</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>305128</td><td></td></tr><tr><td>33 G, agulhas rombas de 20 mm de comprimento</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>Contador de células automatizado</td><td>NanoEnTek</td><td>Modelo: Eve</td><td></td></tr><tr><td>B27 sem Vitamina A</td><td>Life Technologies</td><td>12587001</td><td>2%36</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Ceva</td><td></td><td>Vetergesic vet (0,3 mg/mL)</td></tr><tr><td>CKI-7</td><td>Sigma</td><td>C0742</td><td>5 &micro; M36</td></tr><tr><td>Ciclosporina</td><td>Novartis</td><td></td><td>260 g/L em água potável</td></tr><tr><td>Dia 32 Células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC</td><td>DUKE-NUS Medical School</td><td></td><td>As células-tronco embrionárias humanas são diferenciadas por 32 dias. Veja o protocolo na Ref 36.</td></tr><tr>Fornecedor verificado - <td>Gauze</td><td>Winner Industries Co., Ltd.</td><td>1SNW475-4</td><td></td></tr><tr><td>Glasgow Mínimo Essencial Médio</td><td>Gibco</td><td>11710&ndash; 035</td><td></td></tr><tr><td>linha celular hESC H1</td><td>WiCell Research Institute</td><td>WA01</td><td></td></tr><tr><td>Fator neurotrófico derivado do cérebro humano (BDNF)</td><td>Peprotech</td><td>450-02-50</td><td>10 ng/mL36</td></tr><tr><td>Fator neurotrófico ciliar humano (CNTF)</td><td>Prospec-Tany Technogene</td><td>CYT-272</td><td>10 ng/mL36</td></tr><tr><td>Cloridrato de cetamina (100 mg/mL)</td><td>Ceva Sant&eacute; Animale</td><td>KETALAB03</td><td></td></tr><tr><td>LN-521</td><td>Biolamina</td><td>LN521-02</td><td>1 &micro; g36</td></tr><tr><td>mFreSR</td><td>Seringa</td> de vidro de microlitro STEMCELL Technologies <td>5854</td><td></td></tr><tr><td>(10 mL)</td><td>Hamilton</td><td>7653-01</td><td></td></tr><tr><td>N-[N-(3,5-difluorofenacetil-L-alanil)]-S-fenilglicina t-butil éster (DAPT)</td><td>Selleckchem</td><td>S2215</td><td>10 &micro; Suplemento M36</td></tr><tr><td>N-2</td><td>Life Technologies</td><td>A13707-01</td><td>1%36</td></tr><tr><td>Aminoácidos não essenciais (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140&ndash; 050</td><td>1x36</td></tr><tr><td>NutriStem XF Media</td><td>Satorius</td><td>05-100-1A</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio cirúrgico</td><td>Zeiss</td><td>OPMI LUMERA 700</td><td>Com função iOCT integrada</td></tr><tr><td>PRDM (Meio de diferenciação de fotorreceptores, 50ml)</td><td>DUKE-NUS Medical School</td><td></td><td>Veja a composição do meio36. Basal Médio, 10 &micro; M DAPT, 10 ng/mL BDNF, 10 ng/mL CNTF, 0,5 &micro; M Ácido retinóico, 2% B27 e 1% N2. Meio basal: 1x GMEM, 1 mM de piruvato de sódio, 0,1 mM de B-mercaptoetanol, 1x Aminoácidos não essenciais (NEAA).</td></tr><tr><td>Pyruvate</td><td>Gibco</td><td>11360; 070</td><td>1 camundongos mM36</td></tr><tr><td>Rd10</td><td>Jackson Laboratory</td><td>B6. Camundongos CXB1-Pde6brd10/J</td><td>Sexo: macho/fêmea, Idade: P20 (injeção), Peso: 3-6 g&nbsp;</td></tr><tr><td>Ácido retinóico</td><td>Tocris Bioscience</td><td>0695/50</td><td>0.5 &micro; M36</td></tr><tr><td>Round Cover Slip (12 mm)</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-545-80</td><td></td></tr><tr><td>SB431542</td><td>Sigma</td><td>S4317</td><td>0.5 &micro; M36</td></tr><tr><td>Vidisic Gel (10 g)</td><td>Dr. Gerhard Mann</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de xilazina (20 mg/mL)</td><td>Troy Laboratories</td><td>LI0605</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>Life Technologies</td><td>21985&ndash; 023</td><td>0,1 mM36</td></tr></tbody></table>

liberação sub-retiniana de progenitores de fotorreceptores derivados de células-tronco embrionárias humanas em camundongos rd10

Sub-Retinal Delivery of Human Embryonic Stem Cell Derived Photoreceptor Progenitors in rd10 Mice

A regeneração de células fotorreceptoras utilizando células-tronco pluripotentes humanas é uma terapia promissora para o tratamento de doenças retinianas hereditárias e envelhecidas em estágios avançados. Mostramos que a matriz isoforme de laminina recombinante específica da retina humana é capaz de apoiar a diferenciação de células-tronco embrionárias humanas (hESCs) em progenitores fotorreceptores. Além disso, a injeção sub-retiniana dessas células também mostrou restauração parcial nos modelos rd10 de roedores e coelhos. A injeção sub-retiniana é conhecida por ser um método estabelecido que tem sido usado para entregar compostos farmacêuticos às células fotorreceptoras e à camada epitelial pigmentada da retina (EPR) do olho devido à sua proximidade com o espaço alvo. Ele também tem sido usado para entregar vetores virais adenoassociados no espaço sub-retiniano para tratar doenças da retina. A entrega sub-retiniana de compostos farmacêuticos e células no modelo murino é desafiadora devido à restrição no tamanho do globo ocular murino. Este protocolo descreve o procedimento detalhado para a preparação de células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC para injeção e a técnica de liberação sub-retiniana dessas células em camundongos mutantes genéticos da retinose pigmentosa, rd10. Esta abordagem permite a terapia celular para a área alvo, em particular a camada nuclear externa da retina, onde ocorrem doenças que levam à degeneração dos fotorreceptores.

A seringa de vidro de 10 μL foi montada de acordo com as instruções do fabricante (Figura 1), e a agulha romba usada para entregar a suspensão/meio celular é mostrada na Figura 1B. Diferentes abordagens para injeção sub-retiniana são ilustradas na Figura 2. Descrevemos a abordagem pars plana neste protocolo (Figura 2C). A agulha romba montada em uma seringa de vidro foi inserida através de uma ferida de...

Descrevemos um protocolo detalhado para a preparação de células progenitoras fotorreceptoras derivadas de hESC pós-criopreservadas e a liberação sub-retiniana dessas células em camundongos rd10 .

Liberação Sub-Retiniana de Progenitores de Fotorreceptores Derivados de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Camundongos rd10

Regeneration of photoreceptor cells using human pluripotent stem cells is a promising therapy for the treatment of both hereditary and aging retinal ...

Minha pesquisa se concentra no desenvolvimento de terapia baseada em células-tronco para estágios avançados de doenças da retina que causam degeneração de fotorreceptores. O objetivo de nossa pesquisa é repor a perda de fotorreceptores em pacientes com progenitores fotorreceptores clinicamente seguros e funcionais, com o objetivo de melhorar sua acuidade visual ou mesmo restaurar sua visão. O principal modelo pré-clínico são camundongos, mas seu globo ocular de tamanho pequeno torna difícil injetar materiais, especialmente sob a retina.Desenvolver a habilidade para realizar injeções sub-retinianas bem-sucedidas requer paciência e perseverança. Desenvolvemos com sucesso uma base de laminina para o método de diferenciação de receptores capaz de gerar progenitores fotorreceptores em 32 dias. Os transplantes sub-retinianos das suspensões de células progenitoras deste fotorreceptor nos roedores resultaram em conectividade sináptica entre os orifícios e o enxerto nos olhos.Isso levou à restauração visual parcial. Nossa abordagem é simples, a visualização correta ajuda o cirurgião a manusear a agulha até a área de interesse.

sub-retinal-delivery-human-embryonic-stem-cell-derived-photoreceptor

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Esta técnica cirúrgica ilustra a injecção de vectores de terapia genética e de células estaminais para o espaço sub-retiniano do olho do rato.

Injeção de sub-retiniana de Vetores da terapia genética e células-tronco no olho do rato

O transplante celular representa uma estratégia para o tratamento da degeneração da retina caracterizada pela perda de fotorreceptor. Aqui descrevemos um método de enriquecimento de fotorreceptores transplantáveis e seu enxerto subretinal em camundongos adultos.

Transplante subretinal de células precursoras do fotoreceptor purificado MACS na retina do rato adulto

Aqui apresentamos um protocolo aceito pela comunidade em formato multimídia para injeção sub-retina de um bolus de células RPE em ratos e camundongos. Essa abordagem pode ser usada para determinar potenciais de resgate, perfis de segurança e capacidades de sobrevivência de células RPE enxertadas após implantação em modelos animais de degeneração retiniana.

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

Subretinal injeção tem sido amplamente aplicada em estudos pré-clínicos de terapia de reposição de células-tronco para degeneration macular age-related. Neste artigo visualizado, descrevemos uma técnica de injeção subretinal menos arriscado, reproduzíveis e precisamente modificados através da abordagem trans-escleral para entregar as células nos olhos de rato.

Desenvolvimento de um protocolo refinado para Trans-escleral apresentam transplante de células epiteliais de pigmento Retinal humano nos olhos de rato

Células epiteliais de pigmento retinal podem servir como uma terapia de reposição celular para a forma avançada de degeneration macular age-related seco. Este protocolo descreve a geração de um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica e o subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal embrionárias humanas células-tronco derivadas para este modelo de doença.

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

Nós descrevemos um método para engenheiro um retina tecido composto de células epiteliais de pigmento retinal derivadas de células-tronco pluripotentes humanas cultivadas em cima de membrana amniótica humana e sua preparação para enxertia em modelos animais.

Engenharia de tecido de epitélio do pigmento da retina transplante-apropriado derivado de células estaminais embrionárias humanas

Apresentamos aqui uma técnica cirúrgica para transplante de tecido retiniano derivado de células-tronco pluripotentes humanas (hPSC) no espaço sub-retiniano de um modelo animal de grande porte.

Transplante Sub-Retiniano de Tecido Retiniano Derivado de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Modelo Animal de Grande Porte Felino

Este protocolo apresenta uma abordagem trans-escleral guiada por visão transpupilar para entregar com segurança e precisão enxertos celulares sub-retinianos, com baixa taxa de complicações cirúrgicas, em receptores de camundongos com ou sem degeneração retiniana.

Transplante transpupilar-guiado trans-escleral de enxertos sub-retinianos em modelo de camundongo com degeneração retiniana

Um método é descrito para propagar tumores retinoblastoma humano em camundongos. Células tumorais são diretamente injetadas nos olhos de ratos imune deficiente. Tumores secundários foram estabelecidas com sucesso usando as duas células diretamente colhidas a partir de tumores humanos e tumorspheres cultivadas.

Estabelecimento e propagação de Tumores Humanos em Retinoblastoma Imune camundongos deficientes

Transplante de Células-tronco em um In vitro Modelo de isquemia / reperfusão Simulated

Aprenda a preparar progenitores de fotorreceptores derivados de células-tronco embrionárias humanas e sua injeção sub-retiniana em camundongos rd10. Este protocolo de 32 dias permite estudar terapias celulares para degeneração retiniana.

Liberação Sub-Retiniana de Progenitores de Fotorreceptores Derivados de Células-Tronco Embrionárias Humanas em Camundongos rd10

Explorar mais vídeos