Name: Identificação e análise de progenitores miogênicos in vivo durante lesão muscular esquelética aguda por citometria de massa de célula única de alta dimensão (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-01T14:35:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Aprenda a identificar progenitores miogênicos durante lesão muscular aguda usando citometria de massa de célula única em modelos murinos. Este método revela assinaturas moleculares únicas e dinâmicas de regeneração.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>Análise CyTOF de célula única de progenitores miogênicos na regeneração muscular

<table><tbody><tr><td>Tubo de centrífuga de 15 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-886</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de 20 G</td><td>KDM</td><td>KD-900123</td><td></td></tr><tr><td>fina 28 G, seringa de insulina de 0,5 mL&nbsp;</td><td>BD</td><td>329461</td><td></td></tr><tr><td>29 G, seringa de insulina de 0,3 mL Seringas</td><td>BD</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>seringas de 3 mL</td><td>Terumo medical</td><td>MDSS03SE</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; filtros de células m</td><td>Fisher Scientific</td><td>11587522</td><td></td></tr><tr><td>tubos de polipropileno de 5 mL&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>352002</td><td></td></tr><tr><td>tubos de ensaio de poliestireno de 5 mL com 35 &micro; filtro de células</td><td>m Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>seringas de 5 mL</td><td>Terumo medical</td><td>SS05LE1</td><td></td></tr><tr><td>tubo de centrífuga de 50 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-13</td><td></td></tr><tr><td>5-Iodo-2-desoxiuridina (IdU)</td><td>Merck</td><td>I7125-5g</td><td></td></tr><tr><td>anti-CD104 FITC (clone: 346-11A)</td><td>Biolegend</td><td>123605</td><td>Stock = 0,5 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD11b APC-Cy7 (Clone: M1/70)</td><td>Biolegend</td><td>101226</td><td>Stock = 0,2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD31 APC-Cy7 (clone: 390)</td><td>Biolegend</td><td>102440</td><td>Stock = 0,2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD45 APC-Cy7 (Clone: 30-F11)</td><td>Biolegend</td><td>103116</td><td>Stock = 0,2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-CD9 APC (clone: KMC8)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17-0091-82</td><td>Stock = 0,2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-Sca1 (Ly6A/E) APC-Cy7 (clone: D7)</td><td>Biolegend</td><td>108126</td><td>Estoque = 0,2 mg/mL</td></tr><tr><td>anti-alfa; 7 integrina PE (clone: R2F2))</td><td>UBC AbLab</td><td>67-0010-05</td><td>Stock = 1 mg/mL</td></tr><tr><td>BD FACS Aria III (4 laser) instrumento</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>405, 488, 561 e 633 nm laser</td></tr><tr><td>Albumina de soro bovino</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7030-50G</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina 0,3 mg/mL</td><td>Ceva</td><td>Vnr 054594</td><td></td></tr><tr><td>CD104 (Clone: 346-11A)</td><td>BD Biosciences</td><td>553745</td><td>Dy162; </td></tr><tr><td>CD106/VCAM-1 conjugado internamente (Clone: 429 MVCAM. a)</td> <td>Biolegend</td><td>105701</td><td>Er170; </td></tr><tr><td>CD11b conjugado interno (Clone: M1 / 70)</td> <td>BD Biosciences</td><td>553308</td><td>Nd148; </td></tr><tr><td>CD29/Integrina conjugada interna &beta; 1 (clone: 9EG7)</td><td>BD Biosciences</td><td>553715</td><td>Tm169; </td></tr><tr><td>CD31 conjugado interno (Clone: MEC 13.3)</td><td>BD Biosciences</td><td>557355</td><td>Sm154; </td></tr><tr><td>CD34 conjugado interno (Clone: RAM34)</td><td>BD Biosciences</td><td>551387</td><td>Lu175; </td></tr><tr><td>CD44 conjugado interno (Clone: IM7)</td><td>BD Biosciences</td><td>550538</td><td>Yb171; </td></tr><tr><td>CD45 conjugado interno (Clone: MEC 30-F11)</td><td>BD Biosciences</td><td>550539</td><td>Sm147; CD9 conjugado interno</td></tr><tr><td>(Clone: KMC8)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-0091-85</td><td>Yb174; </td></tr><tr><td>CD90.2/Thy1.2 conjugado interno (Clone: 30-H12)</td><td>BD Biosciences</td><td>553009</td><td>Nd144; </td></tr><tr><td>CD98 conjugado interno (Clone: H202-141)</td><td>BD Biosciences</td><td>557479</td><td>Pr141; </td></tr><tr><td>Solução de aquisição de células conjugada internamente / Maxpar CAS-buffer</td><td>Standard Biotools</td><td>201240</td><td></td></tr><tr><td>Cell-ID Intercalator-Iridium</td><td>Standard Biotools</td><td>201192B</td><td>intercalador de ácido nucleico catiônico</td></tr><tr><td>Cisplatina</td><td>Merck</td><td>P4394</td><td>Pt195</td></tr><tr><td>Cisplatina (dicloreto de cis-Diammineplatina (II))</td> <td>Merck</td><td>P4394</td><td></td></tr><tr><td>Clear 1,5 mL tubo</td><td>Fisher Scientific</td><td>11926955</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase, Tipo II</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004177</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de contagem</td><td>Merck</td><td>BR718620-1EA</td><td></td></tr><tr><td>CXCR4 / SDF1 (Clone: 2B11 / CXCR4)</td> <td>BD Biosciences</td><td>551852</td><td>Gd158; DAPI conjugado interno</td></tr><tr><td>(1 mg/mL)</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td></td></tr><tr><td>Tubo escuro de 1,5 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>15386548</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>17105041</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Dissecção</td><td>Ferramentas de Ciências Finas</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (baixa glicose, com piruvato)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11885-092</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (sal dissódico do ácido etilenodiaminotetracético)</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td>Na2EDTA-2H20</td></tr><tr><td>EQ Quatro Elementos de Calibração (EQ)</td><td>Padrão Biotools</td><td>201078</td><td>Calibração de Esferas Soro</td></tr><tr><td>Fetal Bovino, qualificado, origem brasileira</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Dumont #5SF</td><td>Fine Ferramentas Científicas</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps Dumont #7</td><td>Hounisen.com</td><td>1606.3350</td><td></td></tr><tr><td>Soro de cabra</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>16210-072</td><td></td></tr><tr><td>Sistema Helios CyTOF</td><td>Standard Biotools</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Soro de cavalo, inativado por calor, origem neozelandesa</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26-050-088</td><td></td></tr><tr><td>IdU</td><td>Merck</td><td>I7125</td><td>I127</td></tr><tr><td>Iridium-Intercalator</td><td>Standard Biotools</td><td>201240</td><td>Ir191/193</td></tr><tr><td>Isoflurano/Attane Vet</td><td>ScanVet</td><td>Vnr 055226</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/3900/17</td><td></td></tr><tr><td>Myf5 (Clone: C-20)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-302</td><td>Yb173; MyoD conjugado interno</td></tr><tr><td>(Clone: 5.8A)</td><td>BD Biosciences</td><td>554130</td><td>Dy164; MyoG conjugado interno</td></tr><tr><td>(Clone: F5D)</td><td>BD Biosciences</td><td>556358</td><td>Gd160; Tampa de</td></tr><tr><td>Garrafa Descartável Estéril de Fluxo Rápido Nalgene conjugada internamente 0.20 &mu; Filtros PES M</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>595-4520</td><td></td></tr><tr><td>Notexin</td><td>Latoxan</td><td>L8104</td><td>Ressuspende para 50 &micro; g/ml em PBS estéril. Manter estoques (por exemplo, 50 &micro; l) a -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Mistura de nutrientes F-10 (Ham's)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>31550031</td><td></td></tr><tr><td>pAkt (Clone: D9E)</td><td>Standard Biotools</td><td>3152005A</td><td>Sm152</td></tr><tr><td>Pax7 (Clone: PAX7)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-81648</td><td>Eu153; </td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina conjugada interna (10.000 U/mL) (Pen/Strep)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Unidades de Filtro PES 0.20 &mu; Filtro</td> de seringa M <td>Fisher Scientific</td><td>15913307</td><td></td></tr><tr><td>PES</td><td>Fisher Scientific</td><td>15206869</td><td></td></tr><tr><td>placa de Petri</td><td>Sarstedt</td><td>82.1472.001</td><td></td></tr><tr><td>PFA 16% EM grau</td><td>MP Biomedicals</td><td>219998320</td><td></td></tr><tr><td>cloreto de potássio (KCl)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>10375810</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potássio, monobásico,&nbsp; anidro (KH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10573181</td><td></td></tr><tr><td>pRb (Clone: J112-906)</td><td>Biotools padrão</td><td>3166011A</td><td>Er166</td></tr><tr><td>pS6 quinase (Clone: N7-548)</td><td>Biotools padrão</td><td>3172008A</td><td>Yb172</td></tr><tr><td>Sca-1 (Clone: E13-161.7)</td><td>BD Biosciences</td><td>553333</td><td>Nd142; </td></tr><tr><td>Azida de sódio</td> conjugada interna <td>Sigma Aldrich</td><td>S2002</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>10553515</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de sódio, dibásico, heptahidratado (Na2HPO4-6H2O)</td><td>Merck</td><td>S9390</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina estéril 0,9%</td><td>Fresenius</td><td>B306414/02</td><td></td></tr><tr><td>&alfa; 7 integrina (Clone: 3C12)</td> <td>MBL internacional</td><td>K0046-3</td><td>Ho165; Conjugado internamente</td></tr></tbody></table>

identificação e análise de progenitores miogênicos in vivo durante lesão muscular esquelética aguda por citometria de massa de célula única de alta dimensão

Identification and Analysis of Myogenic Progenitors In Vivo During Acute Skeletal Muscle Injury by High-Dimensional Single-Cell Mass Cytometry

Aqui, apresentamos uma visão geral da configuração experimental para usar essa abordagem combinada, que inclui (i) análise CyTOF de alta dimensão de um curso de tempo de lesão aguda por injeção de notexina para estudar a dinâmica celular e molecular de células-tronco e progenitoras no músculo esquelético (Figura 1, esquema superior); e (ii) FACS de células-tronco e progenitoras usando dois marcadores de superfície celular, CD9 e CD104, para isolar essas populações e realizar estudos aprofund...

Identificação e análise de progenitores miogênicos in vivo durante lesão muscular esquelética aguda por citometria de massa de célula única de alta dimensão

Skeletal muscle regeneration is a dynamic process driven by adult muscle stem cells and their progeny. Mostly quiescent at a steady state, adult muscle ...

identification-analysis-myogenic-progenitors-vivo-during-acute

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Método para a dissociação enzimática, rotulagem superfície e purificação por citometria de fluxo de fibro / adipogénicos e progenitores miogênica de músculo esquelético murino.

Purificação de Progenitores do músculo esquelético

Os principais tipos de células aderentes derivadas do músculo humano são células miogênicas e fibroblastos. Aqui, as populações de células são enriquecidas usando classificação de células ativadas por magnetismo com base no antígeno CD56. A imunomarcação subsequente com anticorpos específicos e o uso de técnicas de análise de imagem permitem a quantificação das características citoplasmáticas e nucleares em células individuais.

Isolamento e Quantitative Immunocytochemical caracterização de células Miogênica primários e fibroblastos de músculo-esquelético humano

Este manuscrito descreve um protocolo detalhado para induzir a regeneração do músculo esquelético aguda em ratos adultos e manipulações subsequentes dos músculos, como dissecção, corte, congelação, coloração de rotina e análise de células musculares área de secção transversal.

Indução da Aguda Skeletal regeneração muscular por cardiotoxina Injection

A autofagia ativa está associada à regeneração muscular produtiva, que é essencial para a ativação da célula tronco (MuSC). Aqui, fornecemos um protocolo para a detecção in situ de LC3, um marcador de autofagia em MuSCs MyoD-positivos de seções de tecido muscular de ratos controlados e feridos.

Coloração imunofluorescente in situ de autofagia em células estaminais musculares

Aqui, descrevemos uma metodologia para obter uma população pura de mioblastos humanos a partir do tecido muscular adulto. Essas células são usadas para estudar a diferenciação do músculo esquelético in vitro e, em particular, para estudar proteínas envolvidas na sinalização de Ca 2+ .

Isolamento de mioblastos humanos, avaliação da diferenciação miogênica e medição de entrada de cálcio armazenada

Diferenciação de músculo esquelético é um processo altamente dinâmico, que particularmente se baseia no posicionamento nuclear. Aqui, descrevemos um método para controlar movimentos de núcleos por imagens de células vivas durante a formação de diferenciação e myotube myoblast e executar uma caracterização quantitativa da dinâmica de núcleos extraindo informações de rastreamento automático.

Explorando a imagem ao vivo aos núcleos de pista durante a diferenciação de Myoblast e fusão

Nós apresentamos técnicas para isolar-se, cultivando, caracterizando, e diferenciando pilhas preliminares humanas do progenitor do músculo (hMPCs) obtidas do tecido esqueletal da biópsia do músculo.  os hmpcs obtidos e caracterizados através destes métodos podem ser usados para abordar subseqüentemente as perguntas da pesquisa relativas à miogenesis humana e à regeneração do músculo esqueletal.

Isolamento, cultura, caracterização e diferenciação de células progenitoras do músculo humano do procedimento de biópsia do músculo esquelético

Nós descrevemos um método in vivo para investigar a perda funcional de um gene específico em pilhas satélites usando uma combinação de ferimento mediado letal do músculo esqueletal e da injeção de um siRNA Self-entregando.

Analisando a função de célula satélite durante a regeneração do músculo esquelético por lesão cardiotoxina e injeção de self-entregando siRNA in vivo

Este protocolo descreve um método para isolar progenitores fibro-adipogênicos (FAPs) e progenitores miogênicos (MPs) do músculo esquelético de rato. A utilização do rato em modelos de lesão muscular proporciona maior disponibilidade tecidual do músculo atroférico para a análise e um repertório maior de métodos validados para avaliar a força muscular e a marcha em animais em movimento livre.

Identificação, Isolamento e Caracterização de Progenitores Fibro-Adipogênicos (FAPs) e Progenitores Miogênicos (MPs) em Músculo Esquelético no Rato

Neste protocolo é descrito um método de cultivo in vitro e análise funcional para células-tronco musculares, que preserva a maioria de suas interações com seu nicho endógeno.

Ensaio de cultura de myofibra única para a avaliação da funcionalidade de células-tronco musculares adultas Ex Vivo

A identificação precisa de células progenitoras fibro-adipogênicas (FAPs) e células-tronco musculares (MuSCs) é fundamental para estudar sua função biológica em condições fisiológicas e patológicas. Este protocolo fornece diretrizes para o isolamento, purificação e cultura de FAPs e MuSCs de músculos de camundongos adultos.

FACS-isolamento e Cultura de Progenitores Fibro-Adipogênicos e Células-Tronco Musculares de Músculo Esquelético não perturbado e lesionado

Aprenda a identificar progenitores miogênicos durante lesão muscular aguda usando citometria de massa de célula única em modelos murinos. Este método revela assinaturas moleculares únicas e dinâmicas de regeneração.

Identificação e análise de progenitores miogênicos in vivo durante lesão muscular esquelética aguda por citometria de massa de célula única de alta dimensão (Vídeo) | JoVE Journal

Identificação e análise de progenitores miogênicos in vivo durante lesão muscular esquelética aguda por citometria de massa de célula única de alta dimensão

Explorar mais vídeos