Otimização do Modelo de Periodontite Induzida por Ligadura para Pesquisa Pré-clínica

Nosso laboratório investiga a doença periodontal, examinando como a inflamação causa danos gengivais e ósseos em diferentes grupos de indivíduos. Nosso objetivo é prevenir gengivite e periodontite, focando em novos jogadores e novas vias de doença. O modelo simplificado de camundongo para periodontite induzida por ligadura utiliza um fio único com nó duplo entre os dentes, utilizando ferramentas impressas em 3D, a cama dentária do camundongo e o suporte para a ligadura, que é menos complexo do que os modelos tradicionais.

Essa abordagem utiliza a técnica de inalação de anestesia, que resulta em uma recuperação mais rápida para camundongos, em menos de 10 minutos, em comparação com modelos mais tradicionais que utilizam anestesia injetável, onde o tempo de recuperação pode ser de cerca de 30 minutos. Para preparar o conjunto da cama dentária do rato, coloque todas as partes da cama dental e a cola na plataforma de trabalho. Depois, fixe as peças estabilizadoras da cabeça na posição usando a cola.

Usando uma lâmina número três em um cabo de bisturi 15C, bisel as bordas afiadas na parte externa do suporte da ligadura trava em um ângulo de 45 graus para reduzir o desconforto durante o travamento ou destravamento. Alinhe quaisquer cantos arredondados internos na trava do suporte da ligadura. Remova o flash das bordas superior e inferior da impressão 3D e faça um chanfro dessas bordas a 45 graus.

Retire uma fatia de cada ponta do suporte da ligadura em um ângulo de 45 graus para evitar lesões traumáticas nos tecidos moles. Certifique-se de que cada ponta no suporte da ligadura tenha uma entalhe em formato de V. Se essa entalhe em formato de V for visível, coloque uma lâmina de bisturi 15C suavemente na base da ranhura.

Agora, incline cuidadosamente a lâmina em direção à superfície externa da ponta e refine a base da entalhe em V na borda externa. Se a entalhe em V não for visível, coloque uma lâmina de bisturi 15C no meio da ponta do suporte da ligadura e, em um movimento deliberado, faça um corte raso para criar uma entalhe em V. Ao enfiar a ligadura nos sulcos, certifique-se de que dois nós fiquem centralizados e nivelados quando vistos da frente do suporte da ligadura.

Usando um explorador dentário, confirme que a ligadura volta ao lugar sem escorregar quando uma força suave for aplicada entre os nós. Para a colocação da ligadura, posicione o camundongo anestesiado na cama dentária do rato com as costas contra a cama e o nariz posicionado próximo ao cone nasal. Usando elásticos, estabilize a cabeça do rato e abra sua boca.

Para colocar uma ligadura no lado direito, segure o suporte da ligadura na mão direita e o explorador na esquerda. Coloque delicadamente a ponta do explorador abaixo do contato interproximal dos primeiros e segundos molares no lado palatino. Usando a ponta exploradora, primeiro toque os dentes, depois deslize para baixo e apoie na gengiva para evitar traumatizar o tecido mole.

Apoie a alça exploradora em uma angulação horizontal depois de posicionada corretamente. Certifique-se de usar corretamente a ponta exploradora para a colocação da ligadura. Prenda o explorador na área de contato proximal e estabilize a cabeça contra forças reativas.

Retraa a bochecha usando o suporte da ligadura e posicione a ligadura sobre o contato interproximal entre o primeiro e o segundo molar. Em seguida, gire o cabo do suporte da ligadura até 45 graus e, com uma combinação de balanço suave e deslizamento, empurra a ligadura através do contato. Usando pinças finas de agulha, prenda o excesso de linha preso ao nó do lado direito.

Puxe a linha pelos dentes para a esquerda e deslize a tesoura pelo fio até posicioná-la aproximadamente 1,5 milímetros do nó antes de cortar. Para análise micro CT, abra o software e clique em Arquivo, depois Importar imagem. No menu pop-up, clique em Navegar.

Vá até a pasta contendo arquivos DICOM para uma varredura e selecione o primeiro arquivo. Clique em Examinar para encontrar e selecionar quaisquer outros arquivos dentro da pasta para a mesma amostra escaneada. Depois, clique em OK. Quando as imagens começarem a carregar, clique em Visualizar e Isosuperfície.

Mude o limiar da imagem para 5.000 e o fator de qualidade da superfície por porcentagem para 55. Marque as caixas marcadas como Habilitar Suavização de Imagem e Clipe Superfície com o ROI atual, e clique em Atualizar. Para ajustar as propriedades dos níveis, clique com o botão direito em Janela/Nível na parte inferior e clique em Editar Janela/Propriedades do Nível.

Defina o valor da densidade óssea para 2.000 e mantenha-o constante em todas as medições. Para manipular planos, use atalhos de teclado IJK hide e show para os três planos diferentes. Clique com o botão direito e mova o cursor para dar zoom in e out.

Pressione Shift e clique com o botão esquerdo para panorâmica. Depois, clique em Slice para mover e girar os planos. Em seguida, clique no centro do avião para movê-lo para frente ou para trás.

Alternativamente, coloque o cursor no centro do plano desejado e use as setas para cima e para baixo para mover o plano uma fatia de cada vez. Clique na borda do plano para girar ao redor de uma linha paralela a essa aresta no centro do plano. Clique no canto de um plano para girar ao redor do plano.

Em seguida, oriente a fatia em Z, vista em azul no topo da tela, de modo que as superfícies dos três dentes fiquem visíveis ao mesmo tempo ou o mais próximas possível. Depois, role pelo mesmo plano de corte Z até que as raízes dos primeiro e segundo molares fiquem visíveis, garantindo que a anatomia e os canais ao redor estejam bem definidos. Alinhe o eixo x com as raízes bucais do primeiro e segundo molar pela parte central de cada canal radicular.

Alternativamente, alinhe-se pela raiz bucal do primeiro molar e pela raiz distobucal do segundo molar. Em seguida, use a orientação da fatia X como referência para o alinhamento da fatia Y. Alinhe a fatia Y verticalmente paralela através da raiz do primeiro molar no painel da fatia X.

Gire o plano para orientar a raiz verticalmente e observe que as linhas azuis cruzam pelo meio da raiz. No painel de corte em Y, para medir a distância da junção cemento-esmalte, ou CEJ, até a crista do osso alveolar, ou ABC, coloque o cursor no ponto mais profundo do sulco na CEJ e pressione 1. Depois, coloque o cursor no ponto mais próximo do ABC e pressione 2.

Uma seta azul indica o primeiro ponto, e o segundo ponto é indicado por uma seta verde. Se as setas indicando os pontos de medição não aparecerem imediatamente, passe o cursor sobre as áreas desejadas e pressione as teclas numéricas do teclado. Se o CEJ for difícil de determinar, use as setas para cima e para baixo para percorrer as fatias adjacentes e confirmar sua localização.

Quando determinar o ponto mais próximo do ABC for difícil, meça múltiplos pontos para garantir uma medição consistente. Apesar do nosso sucesso com nosso artigo sobre protocolos, novos pesquisadores ainda encontraram dificuldades na montagem e utilização das ferramentas impressas em 3D, da cama dentária do camundongo, do suporte da ligadura. Para resolver isso, criamos um vídeo passo a passo que guia os pesquisadores pela montagem e utilização dessas ferramentas impressas em 3D, para que possam ser usadas em um ambiente de laboratório.

Nossa equipe de pesquisa utilizou estudos clínicos e o modelo simplificado de periodontite induzida por ligadura para descobrir como um grupo de proteínas chamado inflamassoma pode ser usado para interromper o desenvolvimento de inflamação e periodontite.