Name: A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: Aprenda a isolar fração vascular estromal mecanicamente e combiná-la com hidrogel de fibrina para engenharia tecidual e cicatrização de feridas crônicas. Este método oferece uma solução autóloga eficiente.

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<meta charset="utf8"></head><body>Fração vascular estromal mecânica em hidrogel de fibrina para medicina regenerativa

<table><tbody><tr><td>12-Wellplate</td><td>Sarstedt</td><td>83.3921</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI)</td><td>Biochemica</td><td>A1001.0010</td><td></td></tr><tr><td>50 mL-Falcon</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Toalhas Absorventes, Pacote com Dois</td><td>Halyard</td><td>89701</td><td></td></tr><tr><td>Alamar blue 25 mL</td><td>Invitrogen</td><td>DAL1025</td><td></td></tr><tr><td>Albumina, Bovino (BSA)</td><td>VWR</td><td>0332-500G</td><td></td></tr><tr><td>Biotek Cytation 5&nbsp;</td><td>Leitor</td> de <td>Microplacas Multimodo para Imagens Celulares</td> Agilent<td></td>&nbsp;</tr><tr><td>CaCl2&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670-500G</td><td></td></tr><tr><td>Criostato</td><td>Micrótomo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM com 4,5 g/L de glicose, com L-Glutamina, com piruvato de sódio</td><td>VWR</td><td>392-0416</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Epinefrina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4250</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino</td><td>Biowest</td><td>S181H-500</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogênio Plasma Humano 100 mg</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>341576-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Formalina 4%</td> <td>Formafix</td><td>1308069</td><td></td></tr><tr><td>FSC 22-Einbettmedium, blau</td><td>Biosystems</td><td>3801481S</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina & Solução de eosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3136 / HT110132</td><td></td></tr><tr><td>Ringer com lactato' s Solução 1000 mL</td><td>B Braun</td><td>R5410-01</td><td></td></tr><tr><td>Mercedes Cânula 4mm</td><td>MicroAire</td><td>PAL-R404LL</td><td></td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td> <td>Bbraun</td><td>570160</td><td></td></tr><tr><td>OCT Matriz de Incorporação 125 mL</td><td>CellPath</td><td>KMA-0100-00A</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Fisher Scientific</td><td>10342243</td><td></td></tr><tr><td>PBS 1%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P4474</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4333-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Petrídico 150mm</td><td>Sarstedt</td><td>83.1803</td><td></td></tr><tr><td>Faloidina-iFluor 488 Reagente</td><td>Abcam</td><td>ab176753</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Estéril 20 mL Luer</td><td>HENKE-JECT</td><td>5200-000V0</td><td></td></tr><tr><td>Seringa Estéril 30 mL Luer-Lock</td><td>BD</td><td>10521</td><td></td></tr><tr><td>Trombina de Plasma Humano</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6884-100UN</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tranexâmico</td><td>Orpha Swiss</td><td>6837093</td><td></td></tr><tr><td>Tulipfilter 1.2</td><td>Lencion Cirúrgico</td><td>ATLLLL</td><td></td></tr><tr><td>Tulipfilter 1.4</td><td>Lencion Cirúrgico</td><td>ATLLLL</td><td></td></tr></tbody></table>

a combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

The Combination of Mechanically Isolated Stromal Vascular Fraction and Fibrin Hydrogel: A Processing Protocol

Ensaio de resazurina Primeiro, examinamos a viabilidade celular in vitro das células mSVF. Para isso, realizamos um ensaio de viabilidade celular de resazurina nos dias 0, 3 e 7. A viabilidade celular nos dias 0, 3 e 7 de um total de quatro amostras é mostrada na Figura 1. Os valores do dia 0 servem como linha de base e foram definidos como 100%. No dia 3, o controle positivo (mSVF) mostrou uma ligeira diminuição para 78,92% (± 5,33%), enquanto a combinação mSVF-...

A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

The regenerative potential of adipose-derived stromal cells (ASCs) has gained significant attention in regenerative and translational research. In the ...

the-combination-mechanically-isolated-stromal-vascular-fraction

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Medicine

Medicina

Descrevemos o isolamento de cardiomiócitos neonatal e na preparação das células para encapsulamento em construções de hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos. Descrevemos métodos para analisar a engenharia de tecidos do miocárdio após o período de cultura, incluindo a força ativa gerada com a estimulação elétrica e viabilidade celular e coloração imuno.

Encapsulamento de Cardiomyocytes em um hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos

Isso detalhes o trabalho de preparação de fibrina scaffolds 3D para cultura e diferenciação das células-tronco plutipotent. Tais suportes podem ser usados ​​para examinar os efeitos de vários compostos biológicos sobre o comportamento das células estaminais, bem como modificada para conter sistemas de entrega de drogas.

Preparação de fibrina Andaimes 3D para aplicações de cultura de células-tronco

Este protocolo é focado na utilização a capacidade inerente de células estaminais para tomar cue a partir de sua matriz circundante extracelular e ser induzidas a diferenciar-se em múltiplos fenótipos. Este manuscrito métodos estende nossa descrição e caracterização de um modelo utilizando um hidrogel de camada dupla, composto de PEG-fibrina e colagénio, ao mesmo tempo, co-diferenciar células-tronco...

Engenharia de um hidrogel de camada dupla para controlar a diferenciação ASC

Foram utilizadas técnicas de microscopia e processamento de imagem com lapso de tempo para observar e analisar a compactação de gel mediada por fibroblasto e o realinhamento da fibra fibrina em um bioreator ambientalmente controlado durante um período de 48 horas.

Observando e quantificando compactação de gel de fibrina mediada por fibroblasto

Este modelo de sistema começa a partir de um gel de fibrina miofibroblastos povoada que pode ser usado para estudar colagénio endógeno (re) organização em tempo real de uma forma não destrutiva. O modelo de sistema é muito sintonizável, como ele pode ser usado com diferentes fontes de células, aditivos médio, e pode ser facilmente adaptada às necessidades específicas.

Engenharia baseada em fibrina construções de tecido de miofibroblastos e de aplicação de restrições e tensão para induzir a organização das células e colágeno (Re)

Para a criação de estruturas altamente organizadas de tecidos complexos, deve-se montar vários tipos de materiais e células em um composto integrado.  Este projeto combinatório incorpora folhas de células em camadas específicas de órgãos com dois materiais distintos derivados biologicamente contendo uma forte base de matriz fibrosa e células endoteliais para aumentar a formação de novos vasos.

Engenharia de Tecidos: Construção de um multicelular 3D andaime para a entrega de camadas celulares Sheets

O protocolo descreve como engenheiro uma rede vascular perfusable em um esferoide. Microambiente ao redor do spheroid é concebido para induzir a angiogênese e conectar o spheroid para os microcanais em um dispositivo microfluidic. O método permite a perfusão do spheroid, que é uma técnica muito aguardada em culturas tridimensionais.

Perfusable rede Vascular com um modelo de tecido em um dispositivo Microfluidic

O método apresentado envolve alongamento uniaxial de hidrogéis macios 3D embutidos na borracha de silicone, permitindo microscopia confocal ao vivo. Demonstra-se a caracterização das cepas de hidrogel externos e internos, bem como o alinhamento de fibras. O dispositivo e o protocolo desenvolvidos podem avaliar a resposta das células a vários regimes de tensão.

Tensão controlada de hidrogéis 3D sob imagem de microscopia ao vivo

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar um modelo de pele simplificado e indiferenciado tridimensional usando uma plataforma microfluida micromaquinda. Uma abordagem de fluxo paralelo permite a deposição in situ de um compartimento dérmico para a semeadura de células epiteliais em cima, todas controladas por bombas de seringa.

Geração de um modelo simplificado de pele em um chip tridimensional em uma plataforma microfluida micromaquinda

Um protocolo reprodutível é apresentado para a preparação, enriquecimento e aplicação de um hidrogel in situ de luz azul e reticulável gelatina–riboflavina para reparo de feridas estromais corneanas em coelhos, incluindo etapas procedimentais para manuseio cirúrgico, tarsórrafia parcial e cuidados pós-operatórios.

Fabricação e Aplicação Cirúrgica de Hidrogéis Enriquecidos de Gelatina–Riboflavina com Foto-Cruzamento para Reparo de Feridas Corneanas em Coelhos

Aprenda a isolar fração vascular estromal mecanicamente e combiná-la com hidrogel de fibrina para engenharia tecidual e cicatrização de feridas crônicas. Este método oferece uma solução autóloga eficiente.

A combinação de fração vascular estromal isolada mecanicamente e hidrogel de fibrina: um protocolo de processamento

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