Name: Cirurgia de Bypass Duodenal-Jejunal em Camundongos Diabéticos Obesos Induzidos por Dieta (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-10-18T12:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Aprenda a realizar cirurgia de bypass duodenal-jejunal em camundongos obesos diabéticos induzidos por dieta. Este protocolo demonstra melhora no metabolismo da glicose e redução da resistência à insulina.

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Todas as etapas do protocolo descritas abaixo seguem as diretrizes do Comitê de Cuidados e Uso de Animais do Hospital Geral do Comando do Teatro Sul sob o número de aprovação 2020112501.
1. Preparação geral pré-operatória
NOTA: Trinta camundongos C57BL/6 machos de 6 semanas de idade foram comprados. Os camundongos foram alojados em um laboratório Specific Pathogen-Free (SPF) sob um ciclo claro/escuro de 12 h; temperatura de 22 ± 2 °C; e umidade, 55-65%. Os ratos tiveram acesso gratuito à água e foram alimentados com uma dieta de 60% de gordura por 6 semanas para induzir a obesidade. Uma injeção intraperitoneal de estreptozotocina 40 mg/kg foi administrada por 5 dias para induzir diabetes17. Entre os trinta camundongos, vinte e dois camundongos foram rastreados para glicemia aleatória &gt; 300 mg / dL e aleatoriamente designados para os grupos DJB (n = 15) e cirurgia simulada (n = 7). Oito camundongos foram excluídos do experimento devido à glicemia abaixo do padrão.
<ol><li>Jejue os camundongos por 8 h antes da cirurgia. Retire a água 2 h antes da cirurgia.</li>
	<li>Administre solução de pentobarbital sódico a 1% (6 mL / kg) e buprenorfina (1 mg / kg) por via intraperitoneal. Toque os dedos dos pés ou caudas dos ratos com uma pinça e certifique-se de que os ratos não apresentem espasmos ou tremores óbvios. Sob anestesia adequada, os camundongos podem respirar livremente sem oxigênio suplementar.</li>
	<li>Colocar os ratinhos em decúbito dorsal sobre um quadro esterilizado e sob um estereomicroscópio. Aplique pomada para os olhos nos olhos. Use um cobertor elétrico para manter os ratos aquecidos durante todo o procedimento. Use procedimentos estéreis, incluindo aventais cirúrgicos, luvas estéreis e instrumentos autoclavados.</li>
	<li>Em camundongos controle simulado, faça as duas incisões respectivamente no duodeno 1 cm abaixo do piloro e no jejuno 5 cm abaixo do Treitz e, em seguida, suture as incisões.</li>
</ol>2. Bypass jejunal duodenal: Procedimento cirúrgico
<ol><li>Aplique a pasta depilatória do xifóide no abdômen para remover os pelos dessa região. Limpe o creme e certifique-se de que a pele esteja limpa. Esfregue a área três vezes com esfoliação alternada de soluções de iodo e álcool.</li>
	<li>Cubra o camundongo com um campo estéril, deixando a área operacional exposta, e faça uma incisão de 2 cm do xifóide ao abdômen.</li>
	<li>Use um afastador abdominal para expor a cavidade abdominal. Afaste a gordura abdominal usando um cotonete úmido e mova o fígado para o lado cefálico para expor totalmente o estômago e os intestinos.</li>
	<li>O estômago e o piloro estão abaixo do fígado, e o ligamento de Treitz está no duodeno distal. Dupla ligação do jejuno, 5 cm distal ao ligamento de Treitz com sutura de seda 6-0 (Figura 1A). Corte o jejuno no ponto médio das duas ligaduras e suture o coto jejunal com uma sutura de seda 10-0 (Figura 1B). NOTA: Evite torcer os vasos sanguíneos mesentéricos.</li>
	<li>Puxe a incisão jejunal proximal 5 cm ao longo do intestino até o jejuno para criar uma anastomose jejunal-jejunal. Alinhe os dois intestinos horizontalmente e, em seguida, use uma sutura de seda 10-0 para criar a anastomose lateral (Figura 1C). NOTA: Durante a cirurgia, mantenha o intestino úmido com solução salina para reduzir a perda de água. Isso evitará que o intestino se enrole e facilitará a sutura.</li>
	<li>Prenda ambas as extremidades do intestino e corte a incisão no mesmo comprimento (Figura 1D). Suturar a segunda camada da parede intestinal posterior com uma sutura contínua de espessura total. NOTA: O comprimento da incisão é de aproximadamente 0.5-0.6 cm e a distância da agulha é de ~0.5 mm.</li>
	<li>Prenda as duas extremidades do intestino e suture a parede anterior do intestino. Suturar a primeira camada da parede anterior com uma sutura contínua simples e a segunda camada com uma sutura horizontal em varo (Figura 1E-F). NOTA: Limpe o conteúdo intestinal com cotonetes para evitar infecção da cavidade abdominal.</li>
	<li>Puxe a incisão jejunal distal no duodeno 1 cm abaixo do piloro para criar uma anastomose duodenal-jejunal (Figura 1G). Suture-o usando o mesmo método das etapas 2.6-2.7 (Figura 1H-K). NOTA: Verifique a sutura no canto da anastomose para reduzir o vazamento da anastomose.</li>
	<li>Ligue o intestino com a micro pinça e corte o intestino com a micro tesoura. Ligar duplamente o duodeno com uma sutura de seda 6-0, a 2 mm da extremidade distal da anastomose duodenal-jejunal. Corte no ponto médio com microtesoura e suture o coto com uma sutura de seda 10-0 (Figura 1L). NOTA: Os vasos gastroduodenais ramificam-se perpendicularmente à cabeça do pâncreas e são adjacentes ao piloro, exigindo exploração cuidadosa dos vasos na seção transversal. A confluência do ducto colédoco e duodeno foi localizada, tomando cuidado para não danificar o pâncreas ou o ducto colédoco.</li>
	<li>Enxágue a cavidade abdominal com solução salina a 30 °C. Retorne o intestino para a cavidade abdominal. Suturar o músculo e a pele separadamente com uma seda 6-0. Em seguida, desinfete a pele com iodóforo.</li>
	<li>Após a cirurgia, injete solução salina a 30 °C (30 mL/kg) por via subcutânea nas costas para evitar a desidratação. Injete penicilina (10 mg / kg) por via intramuscular para prevenir a infecção.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig01.jpg"> Figura 1: Procedimento de bypass duodenal-jejunal. (A) Localização do jejuno 5 cm distal ao ligamento de Treitz. (B) Ligue duas vezes o jejuno com seda 6-0, cortada no meio da ligadura. (C) Anastomose jejunal-jejunal. (D) Faça uma incisão de 0,5-0,6 cm e suture a parede posterior. (E-F) Anastomose jejunal-jejunal completa. (G) Puxe o jejunal distal para o duodeno 1 cm abaixo do piloro. (H) Anastomose duodenal-jejunal. (I) Corte a anastomose duodenal-jejunal com uma incisão de 0,5-0,6 cm e suture a parede posterior com uma sutura contínua simples. (JK) Anastomose duodenal-jejunal completa. (L) A 2 mm da anastomose distal à duodenal-jejunal, ligar duas vezes o duodeno com seda 6-0 e cortar no meio da ligadura. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
3. Cuidados gerais pós-operatórios
<ol><li>Após a cirurgia, coloque os ratos em um cobertor elétrico para evitar hipotermia. Permita que os ratos rastejem livremente até ficarem totalmente acordados antes de retornar às gaiolas.</li>
	<li>No dia pós-operatório, restrinja a comida e a água e injete 2 mL de solução salina por via subcutânea no dorso dos camundongos. No primeiro dia de pós-operatório, administrar 10 mL de glicose a 10% e uma bebida funcional (proporção de 1:1) sem alimentos e injetar 1 mL de soro fisiológico por via subcutânea.</li>
	<li>No segundo e terceiro dias de pós-operatório, alimentar os camundongos com uma mistura de 20 mL de glicose a 10% e uma bebida funcional. Após o quarto dia, dê aos ratos água pura e uma dieta rica em gordura. A alimentação de transição deve ser realizada de acordo com o estado de recuperação pós-operatória na seguinte ordem: solução, semilíquido ou alimento sólido.</li>
	<li>Analgesia pós-operatória: injete buprenorfina (0,1 mg/kg) a cada 12 h dos dias 1 a 3 e, em seguida, uma vez ao dia até o dia 5.</li>
	<li>Após a cirurgia, observe as condições de alimentação, atividade, fezes e cicatrização de feridas dos camundongos.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig02.jpg"> Figura 2: O diagrama da cirurgia DJB. (A) Anastomose duodenal-jejunal. (B) Anastomose jejunal-jejunal. (C) Membro biliopancreático. (D) Membro digestivo. (E) Membro comum. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66049/66049fig03.jpg"> Figura 3: Anatomia da cirurgia de DJB. (A) Anastomose duodenal-jejunal. (B) Anastomose jejunal-jejunal. (C) Membro biliopancreático. (D) Membro digestivo. (E) Membro comum. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66049/66049fig03large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
4. Avaliação pós-operatória dos parâmetros metabólicos
<ol><li>Medição do peso corporal<ol><li>Jejue os camundongos por 8 h antes da medição. Pese os camundongos semanalmente na segunda-feira antes e depois da cirurgia por 8 semanas.</li>
	</ol></li>
	<li>Medição da ingestão alimentar<ol><li>Abriga um rato em cada gaiola. Meça a quantidade de alimento sólido em cada gaiola antes e depois de 24 h. A diferença entre os dois valores representa a ingestão alimentar diária.</li>
	</ol></li>
	<li>Medição aleatória da glicemia<ol><li>Às 8:00 da manhã da segunda-feira semanal de medição, colete uma gota de sangue da ponta da cauda do camundongo e aplique-a em uma tira de glicose inserida no glicosímetro.</li>
	</ol></li>
	<li>Teste oral de tolerância à glicose<ol><li>Oito semanas após a cirurgia de DJB, jejuar os camundongos por 8 h antes do teste oral de tolerância à glicose. Colete uma gota de sangue da ponta da cauda do rato e coloque-a em uma tira de glicose inserida no glicosímetro. Administre uma dose oral de 20% de D-glicose (2 g / kg). Meça os níveis de glicose no sangue em 0, 15, 30, 60, 90, 120, 150 e 180 minutos após a gavagem.</li>
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Lascar, N., Brown, J., Pattison, H., Barnett, A. H., Bailey, C. J., Bellary, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2+diabetes+in+adolescents+and+young+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Diabetes+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Type 2 diabetes in adolescents and young adults.</a> Lancet Diabetes Endocrinol. 6 (1), 69-80 (2018).</li>
<li>Song, Y., Zhao, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bibliometric+analysis+of+metabolic+surgery+for+type+2+diabetes%3A+current+status+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Updates+Surg%22%5BJournal%5D)">Bibliometric analysis of metabolic surgery for type 2 diabetes: current status and future prospects.</a> Updates Surg. 74 (2), 697-707 (2022).</li>
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<li>Akalestou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+successful+rat+model+of+duodenal-+jejunal+bypass%3A+A+detailed+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Establishing a successful rat model of duodenal- jejunal bypass: A detailed guide.</a> Lab Anim. 53 (4), 362-371 (2019).</li>
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<li>Rao, R. S., Rao, V., Kini, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+bariatric+surgery--a+review+of+the+surgical+techniques+and+postsurgical+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Obes+Surg%22%5BJournal%5D)">Animal models in bariatric surgery--a review of the surgical techniques and postsurgical physiology.</a> Obes Surg. 20 (9), 1293-1305 (2010).</li>
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<li>Kleinert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+obesity+and+diabetes+mellitus%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Animal models of obesity and diabetes mellitus.</a> Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 140-162 (2018).</li>
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<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Close-up+on+lab+animal+microsurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Close-up on lab animal microsurgery.</a> Lab Anim (NY). 35 (1), 43(2006).</li>
<li>Couceiro, J., Castro, R., Tien, H., Ozyurekoglu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Step+by+step%3A+microsurgical+training+method+combining+two+nonliving+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Step by step: microsurgical training method combining two nonliving animal models.</a> J Vis Exp. (99), e52625(2015).</li>
<li>Nasser, K. M., Wahba, H. A., Kamal, E., El-Makhzangy, A. M., Bahaa, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+model+for+training+and+improvement+of+the+surgical+skills+in+endolaryngeal+microsurgery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Voice%22%5BJournal%5D)">Animal model for training and improvement of the surgical skills in endolaryngeal microsurgery.</a> J Voice. 26 (3), 351-357 (2012).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Afastador abdominal</td><td>F.S.T</td><td>17000-03</td><td>Colibri Retractor -3cm, afastador faixa 1.5cm/3cm de comprimento</td></tr><tr><td>solução de pentobarbital de sódio a 1%</td><td>Guangzhou Chemical Reagent Factory</td><td>/</td><td>&nbsp; Dissolveu 500mg de pentobarbital sódico em pó em 50ml de soro fisiológico para obter solução de pentobarbital sódica a 1%.</td></tr><tr><td>Benzilpenicilina sódica para injeção</td><td>North China Pharmaceutical Company Ltd.</td><td>F2062121</td><td>Penicilina</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Guangzhou Reagente Químico Fábrica</td> <td>/</td> <td>Analgesia</td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd</td> <td>/</td> <td>Analgésico</td></tr><tr><td>Tampão de citrato de sódio de ácido cítrico</td><td>LEAGENE</td><td>R00522</td><td>Solução tampão</td></tr><tr><td>Cotonetes</td><td>HaoZheng Medical</td><td>60220610</td><td>Cotonetes</td></tr> <tr><td>de algodãoPasta depilatória</td><td>Veet</td><td>AAPR-S222</td><td>Creme de depilação</td></tr><tr><td>Etiqueta de orelha</td><td>ZEYA</td><td>SUS304</td><td>Marca de orelha</td></tr><tr><td>Cobertor elétrico</td><td>ZOSEN</td><td>ZS-CWDRT</td><td>Almofada térmica</td></tr><tr><td>Balança eletrônica</td><td>WETTLER TOLEDO</td><td>20060902-6</td><td>Meça o peso</td></tr><tr><td>Pó nutricional enteral</td><td>Abbott Laboratories</td><td>/</td><td>Nutrition powder</td></tr><tr><td>Eye pomada</td><td>Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd</td> <td>/</td> <td>Proteja os olhos</td></tr><tr><td>Glicosímetro</td><td>Roche</td><td>6993788001</td><td>Avalie a glicose no sangue</td></tr><tr><td>Graphpad Prism versão 9.4.1</td><td>Software GraphPad</td><td>versão 9.4.1</td><td>Software para análise estatística</td></tr><tr><td>Dieta rica em gordura (Dieta de roedores purificados com alto teor de gordura [60FDC])</td><td>Dyets</td><td>112252</td><td>60kcal% Dieta rica em gordura</td></tr><tr><td>Micro Fórceps</td><td>Jinzhong Medical</td><td>18-1140</td><td>Micro fórceps</td></tr><tr><td>Micro porta-agulha</td><td>Jinzhong Medical</td><td>EMT-160-Z</td><td>Porta-agulha</td></tr><tr><td>Micro Tesoura</td><td>Jinzhong Medical</td><td>YBC010</td><td>Micro tesoura</td></tr><tr><td>Microscópio câmera</td><td>LAPSUN</td><td>E 2000</td><td>Vídeo</td></tr><tr><td>Tesoura oftálmica</td><td>Jinzhong Medical</td><td>Y00030</td><td>Tesoura cirúrgica</td></tr><tr>Fábrica de reagentes químicos <td>de Pentobarbital</td><td>Guangzhou</td> <td>/</td><td></td></tr> <tr><td>injeção de cloreto de sódio</td> de narcose <td>Guangzhou Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>B21L0301</td><td>NaCl 0,9%</td></tr> <tr><td>Microscópio estéreo</td><td>ZEISS</td><td>Stemi 305</td><td>Estereomicroscópio binocular</td></tr><tr><td>Estreptozotocin</td><td>Sigma</td><td>S110910-1g</td><td>STZ</td></tr><tr><td>Linha de sutura</td><td>LINGQIAO SUTURA</td><td>ZS-LQPMRZ5 / 0</td><td>Prolene 6/0, Prolene 10/0</td></tr><tr><td>Fórceps de tecido</td><td>Jinzhong Medical</td><td>H1701</td><td>Pinça cirúrgica</td></tr></tbody></table>

cirurgia de bypass duodenal-jejunal em camundongos diabéticos obesos induzidos por dieta

Duodenal-Jejunal Bypass Surgery in Diet-Induced Obese Diabetic Mice

Condições gerais O tempo operatório médio para o procedimento de DJB foi de 84,5 ± 2,6 min. Quinze camundongos foram submetidos à cirurgia de DJB, nove camundongos sobreviveram. Conforme mostrado na Tabela 1, a maioria dos óbitos ocorreu durante a cirurgia ou nos 7 dias seguintes. As causas de morte pós-operatória foram sangramento (n=2) no 1º dia de pós-operatório, vazamento de anastomose (n=1) no 4º dia de pós-operatório, obstrução da anastomose (n=2) no 7º dia de pós-operatório e c...

Cirurgia de Bypass Duodenal-Jejunal em Camundongos Diabéticos Obesos Induzidos por Dieta

The prevalence of obesity and type 2 diabetes is a serious global health concern. Obesity is a major pathogenic factor in type 2 diabetes, cardiovascular ...

duodenal-jejunal-bypass-surgery-in-diet-induced-obese-diabetic-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Numerosos estudos utilizando modelos de ratos bypass gástrico foram recentemente realizados para desvendar os mecanismos fisiológicos subjacentes de Roux-en-Y operações de bypass gástrico. Este artigo visa demonstrar e discutir os detalhes técnicos e experimental da nossa publicado modelo do rato de bypass gástrico para compreender as vantagens e limitações desta ferramenta experimental.

Roux-en-Y operação de bypass gástrico em ratos

Este vídeo descreve um procedimento de cirurgia bariátrica-Y-de-Roux. Isso envolve o corte do jejuno - a porção média do intestino - para gerar dois membros intestinais. A alça biliar está ligada à alça intestinal existente e a alça alimentar está ligada ao estômago, criando um bypass gástrico. O bypass gástrico criado aqui ajuda a diminuir a absorção de nutrientes e reduz eficientemente o peso corporal.

Procedimento de bypass gástrico em Y-de-Roux: um procedimento cirúrgico bariátrico para ressecção gástrica em modelo murino

A cirurgia bariátrica é a maneira mais eficiente de reduzir o peso corporal e as complicações metabólicas mortais (diabetes, obesidade e dislipidemia) frequentemente associadas à obesidade mórbida. Modelos de camundongos de cirurgia bariátrica representam um recurso único para decifrar os mecanismos moleculares por trás dos efeitos benéficos dessas cirurgias sobre diabetes, hipertensão e dislipidemia.

Técnicas de gastrectomia vertical e modificado Roux-en-Y bypass gástrico em ratos

Este protocolo demonstra isolamento de manchas murinas e semeadura em um andaime decelularizado. As ilhotas suportadas em andaimes foram transplantadas para a almofada de gordura epididimática de ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina (STZ). As ilhotas sobreviveram no local do transplante e revertearam a condição hiperglicêmica.

Transplante de islotes apoiado em andaimes na almofada de gordura epidídmica de ratos diabéticos

A seguir descreve o desempenho de gastrectomia de manga vertical em camundongos. Este é um tipo de cirurgia de perda de peso que envolve a remoção de aproximadamente 70% do estômago.

Um modelo murino de gastrectomia de manga Vertical

Este protocolo é para o desempenho de uma anastomose bypass gástrico (OAGB) em ratos. O operador executa uma bolsa gástrica longa e tubular-grampeado, seguida por anastomose costurado à mão. Para este modelo, o operador reproduz a mesma relação entre biliopancreatic e membro comum em seres humanos; Portanto, o membro biliopancreatic mede 35 cm.

1-anastomose Bypass gástrico (OAGB) em ratos

A prevalência de diabetes e obesidade está aumentando continuamente em todo o mundo. Os mecanismos entre diabetes, obesidade e sua mortalidade associada e co-morbidades precisam ser mais aprofundados. Aqui, apresentamos um protocolo para gastrectomia de manga (SG) em animais como um modelo pré-clínico descomplicado da cirurgia bariátrica.

Gastrectomia de manga em camundongos usando clipes cirúrgicos

O bypass gástrico Roux-en-Y (RYGB) é realizado para tratar obesidade e diabetes. No entanto, os mecanismos subjacentes à eficácia do RYGB não são totalmente compreendidos, e os estudos são limitados pela dificuldade técnica que leva à alta mortalidade em modelos animais. Este artigo fornece instruções sobre como executar RYGB em ratos com altas taxas de sucesso.

Um protocolo para bypass gástrico Roux-en-Y em ratos usando grampos lineares

A derivação duodeno-ileal de anastomose única (SADI-S) é um procedimento bariátrico emergente com importantes efeitos metabólicos. Neste artigo, apresentamos um modelo confiável e reprodutível de SADI-S em camundongos.

Modelo de Bypass Duodeno-Ileal de Anastomose Única com Gastrectomia Vertical em Camundongos

Determinação do esvaziamento gástrico com um não-invasivo...

Estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanóico teste de respiração Ácido

Aprenda a realizar cirurgia de bypass duodenal-jejunal em camundongos obesos diabéticos induzidos por dieta. Este protocolo demonstra melhora no metabolismo da glicose e redução da resistência à insulina.

Cirurgia de Bypass Duodenal-Jejunal em Camundongos Diabéticos Obesos Induzidos por Dieta

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