Name: Avaliação microbiológica rápida no local para doenças infecciosas pulmonares (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-03-01T13:40:00.000+00:00
Duration: 3 min 22 s
Description: Aprenda o método M-ROSE para avaliação microbiológica rápida de infecções pulmonares. Esta técnica de coloração celular e imagem microscópica auxilia médicos na identificação de patógenos em tempo real.

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Agradecemos o projeto de incentivo e orientação de desempenho da instituição de Pesquisa Científica de Chongqing (jxyn-2021-1-15 e jxyn-2021-2-6) pelo apoio financeiro.

O ensaio clínico foi aprovado pelo Comitê de Aprovação do Hospital de Medicina Tradicional Chinesa de Chongqing (nº 2022-ky-31). O caso típico envolveu um paciente diagnosticado com pneumonia por Pneumocystis, e o consentimento informado foi obtido do paciente.
1. Requisitos de equipamentos e materiais para ROSE
<ol><li>Equipamento: Consulte o arquivo Tabela de Materiais para o equipamento usado neste protocolo. NOTA: A utilização de um microscópio citológico dedicado e um sistema de imagem gráfica é imperativa (Figura 1A).</li>
	<li>Preparação de materiais (ver Tabela de Materiais).<ol><li>Prepare lâminas de cultura de células estéreis (com forte adesão celular), papel absorvente, luvas de látex sem pó, agulhas de seringa descartáveis de 2,5-5 mL e coloque o conjunto completo de soluções de coloração Diff Quik (DQ) em frascos de coloração de vidro com tampas seladas para facilitar o manuseio (Figura 1).</li>
	</ol></li>
</ol>2. Fluxo de trabalho M-ROSE
<ol><li>Preparação de lâminas citológicas NOTA: Existem muitas maneiras de preparar slides, e a seguir estão vários métodos de preparação comumente usados.<ol><li>Rolar slides NOTA: Garanta uma perda mínima de amostra de tecido durante este processo.<ol><li>Extraia as partículas de tecido usando uma agulha de seringa descartável com capacidade de 2,5-5 mL (Figura 2A).</li>
			<li>Espalhe uma área circular, de aproximadamente 1 cm de diâmetro e espessura moderada, da seção interna para a externa de um terço da extremidade corada (a extremidade exibindo forte fixação celular) na lâmina de citologia estéril.</li>
		</ol></li>
		<li>Escovar slides NOTA: Este método é aplicável a amostras obtidas usando escovas de células convencionais, escovas de células antipoluição ou escovas de células ultrafinas, bem como amostras semilíquidas, como escarro e fluidos corporais viscosos.<ol><li>Estenda a cabeça da escova e aplique-a no terço distal da lâmina de vidro citológica estéril (a lâmina tem fortes propriedades de adesão celular) para obter uma área retangular de cerca de 2 cm x 1 cm com espessura moderada.</li>
		</ol></li>
		<li>Lâminas de pulverização<ol><li>Posicione a agulha de punção a um terço da extremidade corada de uma lâmina de citologia estéril com adesão celular robusta.</li>
			<li>Aplique pressão de ar na ponta da agulha perfurante e insira-a do lado interno para fora, formando uma área circular com espessura média medindo aproximadamente 1 cm de diâmetro.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Coloração citológica da lâmina NOTA: A Organização Mundial da Saúde (OMS) recomenda a coloração rápida da lâmina citológica ROSE usando o corante de Diff5. O corante Diff pode ser reutilizado, mas não repetido muitas vezes. Se houver sedimentos, eles devem ser filtrados após o uso. O tingimento muito profundo pode ser adequadamente descolorido por metanol ou álcool, de preferência não mais tingido. Se o tingimento for muito profundo ou muito raso, o tempo de tingimento ou a concentração do líquido de trabalho devem ser ajustados; o valor do pH tem uma certa influência no tingimento, e a lâmina deve estar limpa e livre de poluição ácida e alcalina. Tanto a solução Diff A quanto a solução Diff B são voláteis e devem ser seladas e armazenadas após o uso.<ol><li>Mergulhe a lâmina em solução de Diff A por 10-30 s ( Figura 2B ) e, em seguida, enxágue-a no banho de corante PBS para remover o excesso de solução de Diff A e sacuda suavemente qualquer tampão restante ( Figura 2C ).</li>
		<li>Em seguida, mergulhe a lâmina na solução Diff B por 20-40 s (Figura 2E).</li>
		<li>Por fim, limpe a lâmina no tanque de tingimento de água (Figura 2F), seque e limpe o líquido residual da lâmina com papel absorvente (Figura 2D) e termine de tingir. NOTA: O M-ROSE permite a visualização direta de microrganismos patogênicos e facilita a avaliação da qualidade da amostra respiratória, permitindo a discriminação entre infecção e não infecção, bem como infecção e contaminação, o que tem significado orientador para a avaliação da gravidade e prognóstico da infecção. A seção de discussão cobrirá esse aspecto, pois não envolve nenhum procedimento experimental.</li>
	</ol></li>
</ol>

Aprimorando o tratamento da infecção pulmonar usando o M-ROSE

<ol><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnostic+value+of+endoscopic+ultrasound-guided+fine+needle+aspiration+with+rapid+on-site+evaluation+performed+by+endoscopists+in+solid+pancreatic+lesions%3A+A+prospective%2C+randomized+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Diagnostic value of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration with rapid on-site evaluation performed by endoscopists in solid pancreatic lesions: A prospective, randomized controlled trial.</a> J Gastroenterol Hepatol. 37 (10), 1975-1982 (2022).</li>
<li>Bruno, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+cost+effectiveness+of+rapid+on+site+examination+%28ROSE%29+in+management+of+patients+with+mediastinal+lymphadenopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Efficacy and cost effectiveness of rapid on site examination (ROSE) in management of patients with mediastinal lymphadenopathies.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17 (11), 1517-1522 (2013).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiology+rapid+on-site+evaluation%3A+a+better+method+for+Mucoid+Pseudomonas+Aeruginosa+diagnosis+in+bronchiectasic+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Microbiology rapid on-site evaluation: a better method for Mucoid Pseudomonas Aeruginosa diagnosis in bronchiectasic patients.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (5), 1738-1742 (2022).</li>
<li>Tao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+microbiological+rapid+on-site+evaluation+in+respiratory+intensive+care+units%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Application of microbiological rapid on-site evaluation in respiratory intensive care units: a retrospective study.</a> Ann Transl Med. 10 (1), 7(2022).</li>
<li>Yan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+value+of+microbiology+rapid+on-site+evaluation+of+sepsis+caused+by+pulmonary+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Rev+Med+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">The value of microbiology rapid on-site evaluation of sepsis caused by pulmonary infection.</a> Eur Rev Med Pharmacol Sci. 27 (12), 5862-5868 (2023).</li>
<li>Muri, R., Trippel, M., Borner, U., Weidner, S., Trepp, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+rapid+on-site+evaluation+on+the+quality+and+diagnostic+value+of+thyroid+nodule+fine-needle+aspirations%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">The impact of rapid on-site evaluation on the quality and diagnostic value of thyroid nodule fine-needle aspirations.</a> Thyroid. 32 (6), 667-674 (2022).</li>
<li>Wang, Z., Shi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+rapid+on-site+evaluation+in+contemporary+pediatric+interventional+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Practical+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Application of rapid on-site evaluation in contemporary pediatric interventional respiratory diseases.</a> Chinese Journal of Practical Pediatrics. 12, 470-475 (2019).</li>
<li>Shah, P. L., Herth, F. J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Respiration%22%5BJournal%5D)">Progress in interventional pulmonology.</a> Respiration. 95 (5), 287-288 (2018).</li>
<li>Hsia, D., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Clin+North+Am%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology.</a> Med Clin North Am. 95 (6), 1095-1114 (2011).</li>
<li>Moore, A. J., Mercer, R. M., Musani, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Advances in interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 271-280 (2018).</li>
<li>Majid, A., Fernandez-Bussy, S., Folch, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology+and+solitary+pulmonary+nodule%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Bronconeumol%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology and solitary pulmonary nodule.</a> Arch Bronconeumol. 54 (10), 497-498 (2018).</li>
<li>Ali, M. S., Sorathia, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palliative+care+and+interventional+pulmonology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chest+Med%22%5BJournal%5D)">Palliative care and interventional pulmonology.</a> Clin Chest Med. 39 (1), 57-64 (2018).</li>
<li>Czarnecka, K., Yasufuku, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interventional+pulmonology%3A+focus+on+pulmonary+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Interventional pulmonology: focus on pulmonary diagnostics.</a> Respirology. 18 (1), 47-60 (2013).</li>
<li>Schacht, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration%3A+performance+of+biomedical+scientists+on+rapid+on-site+evaluation+and+preliminary+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytopathology%22%5BJournal%5D)">Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: performance of biomedical scientists on rapid on-site evaluation and preliminary diagnosis.</a> Cytopathology. 27 (5), 344-350 (2016).</li>
<li>Pearson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+on-site+evaluation+of+fine-needle+aspiration+by+non-cytopathologists%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis+of+diagnostic+accuracy+studies+for+adequacy+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Rapid on-site evaluation of fine-needle aspiration by non-cytopathologists: A systematic review and meta-analysis of diagnostic accuracy studies for adequacy assessment.</a> Acta Cytol. 62 (4), 244-252 (2018).</li>
<li>Arimura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryobiopsy+with+endobronchial+ultrasonography+using+a+guide+sheath+for+peripheral+pulmonary+lesions+and+DNA+analysis+by+next+generation+sequencing+and+rapid+on-site+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Investig%22%5BJournal%5D)">Cryobiopsy with endobronchial ultrasonography using a guide sheath for peripheral pulmonary lesions and DNA analysis by next generation sequencing and rapid on-site evaluation.</a> Respir Investig. 57 (2), 150-156 (2019).</li>
<li>Gianella, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+rapid+on-site+cytologic+evaluation+during+endobronchial+ultrasound-guided+transbronchial+needle+aspiration+in+malignant+and+nonmalignant+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Utility of rapid on-site cytologic evaluation during endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration in malignant and nonmalignant disease.</a> Acta Cytol. 62 (5-6), 380-385 (2018).</li>
<li>Natella, V., Cozzolino, I., Sosa Fernandez, L. V., Vigliar, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+nodes+fine+needle+cytology+in+the+diagnosis+of+infectious+diseases%3A+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Infez+Med%22%5BJournal%5D)">Lymph nodes fine needle cytology in the diagnosis of infectious diseases: clinical settings.</a> Infez Med. 20, 12-15 (2012).</li>
<li>Baughman, R. P., Spencer, R. E., Kleykamp, B. O., Rashkin, M. C., Douthit, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ventilator+associated+pneumonia%3A+quality+of+nonbronchoscopic+bronchoalveolar+lavage+sample+affects+diagnostic+yield%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Ventilator associated pneumonia: quality of nonbronchoscopic bronchoalveolar lavage sample affects diagnostic yield.</a> Eur Respir J. 16 (6), 1152-1157 (2000).</li>
<li>Petrone, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+cytotechnician+training+influence+the+accuracy+of+EUS-guided+fine-needle+aspiration+of+pancreatic+masses%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Liver+Dis%22%5BJournal%5D)">Does cytotechnician training influence the accuracy of EUS-guided fine-needle aspiration of pancreatic masses.</a> Dig Liver Dis. 44 (4), 311-314 (2012).</li>
</ol>

Os autores não relatam conflitos de interesse.

A pneumologia intervencionista é um ramo valioso da doença respiratória moderna; em particular, tem sido amplamente utilizado no diagnóstico de doenças pulmonares 8,9. Nos últimos anos, a pneumologia intervencionista diagnóstica tem prosperado devido ao aumento da prevalência de tumores malignos pulmonares, infecções por patógenos mais resistentes a medicamentos que ocorrem no trato respiratório inferior e solicitações exigentes de diagnóstico de doenças respiratórias desconcertantes e críticas 10,11,12. A eficiência do diagnóstico intervencionista depende de fatores como tamanho e localização anatômica das áreas focais, taxas de complicações e número de locais de biópsia e doenças subjacentes, promovendo o uso clínico de inúmeras tecnologias e instalações avançadas13. O ROSE recebeu atenção notável e emergiu rapidamente como uma "técnica de acompanhamento em tempo real" para diagnóstico em pneumologia intervencionista.
O ROSE foi projetado para avaliação rápida, diagnóstico preliminar e priorização da satisfação da amostra durante procedimentos como punção, biópsia e escovação. Ele fornece feedback para orientar os avanços tecnológicos subsequentes 14,15,16,17. O M-ROSE, um ramo do ROSE, concentra-se principalmente na avaliação do fundo microbiano, em vez de avaliar a malignidade das células teciduais5. O método M-ROSE é uma técnica de avaliação rápida e não uma ferramenta diagnóstica, portanto, sua eficácia diagnóstica não deve ser exagerada. Sua aplicação clínica engloba principalmente os seguintes aspectos: identificação visual de certos microrganismos patogênicos, diferenciação entre infecção e contaminação e discriminação entre infecção e não infecção7.
Após a coloração rápida, o núcleo celular do tecido exibiu uma tonalidade vermelho-arroxeada, enquanto o citoplasma exibiu uma cor roxo-azulada. Bactérias e fungos apareceram em azul, resultando em um contraste distinto entre células de tecido e patógenos7. O M-ROSE, pode demonstrar um certo nível de capacidade na identificação de bactérias e fungos. Especificamente, exibe uma alta taxa de positividade para Aspergillus, cryptococcus, Pneumocystis jiroveci e outros fungos 3,18. No entanto, apresenta limitações quando se trata de reconhecer patógenos com pequeno volume e diâmetro ou agentes patogênicos intracelulares. É fundamental ressaltar que o diagnóstico de qualquer doença deve ser baseado em uma avaliação abrangente que englobe a condição fundamental do paciente, manifestações clínicas, exames de imagem e outros fatores, em vez de depender apenas da identificação microscópica de microrganismos patogênicos.
O M-ROSE, também oferece vantagens na identificação de infecção e contaminação, como a avaliação da qualidade das amostras de fluido de lavagem alveolar. Nos departamentos onde as condições permitem, a avaliação do fluido de lavagem à beira do leito pode ser realizada por centrifugação e coloração. Amostras qualificadas de lavado alveolar demonstram que a proporção de células escamosas entre todas as células (excluindo hemácias) sob microscopia de baixa potência é inferior a 1%, as células epiteliais colunares são inferiores a 5% e as hemácias são inferiores a 10% (excluindo fatores relacionados a trauma ou sangramento)19. O exame microscópico do histórico citológico nos facilitará a fazer avaliações oportunas.
Além disso, o M-ROSE pode auxiliar na distinção entre lesões infectadas e não infectadas5. Nas lesões infectadas, muitas vezes há infiltração de neutrófilos, macrófagos e linfócitos pelas células inflamatórias, com observação ocasional de fagocitose de neutrófilos. Por outro lado, as lesões não infectadas geralmente não apresentam infiltração de células inflamatórias.
O protocolo aqui apresentado demonstra o processo de operação do M-ROSE; Através da interpretação do fundo microbiológico, o diagnóstico preliminar pode ser feito ou o diagnóstico diferencial pode ser reduzido. Como nossos achados sugerem, o diagnóstico de PPC requer evidências confirmadas de Pneumocystis jiroveci, que não devem ser baseadas em manifestações clínicas e de imagem, mesmo em pacientes sintomáticos de alto risco. A identificação microscópica das formas asco e trófica é a evidência mais intuitiva. A eficiência diagnóstica é amplamente determinada pelo método de coloração da amostra. Historicamente, as colorações convencionais, como Wright's-Giemsa, prata hexaamina e azul de toluidina, estão disponíveis para PCP, mas são demoradas e têm menor sensibilidade. Neste caso, o diagnóstico imediato de PPC foi confirmado no primeiro dia de transferência do paciente para a UTI com o uso de ROSE. O Diff-quick mostrou sua vantagem na identificação de pneumocystis, caracterizado por uma estrutura clara, contraste acentuado e fácil identificação do asco (Figura 5A).
Na aplicação da medicina étnica, o ROSE também tem um valor significativo. Por exemplo, em doenças supurativas, os médicos podem identificar uma gama diversificada de células inflamatórias dominadas principalmente por neutrófilos dentro do fundo microbiológico5. Consequentemente, medicamentos com propriedades de limpeza de calor e desintoxicantes podem ser selecionados como tratamentos potenciais para essas condições, como madressilva, dente-de-leão e patrinia, entre outros.
Como o ROSE é um programa adicional que não precisa ser selecionado em pneumologia intervencionista, a realização do ROSE deve aumentar os custos econômicos e de mão de obra. É discutível que o ROSE deva ser usado regularmente. Em termos de benefícios da economia, o tempo e os custos trabalhistas são o que nos preocupa. A principal necessidade de mão de obra adicional é o avaliador. A avaliação ROSE pode ser realizada por um citotecnólogo, patologista ou clínico. Os citotecnólogos são o pessoal mais provável para o procedimento ROSE. No entanto, na prática clínica, os clínicos substituem o papel, mas isso pode exigir uma certa base de treinamento15. Um estudo anterior mostrou que um programa de treinamento poderia ajudar a melhorar a precisão da avaliação de adequação realizada pelos médicos e eliminar variáveis de confusão20. Além disso, o M-ROSE, como técnica de diagnóstico morfológico, possui fatores subjetivos em seu relato de resultados. Os médicos devem fazer uma avaliação abrangente com base em informações clínicas adicionais.
Recomendamos que hospitais com instalações adequadas e profissionais treinados considerem a implementação do procedimento ROSE em seus departamentos respiratórios ou UTIs, pois pode facilitar a avaliação precoce de doenças respiratórias críticas desafiadoras e orientar o tratamento clínico de forma eficaz.

A técnica de avaliação rápida no local (ROSE) é um método altamente eficiente empregado no campo dos procedimentos de doenças pulmonares. Permite amostragem em tempo real e intervenção diagnóstica, facilitando a análise citológica imediata1. Essa abordagem inovadora envolve a impressão de uma parte da amostra de tecido em uma lâmina, preservando sua integridade. Uma das principais vantagens do ROSE reside em sua capacidade de facilitar a interpretação imediata das informações clínicas por meio de técnicas especializadas de microscopia. Isso abrange a análise da morfologia celular, classificação, quantificação, determinação de proporções constituintes, avaliação de arranjo, análise de correlação, avaliação de fundo e identificação de objetos estranhos. Ao integrar todos esses dados com as informações clínicas do paciente, o ROSE desempenha um papel fundamental na avaliação da adequação da amostragem e na orientação de procedimentos e técnicas de intervenção em tempo real2.
Como subsidiária da tecnologia ROSE, a tecnologia M-ROSE se concentra principalmente na aquisição do histórico microbiológico das lesões-alvo, em vez de discernir entre células benignas e malignas 3,4. Por um lado, o M-ROSE permite a identificação microscópica de patógenos como Aspergillus, Cryptococcus, Pneumocystis e Candida5. Por outro lado, tem implicações orientadoras significativas na avaliação da qualidade da amostra respiratória, distinguindo doenças infecciosas de não infecciosas, discriminando infecção de contaminação, bem como avaliando a gravidade e o prognóstico da infecção 6,7. Por exemplo, dentro de uma amostra respiratória, a coexistência de bactérias exibindo morfologia idêntica ao lado de células inflamatórias infiltrantes indica uma infecção; Por outro lado, a presença de múltiplas bactérias morfologicamente diversas acompanhadas por células epiteliais sugere contaminação. A capacidade de analisar informações clínicas de forma abrangente e prever resultados torna o M-ROSE uma ferramenta inestimável em procedimentos de doenças pulmonares.
Em conclusão, o ROSE serve como um transportador citológico crucial que aumenta significativamente a eficiência e a precisão do diagnóstico de doenças pulmonares. Seus recursos multifacetados contribuem para melhorar os resultados dos pacientes, garantindo uma intervenção oportuna e facilitando o diagnóstico preciso por meio de amostragem em tempo real e técnicas de intervenção diagnóstica. No entanto, é importante observar que esses avanços dependem da obtenção de amostras qualificadas. Aqui, apresentamos um protocolo M-ROSE padronizado que engloba a preparação da lâmina, técnicas de coloração e diretrizes de interpretação. Este protocolo serve como uma referência inestimável para os médicos estabelecerem planos precisos de avaliação e tratamento, facilitando a tomada de decisões sobre o manuseio subsequente de espécimes-alvo.

<table><tbody><tr><td>Microscópio citológico</td><td>Olympus Corporation</td><td>CX43</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik (DQ) soluções de coloração</td><td>Besso Biotechnology Co. LTD</td><td>G1541</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas de seringa descartáveis de 2,5-5 mL</td><td>Shandong Zhu Pharmaceutical Group</td><td>20183150304</td><td></td></tr><tr><td>Luvas de látex sem pó</td><td>Henan Yadu Industrial Co., LTD</td><td>20182140728</td><td></td></tr><tr><td>Célula estéril indústria</td><td>de Jinan Preret e comércio Co., LTD</td><td>7101</td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação microbiológica rápida no local para doenças infecciosas pulmonares

Microbiological Rapid On-Site Evaluation for Pulmonary Infectious Diseases

O início imediato da terapia anti-infecciosa empírica é crucial em pacientes que apresentam infecção pulmonar inexplicada. Embora a aquisição de imagens seja relativamente simples na prática clínica, sua falta de especificidade geralmente requer testes adicionais demorados, como cultura de escarro, cultura de fluido de lavagem broncoalveolar ou sequenciamento genético para identificar a etiologia subjacente da doença com precisão. Além disso, a eficácia limitada do tratamento anti-infeccioso empírico pode contribuir para o uso indevido de antibióticos. Avanços recentes na interpretação do histórico microbiano em lâminas de avaliação rápida no local (ROSE) permitiram que os médicos obtivessem amostras prontamente por meio de broncoscopia (por exemplo, lavagem alveolar, escovação da mucosa, pinça de tecido), facilitando a coloração e a interpretação à beira do leito que fornece informações essenciais sobre o histórico microbiano. Consequentemente, isso estabelece uma base para o desenvolvimento de tratamento anti-infeccioso direcionado e planos individualizados de terapia medicamentosa. Com uma melhor compreensão de quais patógenos estão causando infecções em tempo real, os médicos podem evitar antibióticos desnecessários de amplo espectro que contribuem para a resistência aos antibióticos. O estabelecimento de um fluxo de trabalho M-ROSE rápido e padronizado nos departamentos de medicina respiratória ou unidades de terapia intensiva ajudará muito os médicos a formular estratégias de tratamento precisas para os pacientes, o que tem implicações clínicas significativas.

Em um caso típico, um homem de 63 anos se apresentou ao hospital com tosse, febre e dor no peito. O paciente foi previamente diagnosticado com síndrome nefrótica, caracterizada por proteinúria e edema, e recebeu tratamento com prednisona e tacrolimo por um longo tempo. Os achados laboratoriais iniciais demonstraram contagem de leucócitos de 10,49 x 109/L, contagem de neutrófilos de 8,87 x 109/L, proteína C reativa no sangue total e concentrações de (1-3)-β-D-glucano de 155,81 mg/L e 249,7 pg/mL. A tomografia computadorizada (TC) de tórax mostrou opacificação em vidro fosco com localização difusa, bilateral e central (Figura 3A). O tratamento anti-infeccioso inicial com cefoperazona tazobactam foi ineficaz e seus sintomas foram agravados por cansaço cardíaco, falta de ar e dispneia após o exercício; a repetição da TC não mostrou melhora significativa (Figura 3B). Em seguida, o paciente foi transferido para a unidade de terapia intensiva (UTI) para ventilação mecânica e submetido a broncoscopia. A amostragem de foco foi acessada sob a orientação de navegação virtual, e três amostras de biópsia de fórceps foram coletadas (Figura 4). O ROSE estava disponível para avaliação microscópica imediata do tecido, e o diagnóstico de Pneumocystis jiroveci foi confirmado (Figura 5A). O paciente recebeu imediatamente tratamento antifúngico com sulfametoxazol (1,92 g, q6h); a coloração subsequente (Figura 5B-E) confirmou esse diagnóstico. No entanto, a TC repetida ainda não mostrou melhora significativa (Figura 3C). O paciente recebeu carbofungina (no primeiro dia de 70 mg e seguido de 50 mg por dia), metilprednisolona (80 mg por dia) e imunoglobulina (10 g por dia) para infecção fúngica. Os sintomas foram aliviados rapidamente e o paciente continuou o tratamento de acompanhamento.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig01.jpg"> Figura 1: Equipamentos e materiais. (A) Microscópio citológico e sistema de imagem gráfica. (B) Solução de coloração Diff Quik (DQ) A. (C) Solução de coloração Diff Quik (DQ) B. (D) Luvas de látex sem pó. (E) Lâminas de cultura de células estéreis. (F) Agulhas de seringa descartáveis de 2,5-5 mL. (G) Papel absorvente. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig02.jpg"> Figura 2: Fluxo de trabalho M-ROSE. (A) Imprimindo o slide. (B) Mergulhe a lâmina em solução de Diff A por 10-30 s. (C) Enxágue a lâmina no banho de corante PBS para remover o excesso de solução de Diff A. (D) Seque e limpe o líquido residual da lâmina com papel absorvente. (E) Mergulhe a lâmina na solução Diff B por 20-40 s. (F) Limpe a lâmina no tanque de tingimento de água. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig02large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig03.jpg"> Figura 3: Imagens de TC de tórax. (A) Na admissão. (B) No dia da transferência para a UTI. (C) Após o tratamento com sulfametoxazol <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig03large.jpg" target="_blank">, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig04.jpg"> Figura 4: Localização do segmento basal posterior do lobo inferior do pulmão direito por VBN. (A) Brônquio principal direito. (B) Brônquio médio direito. (C) Segmento basal posterior do brônquio do lobo inferior do pulmão direito. (d) Mapa 3D do VBN. (E) Mapa coronal da TC de tórax. (F) Mapa axial da TC de tórax. (G) Mapa sagital da TC de tórax <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig04large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66059/66059fig05.jpg"> Figura 5: Fotos documentando a aparência de pneumocystis em vários métodos de coloração. (A) ROSE 100 x 10; Seta branca: cistos contendo ascósporos. (B) Hematoxilina e eosina (H-E), 60 x 10. (C) Azul Alcian, 60 x 10. (D) GIEMSA, 40 x 10. (E) Prata Hexam, 20 x 10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66059/66059fig05large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

O protocolo aqui demonstra um fluxo de trabalho rápido de avaliação microbiológica rápida no local (M-ROSE) rápido e padronizado, incluindo três etapas: confecção de lâminas, coloração e interpretação. Este protocolo ajudará os médicos a tomar decisões clínicas rápidas.

Avaliação microbiológica rápida no local para doenças infecciosas pulmonares

The prompt initiation of empirical anti-infective therapy is crucial in patients presenting with unexplained pulmonary infection. Although imaging ...

Nossa intenção é introduzir um método de avaliação rápida em tempo real, M-ROSE, para ajudar os médicos a formular estratégias de tratamento precisas para pacientes com infecções pulmonares. A tecnologia de coloração rápida de células e um sistema de imagem microscópica de alta definição são usados atualmente para avançar na pesquisa no campo. O número de estudos clínicos sobre o M-ROSE é relativamente limitado.O maior desafio é a interpretação dos resultados do M-ROSE, que requer pessoal e pessoal treinado, pois é difícil identificar visualmente os patógenos e diferenciar entre infecção e contaminação. Com uma melhor compreensão dos patógenos que causam infecções em tempo real, os médicos podem evitar antibióticos desnecessários de amplo espectro que contribuem para a resistência aos antibióticos e como tratamento de infecções pulmonares. O M-ROSE, é em tempo real e altamente eficiente.O M-ROSE permite a identificação microscópica de patógenos como aspergillus, cryptococcus, numerosos e candida. Ele tem implicações orientadoras significativas no dimensionamento da qualidade básica respiratória, distinguindo infecções de doenças não infecciosas, discriminando, infecção de contaminação, bem como avaliando infecção, gravidade e prognóstico.

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Medicine

Medicina

O teste Xpert MTB/RIF integra descontaminação da amostra, operação sem contato manual, processamento da amostra em tempo real e PCR hemi-aninhada ultra-sensível para a detecção simultânea de Mycobacterium tuberculosis e resistência à rifampicina, seja em escarro expelido ou em sedimentos de escarro concentrados, em aproximadamente duas horas. O teste é padronizado e requer apenas infraestrutura laboratorial moderada e treinamento.

Diagnóstico da tuberculose pulmonar com o teste Xpert MTB / RIF

Fonte: Perinbam, K., e Siryaporn, A. Um ensaio rápido de virulência bacteriana baseado em imagem usando ameba. J. Vis. Exp. (2018)Este vídeo demonstra um método rápido baseado em imagens para avaliar a virulência bacteriana, incubando amebas com bactérias presas à superfície ou planctônicas, aplicando uma pastilha de agarose de calceína-acetoximetil (calceína-AM) e imagens de fluorescência para detectar danos à célula hospedeira.

Um ensaio rápido baseado em imagem para triagem de virulência bacteriana induzida por superfícies

Detecção rápida e exata de patógenos no local, especialmente de solo-carregadas patógenos vegetais, é crucial para prevenir mais produção de inóculo e proliferação de doenças de plantas no campo. O método desenvolvido aqui, usando um sistema de detecção de PCR em tempo real portátil permite o diagnóstico no local em condições de campo.

Deteção Molecular no local de Phytopathogens solo-carregadas usando um sistema portátil de PCR em tempo real

Um laboratório rapidamente destacáveis, fora da rede foi projetado e construído para configurações globais remotas, com recursos limitados. São explorados as características e aspectos críticos dos módulos de laboratório avançado logisticamente, expansível, multifuncional. Uma lista de verificação para um fluxo de trabalho básico de laboratório e um protocolo para um teste de diagnóstico viral respiratório são desenvolvidos e apresentados.

Gerenciamento remoto do laboratório: Diagnósticos de vírus respiratório

Este protocolo apresenta ensaio rápido de suscetibilidade antimicrobiana (AST) em até 2,5 h por imagem de espalhamento Raman estimulado por célula única do metabolismo de D2O. Este método aplica-se a bactérias no ambiente urinário ou no sangue total, o que é transformador para AST fenotípica de célula única rápida na clínica.

Teste Rápido de Suscetibilidade a Antimicrobianos por Imagem de Dispersão Raman Estimulada da Incorporação de Deutério em uma Única Bactéria

O protocolo resume as melhores práticas para minimizar a carga biológica microbiana em um ambiente de sala limpa e inclui estratégias como monitoramento ambiental, monitoramento de processo e teste de esterilidade do produto. É relevante para instalações de fabricação e teste que são necessárias para atender aos padrões atuais de boas práticas de tecidos e aos padrões atuais de boas práticas de fabricação.

Estratégias de Controle e Monitoramento Microbiano para Ambientes de Salas Limpas e Terapias Celulares

A EUCAST desenvolveu um protocolo direto de teste de suscetibilidade antimicrobiana (AST) para hemoculturas automatizadas. No entanto, sua dependência da identificação microbiana baseada em espectrometria de massa pode ser evitada usando um protocolo de preparação direta de inóculo em um sistema automatizado de identificação microbiana. Essa abordagem pode fornecer relatórios de AST dentro de 24 horas após a coleta da amostra.

Identificação microbiana direta usando um sistema automatizado de identificação microbiana para facilitar o método EUCAST RAST sem espectrometria de massa

Vários patógenos bacterianos podem causar infecções do trato respiratório e levar a sérios problemas de saúde se não forem detectados com precisão e tratados prontamente. A detecção rápida e precisa desses patógenos por meio de amplificação isotérmica mediada por loop fornece gerenciamento e controle eficazes de infecções do trato respiratório em ambientes clínicos.

Detecção rápida de patógenos bacterianos que causam infecções do trato respiratório inferior por meio de amplificação isotérmica mediada por loop baseada em chip microfluídico

Nós descrevemos uma metodologia que combina cultura de células automatizado com alto conteúdo de imagem para visualizar e quantificar vários processos celulares e estruturas, de uma forma de alto rendimento. Tais métodos podem auxiliar na anotação de genomas ainda mais funcional, bem como identificar redes de doença genética e alvos terapêuticos potenciais.

Screening alto teor em Doenças Neurodegenerativas

Os ratos de algodão são extremamente excitáveis e têm uma forte resposta de fuga ou luta. Um método de manejo otimizado para reduzir o estresse dos animais é descrito, o que tornará os ratos de algodão mais acessíveis como um modelo pré-clínico.

Manuseio do Rato Cotton em Estudos para a avaliação pré-clínica de Vírus Oncolíticos

Aprenda o método M-ROSE para avaliação microbiológica rápida de infecções pulmonares. Esta técnica de coloração celular e imagem microscópica auxilia médicos na identificação de patógenos em tempo real.

Avaliação microbiológica rápida no local para doenças infecciosas pulmonares

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